《抗体制备过程》课件

抗体制备过程课程目标了解抗体制备的基本原理掌握抗体制备的基本流程，包括免疫、杂交瘤技术、抗体纯化等。掌握单克隆抗体和多克隆抗体的区别深入了解单克隆抗体和多克隆抗体的特点、制备方法以及应用领域。了解抗体的性质和应用学习抗体的结构、功能、检测方法以及在生物医药领域的应用。展望抗体技术未来发展趋势了解重组抗体技术、人源化抗体、纳米抗体等最新发展方向。免疫学基础免疫系统概述免疫系统是机体抵御病原体入侵和维持机体内部环境稳定的防御体系。抗原和抗体抗原是能够刺激机体产生免疫反应的物质，而抗体是免疫系统产生的特异性蛋白，能够识别并结合抗原。细胞免疫和体液免疫细胞免疫是指由免疫细胞直接杀伤病原体或感染细胞，而体液免疫则是指由抗体介导的免疫反应。1.1免疫系统概述防御入侵免疫系统保护机体免受病原体入侵，例如细菌、病毒和真菌。识别和消灭免疫系统识别和消灭入侵的病原体，以及体内产生的异常细胞。记忆功能免疫系统具有记忆功能，可以记住曾经接触过的病原体，以便下次遇到时更快地作出反应。1.2抗原和抗体抗原可以诱导机体产生特异性免疫应答的物质，通常是蛋白质或多糖。抗体由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以识别和结合特定的抗原。1.3细胞免疫和体液免疫1细胞免疫主要由T淋巴细胞介导，识别和清除被感染细胞或肿瘤细胞。2体液免疫主要由B淋巴细胞介导，产生抗体以识别和中和病原体。2.单克隆抗体制备免疫细胞融合将免疫的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞。杂交瘤细胞筛选通过HAT培养基筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞。抗体纯化使用各种方法纯化单克隆抗体，如亲和层析。2.1杂交瘤技术免疫B细胞从免疫动物脾脏中分离出能够产生特异性抗体的B淋巴细胞。骨髓瘤细胞使用永生化的骨髓瘤细胞株，这些细胞能够无限增殖。融合利用PEG等融合剂将B细胞和骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。2.2杂交瘤细胞的培养和筛选1筛选选择产生特异性抗体的杂交瘤细胞2培养在合适的培养基中增殖杂交瘤细胞3融合将免疫B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合2.3单克隆抗体的纯化1亲和层析利用抗原或抗体特异性结合的原理2离子交换层析利用抗体的电荷性质分离3凝胶过滤层析根据抗体分子大小进行分离多克隆抗体制备抗原的選擇選擇與目標抗原具有高度特異性的抗原，以提高抗體的效價和特異性。免疫動物使用適當的免疫動物，例如小鼠、兔子或山羊，根據抗原性質和研究目的選擇合适的動物。抗體純化使用不同的方法纯化抗體，例如蛋白A/G亲和层析或免疫沉淀，以獲得高純度的抗體。3.1免疫原的设计和选择1抗原性选择具有强抗原性的免疫原，能有效刺激机体产生抗体。2纯度免疫原的纯度越高，越能有效地刺激机体产生针对特定抗原的抗体。3稳定性选择稳定的免疫原，可以长期保存并有效地刺激机体产生抗体。动物的免疫和血清采集免疫原注射将制备好的免疫原，根据动物种类和免疫方案，选择合适的注射途径和剂量，进行多次免疫。血清采集免疫结束后，从动物体内采集血液，分离血清，即含有抗体的血浆部分。抗体效价检测对采集的血清进行抗体效价检测，以确定免疫效果和抗体浓度。3.3多克隆抗体的纯化1蛋白A/G亲和层析利用抗体Fc段与蛋白A/G的亲和性进行纯化2盐析法利用不同盐浓度使抗体沉淀3离子交换层析利用抗体表面电荷差异进行分离抗体的性质和应用1抗体的结构与功能抗体是由免疫系统产生的蛋白质，能识别并结合特定的抗原，从而发挥免疫作用。它们具有高度的特异性和亲和力，能够与目标抗原紧密结合，从而阻断其活性或标记其位置，以便免疫系统将其清除。2抗体的检测方法多种检测方法可用于检测和定量抗体，例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(Westernblot)。这些方法被广泛应用于疾病诊断、药物开发和生物研究等领域。3抗体在生物医药中的应用抗体在生物医药领域拥有广泛的应用，包括疾病诊断、药物开发、治疗和预防。例如，单克隆抗体被用于治疗癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病等疾病。抗体结构与功能Y形结构抗体呈Y形，由两个轻链和两个重链组成，形成两个抗原结合位点。抗原结合位点每个抗原结合位点特异性地识别和结合特定抗原，从而发挥免疫防御作用。效应功能抗体的效应功能包括中和、沉淀、调理作用和补体激活，这些功能共同帮助机体抵抗感染和疾病。4.2抗体的检测方法ELISA酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种常用的抗体检测方法，利用酶标记的抗体或抗原与待测抗体或抗原反应，通过酶催化显色反应来定量或定性检测抗体。免疫印迹免疫印迹(WesternBlot)是一种常用的抗体检测方法，利用抗体与目标蛋白结合，通过电泳分离蛋白，然后用抗体探测，最后通过显色或化学发光检测来定量或定性检测抗体。流式细胞术流式细胞术(FlowCytometry)是一种常用的抗体检测方法，利用荧光标记的抗体与细胞表面的抗原反应，通过激光照射和检测荧光信号来定量或定性检测抗体。抗体在生物医药中的应用诊断和治疗各种疾病。研究疾病机制和药物开发。生物制药和疫苗生产。未来发展趋势重组抗体技术重组抗体技术利用基因工程技术，在实验室中合成抗体。这种方法可以更有效地生产抗体，并可以定制抗体以满足特定的需求。人源化抗体人源化抗体是指从动物抗体中改造而来的抗体，更接近于人类自身的抗体，因此在治疗上更安全有效。纳米抗体纳米抗体是单域抗体，比传统的抗体尺寸更小，可以更容易地进入细胞，并具有更强的穿透力。5.1重组抗体技术1基因工程利用基因工程技术，将抗体基因克隆到表达载体中，然后转入宿主细胞进行表达。2定制化可以通过对抗体基因进行改造，定制具有特定功能和性质的抗体，例如增加亲和力或改变靶点。3安全性重组抗体可以避免传统抗体生产中可能存在的动物源性病原体污染，提高安全性。人源化抗体降低免疫原性通过减少非人源抗体的免疫原性，提高抗体在人体内的安全性。增强治疗效果通过增强抗体的靶向性和亲和性，提高药物的疗效。提高药物研发效率简化抗体的人源化改造过程，加速药物的研发进程。5.3纳米抗体结构纳米抗体是由单链可变区片段(VHH)组成，源于骆驼科动物抗体的重链抗体。它们比传统抗体小得多，仅约1/10大小。特性纳米抗体具有高稳定性、易于生产、易于修饰等优点，使其成为新一代生物制药工具的理想选择。应用纳米抗体在诊断、治疗、药物靶向、成像等方面有广泛应用前景，例如开发针对特定疾病的纳米抗体药物。课程总结抗体