脑膜炎细菌课件

流行性脑脊髓膜炎及细菌性脑脊髓膜炎实验室病原学检测方法2/24/2025病理学基础脑脊髓膜：由三层膜组成，保护脑和脊髓软脑膜蛛网膜硬脑膜脑（脊髓）膜炎:

软脑膜和蛛网膜炎症，脑脊液呈化脓性改变（脑膜）脑炎：脑组织炎症，多为病毒引起。2/24/2025山东省立医院形态学观察生物化学特征和鉴定血清分型及免疫学分类分子生物学相关检测技术细菌检测技术2/24/2025山东省立医院实验室常用方法细菌形态镜下观察菌落形态观察乳胶凝集试验CSF沉淀物的革兰染色和乳胶凝集试验可以作为脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌（三种病原体）引起的细菌性脑膜炎的初步诊断。2/24/2025山东省立医院乳胶试剂盒在待检标本上滴加乳胶悬液混匀轻摇反应观察结果2/24/2025山东省立医院革兰氏染色革兰氏染液结晶紫冲洗碘液酒精脱色复染滤纸吸水100倍油镜2/24/2025山东省立医院脑膜炎奈瑟菌镜下观察

脑脊液沉淀物或纯菌落通过革兰染色在显微镜下观察细菌形态:脑膜炎奈瑟菌镜下是革兰阴性双球菌，成卵圆形和肾形，0.8µm×0.6µm常成对排列。2/24/2025山东省立医院菌落形态观察脑膜炎奈瑟菌在培养18～24小时后菌落直径约1～3mm、圆形、表面突起、光滑、湿润、边缘整齐、半透明、不溶血、无色素、有荚膜黏液样。在血琼脂上是灰白色比在巧克力琼脂培养基上更不透明。2/24/2025山东省立医院生化实验糖类产酸奈瑟球菌属和嗜血菌属鉴定拭条（APINH）2/24/2025山东省立医院糖类产酸

奈瑟菌属细菌产酸是通过氧化碳水化合物：选用四种单糖糖管（葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖）脑膜炎奈瑟菌产酸不产气，氧化葡萄糖、麦芽糖，不氧化蔗糖、半乳糖。2/24/2025山东省立医院奈瑟菌属部分菌种生化特征

产酸来源菌种葡萄糖麦芽糖半乳糖蔗糖脑膜炎奈瑟菌++--淋球菌+---干燥奈瑟氏菌++-+乳糖奈瑟氏菌+++-摩拉克氏菌----2/24/2025山东省立医院奈瑟球菌属和嗜血菌属鉴定拭条

APINH是奈瑟菌属、嗜血菌属的标准鉴定系统，可进行酶反应和糖发酵等12个鉴定试验，按试剂盒的说明书操作。4麦氏单位加水湿润环境刮取菌落0.85%生理盐水放入槽内滴加菌液石蜡油封闭盖上盖子2/24/2025山东省立医院流感嗜血杆菌病原学：流感嗜血杆菌简称流感杆菌，属孤菌科嗜血杆菌属。形态呈无色透明（或灰白色），圆形、光滑，边缘整齐，露滴状，且散出鼠穴的气味菌落，有荚膜菌株的菌落呈轻度粘稠。有荚膜菌株形成光滑的菌落，并且该菌落比同样过夜培养的无荚膜的菌落大2/24/2025山东省立医院流感嗜血杆菌镜下形态流感嗜血杆菌是一大群无动力、无芽胞和鞭毛、呈球杆状、杆状或长丝状等多形性的革兰阴性杆菌，两端钝圆，长0.3μm～1.5μm，宽为0.3μm-0.4μm在无CO2环境中培养则菌落较小。2/24/2025山东省立医院B-H培养基鉴定（X＋V因子鉴定）0.5麦氏单位悬浮液；脑心浸液（B-H）琼脂平板上；V因子，X因子，X＋V因子2/24/2025山东省立医院嗜血杆菌属（Haemophilus）菌名生长需求溶血作用V因子X因子流感嗜血杆菌++-埃及嗜血杆菌++-嗜沫嗜血杆菌-+-变形嗜血杆菌-+-副流感嗜血杆菌+--副变形嗜血杆菌+--鸡嗜血杆菌+--猪嗜血杆菌+--副溶血嗜血杆菌+-+溶血嗜血杆菌+++杜克嗜血杆菌-+±革兰阴性短小杆菌，呈多态性。无鞭毛，不形成芽孢。人工培养必须有新鲜血液成分（X因子和V因子)。仅寄生于人或动物的粘膜上。2/24/2025山东省立医院流感嗜血杆菌VX因子生长状态2/24/2025山东省立医院流感嗜血杆菌API生化结果2/24/2025山东省立医院链球菌链球菌分类甲型溶血性链球菌：称甲型溶血或

