无菌部位标本的细菌检验岳阳王华洪讲解

无菌部位标本的细菌检验岳阳职业技术学院王华洪一、血液及骨髓标本的细菌学检验（一）标本的采集1.皮肤消毒

♦严格执行三步法2.采血部位：

♦肘静脉

♦肘动脉或股动脉采血

♦婴幼儿采颈静脉血

3.采集方法

♦严格无菌操作4.采血量

♦比例：1:10

♦成人8～10ml/瓶

♦儿童1～5ml/瓶

♦婴儿1～2ml/瓶

♦骨髓1～2ml/瓶

疾病24小时内24小时后菌血症、败血症2～3份细菌性心内膜炎3份（1～2小时）2份不明原因发热2～3份2份5.采血时间和頻度6.标本的运送和保存立即送检，室温保存，切勿冷藏（二）微生物学检验

1.常见病原菌2.

检验程序培养基性状改变疑似病原菌均匀混浊，指示剂变色革兰阴性杆菌微混浊，有绿色变化肺炎链球菌有菌膜，均匀混浊有绿色荧光铜绿假单胞菌上层澄清，下层有沉淀链球菌细胞层自上而下的溶血溶血性链球菌混浊、有胶冻状凝固现象葡萄球菌灰白色菌膜、培养基清晰枯草芽孢杆菌或类白喉棒状杆菌3.检验方法（1）普通细菌的培养与鉴定

♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表阳性培养瓶直接药敏试验分离培养涂片染色镜检细菌鉴定药敏试验报告报告报告♦阳性培养瓶处理♦阴性培养瓶处理于12～18小时、第3天和第7天至少做3次盲传，7天无细菌生长报告阴性（2）特殊细菌培养与鉴定♦脑膜炎奈瑟菌血液骨髓胰胨肉汤或专业培养瓶巧克力培养基（35℃,

5％～10％C02）鉴定：葡萄糖、麦芽糖发酵阳性药敏：CLSI标准脑膜炎奈瑟菌菌落（2）特殊细菌培养与鉴定♦草绿色链球菌血液骨髓血琼脂平板（35℃,

5％～10％C02、需氧和厌氧环境）胰酶解酪蛋白大豆肉汤培养瓶鉴定药敏试验草绿色链球菌草绿色链球菌菌落7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周培养无草绿色链球菌生长”血液骨髓葡萄糖胆汁或胆盐肉汤MAC、SS35℃培养鉴定;KIA、生化反应、血清学试验等药敏试验血液骨髓肝浸液肉汤肝浸液平板或血平板（35℃,

5％～10％C02）涂片、生化鉴定血清学试验♦伤寒沙门菌及其他沙门菌♦布鲁菌培养4周无细菌生长，报告“经4周培养无细菌生长”标本牛心脑浸液或肝浸液血平板或巧克力平板35℃、厌氧培养生化鉴定♦厌氧菌♦真菌：真菌增菌肉汤增菌→沙保弱培养基（25℃或37℃）→菌落特征→生化鉴定、报告♦L型细菌高渗液体培养基→血琼脂平板和L型细菌培养基→典型“油煎蛋”菌落→返祖、鉴定4.结果报告采取分级和限时报告制度♦初报告：将镜检结果电话通知主管医生♦预报告：6～8小时内报告直接药物敏感结果♦最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议♦阴性报告（三）临床意义♦排除杂菌污染，从血液和骨髓标本中检出任何细菌都具有临床意义♦葡萄球菌是血液感染最常见的细菌♦草绿色链球菌是亚急性心内膜炎的主要致病菌♦尿路、胆道、胃肠道炎症粘膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌多见♦产单核李斯特菌主要引起新生儿败血症二、脑脊液标本的细菌学检验（一）标本的采集1.采集部位♦腰椎穿刺法2.采集量♦3～5ml3.标本的运送和保存♦15分钟内送检，最迟不能超过1小时。疑似苛养菌感染时，应保温送检（二）微生物学检验1.常见病原菌2.检验程序肺炎链球菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌3.检验方法（1）涂片检查

♦革兰染色

♦抗酸染色♦墨汁负染色

新型隐球菌结核杆菌（2）分离培养与鉴定♦普通细菌标本→血琼脂平板和巧克力平板（35℃，CO2环境）→可疑菌落→形态、生化试验及血清学试验、药敏试验♦结核分枝杆菌标本→罗-琴培养基或米氏7H-10培养基→35℃温箱孵育→可疑菌落→鉴定♦真菌标本→血平板或沙保弱培养基→25℃及37℃孵育→可疑菌落→形态、镜检及生化反应等鉴定。♦厌氧菌标本→血平板、厌氧血琼脂平板和硫乙醇酸钠肉汤→35℃需氧、厌氧培养→可疑菌落→染色镜检及生化鉴定、药敏试验4.结果报告

♦初报告：报告标本直接涂片结果♦预报告：报告标本直接药敏试验结果♦最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议♦阴性报告（三）临床意义♦脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎♦结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎♦真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者开放性脓肿瘘管1.拭子采集法

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开放性性脓肿2.沙布条采集法

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瘘管的放线菌感染3.注射器抽吸法

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封闭性脓肿4.标本运送与保存

♦

厌氧标本“床边接种”脓液（病灶分泌物）标本的细菌学检验（二）微生物学检验1.常见病原菌2.检验程序3.检验方法（1）涂片检查♦普通细菌检查：根据形态和染色特点，报告♦放线菌检查：查找“硫磺样颗粒”，挑取“硫磺样颗粒”制片。用低倍镜及高倍镜检查并报告♦厌氧芽孢梭菌检查：描述是否有芽胞、芽胞位置及形状破伤风芽孢梭菌厌氧芽孢梭菌（2）分离培养与鉴定♦普通细菌培养标本→血平板、中国蓝/麦康凯平板→35℃、需氧培养→典型菌落→染色镜检、生化反应等鉴定♦产气荚膜梭菌培养标本→血琼脂平板、卵黄琼脂平板、庖肉培养基→35℃、厌氧环境→可疑菌落→染色镜检、生物学性状鉴定双层溶血环Nagler反应汹涌发酵4.结果报告

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初级报告：报告“找到革兰×性球（杆）菌，呈××排列，形似××细菌”

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最终报告：报告“检出××细菌”、药敏试验、结果评价及建议

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阴性报告：报告“经4