（高清版）DB51∕T 1079-2010 饲料中呕吐毒素的测定 高效液相色谱法

DB51/T1079—2010饲料中呕吐毒素的测定高效液相色谱法2010-06-01发布2010-07-01I前言 Ⅱ1范围 12规范性引用文件 13原理 14试剂和溶液 1 1 27分析步骤 28结果计算 29精密度 2附录A(资料性附录) 3Ⅱ本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、张静、李云、冯娅、魏敏、赵立军。1DB51/T1079-2010饲料中呕吐毒素的测定高效液相色谱法本标准规定了测饲料中呕吐毒素的含量的高效液相色谱法(HPLC)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。本标准中检出限为0.3mg/kg。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备试样经纯水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，浓缩，用高效液相色谱仪-紫外检测器检测，外标法计算呕吐毒素含量。除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水的规定。4.3聚乙二醇8000(PEG8000)。4.4呕吐毒素标准品：含量大于98%。4.4.1标准贮备液：精密称取10mg呕吐毒素标准品，用乙腈溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期6个月。4.4.2标准工作溶液：分别准确移取呕吐毒素贮备液，用流动相配制成标准工作溶液：0.3μg/mL、1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL,10.0μg/mL。置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1个月。4.5呕吐毒素免疫亲和柱。5.4超纯水处理器。5.5涡旋混合器。5.6高效液相色谱仪：配备紫外检测器。5.80.45μm滤膜。26试样制备按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1试样溶液的制备7.1.1提取称取25g试样(精确至0.01g)于锥形瓶中，加入5g聚乙二醇8000(4.3),100mL水，振荡提取30min,离心，取上清液过滤，滤液待净化(浓度较高时滤液应用水稀释后待净化，以免小柱超载)。7.1.2净化将免疫亲和柱中缓冲液排出，用1mL水过柱，准确吸取2.0mL提取液以1滴/秒的速度通过免疫亲和柱，用5mL水淋洗，抽干柱子，用2mL甲醇(4.2)洗脱。洗脱液60℃氮气吹干，准确加入流动相(7.2.3)500μL,涡旋30s,过0.45μm滤膜，上机测定。7.2色谱条件7.2.1色谱柱：C₁8柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。7.2.2柱温：30℃。7.2.3。7.2.5检测器：紫外检测器(或二极管阵列检测器),检测波长220nm。7.2.6进样量：40μL。7.3测定按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上级测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正外标法定量。8结果计算试样中呕吐毒素的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：V——上机定容体积，单位为毫升(mL);As——呕吐毒素标准溶液对应的色谱峰面积；A——试样溶液对应的色谱峰面积；Cs——呕吐毒素标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);m——试样质量，单位为克(g)