溶血，

溶血环中的红细胞并未完全溶解。多为条件致病菌。乙型溶血性链球菌：称乙型溶血或

溶血，

溶血环中的红细胞完全溶解，致病力强丙型链球菌：无溶血环，一般不致病2/24/2025山东省立医院链球菌链球菌分类兰氏分类：按多糖类抗原（C抗原）将链球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S和T群(其中缺I、J群)，近年又增加U、V群，共20群，每个群有1个或多个种。其中引起人类感染的90%链球菌属于A群，而A群链球菌大部分是乙型溶血性链球菌。2/24/2025山东省立医院链球菌镜下特征肺炎链球菌呈矛头状，成双排列，故又名肺炎双球菌，革兰染色阳性2/24/2025山东省立医院链球菌镜下特征刚分离的猪链球菌，典型的革兰氏阳性链球菌，链长达二十多个2/24/2025山东省立医院奥普托欣敏感性试验如果一个α溶血菌株分离物晕轮大于14mm时，即为肺炎链球菌；分离物晕轮介于12mm与14mm之间，还应该进行胆汁溶解试验进一步确认。2/24/2025山东省立医院金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus

aureus

Rosenbach)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶2/24/2025山东省立医院金黄色葡萄球菌菌落特征金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1mm-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。2/24/2025山东省立医院金黄色葡萄球菌镜下形态典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。显微图像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。2/24/2025山东省立医院金黄色葡萄球菌生化特征血浆凝固酶试验：玻片法：5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。。加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。有大量气泡产生者为阳性。2/24/2025山东省立医院大肠杆菌大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性2/24/2025山东省立医院大肠肝菌菌落特征在血琼脂平板上，有些菌株产生β型溶血。在鉴别性或选择性培养基上形成有颜色、直径2～3mm的光滑型菌落。2/24/2025山东省立医院大肠杆菌镜下形态革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢2/24/2025山东省立医院大肠杆菌生化学鉴定

该菌在双糖铁斜面上经培养后，斜面和底层均为黄色，产酸产气；或仅产酸不产气，无动力API20E生化鉴定系统2/24/2025山东省立医院新型隐球菌新型隐球菌（Cuyitococcus

Neofonmans）又名溶组织酵母菌(Torula

Histolytica)，是土壤，鸽类，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中，可侵犯人和动物，一般为外源性感染，但也可能为内源性感染，对人类而言，它通常是条件致病菌。氟胞嘧啶新型隐球菌性脑膜炎(cryptococcalmeningitis)是由新型隐球菌感染脑膜及脑实质所引起的亚急性或慢性脑膜炎。是真菌性脑膜炎最常见的一种。2/24/2025山东省立医院新型隐球菌菌落特征在沙保氏琼脂及血琼脂培养基上，于25及37℃不能生长，而非病原性隐球菌在37℃不能繁殖。培养数日后生成酵母型菌落，初呈白色，1周后转淡黄或棕黄、湿润粘稠，状似胶汁。2/24/2025山东省立医院新型隐球菌墨汁染色本菌在组织液或培养物中呈较大球形，直径可达5-20um，菌体周围有肥厚的荚膜，折光性强，一般染料不易着色，用墨汁阴性显影法镜检，可见到透明荚膜包裹着菌细胞，菌细胞常有出芽，但不生成假菌丝。2/24/2025山东省立医院“脑炎脑膜炎症候群”涉及病原菌

汇总篇2/24/2025山东省立医院按革兰染色分类

革兰染色阳性球菌：肺炎链球菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌革兰染色阴性杆菌：大肠杆菌、流感嗜血杆菌革兰染色阴性球菌：脑膜炎奈瑟菌新型隐球菌？？2/24/2025山东省立医院按血平板溶血状况

α型溶血：肺炎链球菌、（猪链球菌、大肠杆菌）β型溶血：金黄色葡萄球菌、猪链球菌γ型溶血：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌

2/24/2025山东省立医院“脑炎脑膜炎症候群”涉及病原菌

疑问篇2/24/2025山东省立医院几个质控的问题

培养基的质控：生化反应的质控：2/24/2025山东省立医院几个非典型的问题

菌落生长状况不典型：生化反应结果不典型：2/24/2025山东省立医院几个细节的问题

抗生素使用前后革兰染色OP实验的培养条件培养基的更细节问题2/24/2025山东省立医院菌株标本上送菌株：菌种保存管、牛