试剂标准操作规程（SOP）-TBA

文件号：AA第1版页数PAGE5共5页试剂标准操作规程项目总胆汁酸（TBA）方法第五代循环酶法，速率法仪器H7600系列编写人日期审核人日期批准人日期文件分发部门和/或个人本规程自年月日起实施 目录检测原理标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂与校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理胆汁酸与3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及氧化型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）发生反应，生成3-酮类固醇以及还原型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。3-酮类固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成胆汁酸及Thio-NAD。通过循环酶而使微量的胆汁酸量得到放大。通过测定生成物Thio-NADH在405nm吸光度的变化，可测量样品中胆汁酸的浓度。2．标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂：血浆使用肝素作为抗凝剂。2.4标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。3．试剂3.1试剂：本科使用上海华臣生化技术有限公司TBA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂包装规格见试剂说明书。试剂1β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核酸磷酸2.2mmol/LGOOD'S缓冲液pH7.10.66mmol/L试剂2NADH2.9mmol/L3α-HSD3α-羟类固醇去氢酶≥5000U/LGOOD'S缓冲液pH7.00.65mmol/L3.2：校准血清使用上海华臣生化技术有限公司提供的复合校准血清或使用TBA的专用标准液。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存20天。试剂储存在18-22℃稳定15天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。4．仪器H7600系列型号仪器。5．操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。ΔAΔA测定ΔA标准c＝ΧCΔA标准式中：c——测定总胆汁酸浓度，μmol/L；ΔA测定——标本管吸光度变化；ΔA标准——标准管吸光度变化；CO——校准血清总胆汁酸浓度，μmol/L；ΔA＝A2－A17．操作性能7.1精密度：批内CV<5%，批间CV<7%。7.2准确度：测量结果在上海华臣质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。7.3灵敏度：总胆汁酸浓度为：100μmol/L时，显色吸光度为0.235～0.256。7.4可报告范围：血清与试剂用量之比为4:240：80时，测定上限为180μmol/L。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值0～12μmol/L。9．临床意义本试剂盒用于体外测定血清中的总胆汁酸含量。TBA是由肝脏分解代谢，能反映肝实质损伤。一旦肝细胞发生病变，血中胆汁酸浓度极易升高。急性肝炎、慢性活肝、肝硬化、肝癌TBA结果明显升高。与ALT进行比较，急性肝炎、慢性活肝