试剂标准操作规程（SOP）-HCY

文件号：AA第1版页数PAGE3共5页试剂标准操作规程项目同型半胱氨酸（HCY）方法酶循环速率法仪器H7600系列编写人日期审核人日期批准人日期文件分发部门和/或个人本规程自年月日起实施 目录检测原理标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3．试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂与校准血清的稳定性4．仪器5．操作6．计算7．操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8．参考值9．临床意义附录A:参数1.检测原理同型半胱氨酸（HCY）在胱硫醚β-合成酶（CBS）催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚。L-胱硫醚在胱硫醚β-分解酶（CBL）催化下又生成HCY、丙酮酸和NH3。该循环反应生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶LDH的催化下与NADH+反应，生成的NAD+的速率与样品中HCY含量成正比。CBS丝氨酸+同型半胱氨酸———→L-胱硫醚CBLL-胱硫醚———→同型半胱氨酸+丙酮酸+NH3LDH丙酮酸+NADH+———→乳酸+NAD+340nm处测定NADH+降低速率可以测得HCY的含量。标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂：不使用抗凝剂。2.4标本处理：血清在-20C可保存2周。3．试剂3.1试剂：本科使用上海华臣生物技术有限公司HCY试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂包装规格见试剂说明书。试剂1（R1）：乳酸脱氢酶（LDH）>800KU/L丝氨酸（SER）1.3mmol/LNADH1mmol/l试剂2（R2）：胱硫醚β-合成酶（CBS）>20KU/L胱硫醚β-分解酶（CBL）>10KU/L稳定剂适量3.2：校准血清使用上海华臣生物技术有限公司提供的HCY校准液。校准频次：全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存20天。试剂储存在18-22℃稳定15天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为淡黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。HCY校准液储存在2-8℃至标签所示失效日期。4．仪器H7600系列型号仪器。5．操作样品为血清，速率法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6．计算ΔA/min×Vt×1000 HCY(umol/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率；e——摩尔吸光系数；Vt——反应液总体积（ml）；d——1比色杯光径（cm）；1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；7．操作性能7.1精密度：批内CV<6%，批间CV<10%。7.2准确度：测量结果在上海华臣生物质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。7.3灵敏度：HCY浓度为25umol/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.126～0.154。7.4可报告范围：血清与试剂用量之比为16.5:250:25时，测定范围为0～50umol/L。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值4.0～15.4umol/L9．临床意义同型半胱氨酸在临床上的应用主要作为心血管疾病，尤其是冠状动脉