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母兔的同期发情与阴道涂片检查及超排反应与抽吸法采卵技术

实验目的通过本实验，掌握雌性动物发情周期的调控机理、同期发情与超数排卵的基本原理、雌性动物阴道涂片技术和抽取法采卵技术，为今后胚胎生物技术的学习打下基础。实验动物：成年母兔实验药品：

PMSG、FSH、HCG、氯前列烯醇；缓释剂PVP；PBS缓冲液、CCM抽卵液；瑞氏染液、吉姆萨染液实验器材：动物（兔）保定台、解剖器械、细胞培养皿、实体显微镜、电光显微镜、恒温水浴锅、超净生物工作台等实验技术路线实验内容与方法1、成年母兔的空孕检查和预备饲喂（5-7天）。2、母兔同期发情及阴道涂片检查：用氯前列烯醇对母兔进行同期发情处理后，然后对未作激素处理前和处理后的各个阶段，用生理盐水棉棒进行母兔阴道涂片，观察涂片上母兔生殖道黏液及细胞类型，并分析原因。未发情发情母兔外阴变化发情前期（proestrum）发情期（oestrum）发情后期（metaestrum）间情期（diestrum）3、成年母兔的超排处理：采用PMSG+HCG、FSH+HCG、FSH+PVP+HCG不同激素组合处理及不同剂量水平处理两个因素进行母兔卵巢的卵泡发育调控（3天）。

时间流程安排第1天第2天第3天第4天第5天第6天上午外阴观察阴道涂片①FSH注射②PMSG注射③FSH+PVP注射①FSH注射①FSH注射HCG注射下午外阴观察阴道涂片PG注射外阴观察阴道涂片①FSH注射①FSH注射①FSH注射解剖注意：上午下午的注射时间请要间隔12h氯前列烯醇：0.02mg/只FSH：10、30、50IU/只·次，2次/天，连续3天PMSG：80、100、120IU/只HCG：120IU/只（耳静注）4、母兔解剖：观察母兔子宫变化（质地、颜色、大小）、卵巢变化（大小、颜色、排卵点、可见未成熟卵泡数等），并做好记录统计。母兔子宫变化卵泡血体5、输卵管冲卵：用CCM液在母兔输卵管内冲洗出排出的成熟卵母细胞，在实体显微镜观察、记录并统计。6、抽取法采卵：摘取母兔卵巢，用PBS液洗净后，再用灭菌注射器吸取CCM液后穿刺卵巢上的卵泡，快速抽取卵母细胞，然后在实体显微镜下观察、记录并统计。抽吸法采卵操作实验记录1、同期发情效果母兔外阴特征阴道涂片结果PG处理前PG处理后PG处理前PG处理后1组2组3组4组5组2、母兔解剖结果子宫卵巢质地颜色大小颜色排卵点未成熟卵泡数左侧右侧左侧右侧1组2组3组4组5组3、冲卵结果左侧卵巢右侧卵巢排卵点冲出卵子数A级卵子B/C级卵子排卵点冲出卵子数A级卵子B/C级卵子1组2组3组4组5组作业根据你的实验结果，请作出以下分析：1、母兔发情后

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