病原性球菌83讲解

病原性球菌一、细菌形态学检验技术

球菌的种类很多，根据革兰染色性不同分为革兰阳性和革兰阴性球菌。

G+球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌等。G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。病原性球菌主要引起化脓性炎症又可称为化脓性球菌。化脓性感染食物中毒烫伤综合征毒性休克综合征化脓性感染猩红热风湿热亚急性细菌性心内膜炎大叶性肺炎中耳炎流行性脑脊髓膜炎淋病葡萄球菌G+

链球菌G+

肺炎双球菌G+脑膜炎奈瑟菌G-淋病奈瑟菌G-共性形态结构：球形或类球形,无鞭毛，无芽胞。致病性：主要引起化脓性炎症药物敏感性：对青霉素、磺胺类药物敏感葡萄球菌属葡萄球菌属

主要包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌等35个种，17个亚种。最常见的化脓性球菌(80%)广泛分布于自然界、人和动物的体表及与外界相通的腔道中，常堆积成葡萄串状而得名。一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

1.形态与染色

球形,直径0.5-1.5μm固体培养物多堆积排列，呈葡萄状革兰染色阳性无芽胞，无鞭毛金黄色葡萄球菌（脓汁）镜下形态金黄色葡萄球菌纯培养镜下形态一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

2.培养特性

营养要求不高，需氧或兼性厌氧固体培养基：形成2～3mm、圆形、光滑湿润、边缘整齐、不透明菌落。

有色菌落:金黄色、白色、柠檬色

血平板:透明溶血环。菌落直径约2mm，圆形隆起、光滑、湿润、有脂溶性色素菌落，β–溶血。表皮葡萄球菌在普通琼脂平皿上的白色色素表皮葡萄球菌在血平板上的白色色素在血皿上：金黄色葡萄球菌和溶血性葡萄球菌，能产生溶血毒素，在血平板上产生β-溶血。其他葡萄球菌无此现象。金黄色葡萄球菌在血平板上24h菌落

在高盐甘露醇平板上：大多数葡萄球菌耐盐性强在高盐（10%～15%0g/LNaCl培养基中生长）。此平板常作为选择性培养基，可分解甘露醇使指示剂呈淡黄色。G-菌在此平板上不生长。

金黄色葡萄球菌在高盐甘露醇平板上的淡黄色菌落一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

3.生化反应：葡萄球菌的生化活性强触酶试验阳性能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖等多种糖类致病菌能产生血浆凝固酶和分解甘露醇触酶试验发酵葡萄糖一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

4.抗原构造：主要有蛋白抗原和多糖抗原两种。

蛋白抗原：主要为葡萄球菌A蛋白（SPA），是具有种属特异性的完全抗原。SPA具有抗吞噬作用，可与人类的IgG的Fc段非特异性结合，而不影响Fab段与特异性抗原结合，可作为载体，进行简单、快速的协同凝集试验。多糖抗原：具有型特异性的半抗原。协同凝集试验IgG金葡菌抗原凝集（肉眼可见）一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

5.分类：可根据DNA同源性、色素、生化反应及是否产凝固酶等方法进行分类。根据色素、生化反应可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。根据是否产生凝固酶可分为凝固酶阳性葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌等；CNS包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等。

三种葡萄球菌的主要性状性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶+--α溶血素+--耐热核酸酶+--SPA+--分解甘露醇+--致病性强弱或无无一、细菌形态学检验技术一、生物学性状

6.抵抗力

无芽胞的细菌中抵抗力最强耐热、耐干燥，干燥脓汁液中存活数月，80℃30min才能将其杀死。耐盐性强，能在10%-15%氯化钠琼脂中生长。易产生耐药性。对染料及龙胆紫敏感。一、细菌形态学检验技术二、临床意义

(一)致病物质

凝固酶溶血素和杀白细胞素肠毒素、表皮剥脱毒素和毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)

(二)所致疾病1.化脓性感染金黄色葡萄球菌疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染。播散入血后可引起全身感染表皮葡萄球菌医院感染的重要病原菌，尤其见于免疫抑制和中性粒细胞减少患者腐生葡萄球菌尿路感染溶血葡萄球菌医院感染。免疫功能低下者，易引起菌血症、外科术后感染等。从泌尿感染检测时数量多或成为优势菌应视为病原菌人葡萄球菌多数为非致病菌，少数可致病，引起败血症2.毒素性疾病食物中毒，皮肤烫伤综合征，毒性休克综合征3.假膜性肠炎长期使用抗生素所致的菌群失调症一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（一）标本采集

根据病种采取不同标本化脓病：脓液、渗出液疑为败血症：血液脑膜炎：脑脊液食物中毒：剩余食物、呕吐物和粪便

一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（二）检验程序

一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

1.直接镜检标本或增菌液直接涂片，经革兰染色镜检，如查见革兰阳性呈葡萄串状排列，可初步报告“查见革兰阳性球菌，葡萄状排列，疑为葡萄球菌”。

一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

2.分离培养

血液标本先增菌培养，18-24h后观察增菌液变化，如发生混浊、溶血及内有胶胨样凝块等现象可进一步分离培养和革兰染色；脓液、渗出物、脑脊液离心沉淀物可直接接种血平板；粪便、呕吐物、食物应接种高盐甘露醇平板。血平板：直径约2mm，圆形隆起、光滑、湿润、脂溶性色素菌落，β–溶血高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌呈淡黄色菌落一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

3.鉴定试验触酶试验血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验新生霉素敏感试验耐热核酸酶试验产毒素检测其他试验一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

鉴定试验触酶试验阳性凝固酶试验游离凝固酶试管检测法一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

鉴定试验新生霉素敏感试验金黄色葡萄球菌S

表皮葡萄球菌S

腐生葡萄球菌R一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

鉴定试验甘露醇发酵试验耐热核酸酶试验金黄色葡萄球菌（粉红色为阳性）表皮葡萄球菌一、细菌形态学检验技术三、微生物学检查（三）检验方法

鉴定试验肠毒素检测，常以幼猫做动物试验，现多采用ELISA等免疫学方法快速检测肠毒素。其他试验，常用商品化鉴定系统如API葡萄球菌鉴定试剂盒。APISTAPH可鉴定试剂盒链球菌属触酶阴性的G+球菌，广泛分布于自然界、人及动物的粪便和健康人的口腔、鼻咽部。对人类致病的主要是乙型溶血性链球菌，主要引起化脓性感染、猩红热、风湿热、肾小球肾炎等。一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（一）形态染色G+球菌，直径0.5～1um，无鞭毛，无芽胞肺炎链球菌常成双排列，又称为肺炎双球菌，可形成较厚的荚膜。肺炎链球菌一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（二）培养特性

营养要求较高，兼性厌氧菌落直径0.5-0.75mm，为灰白色、圆形、凸起、表面光滑、半透明或不透明的细小菌落。不同的溶血环，菌落周围有α-溶血、β-溶血和γ-溶血。α-溶血β-溶血γ-溶血一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（三）生化反应触酶试验（-）A群链球菌对杆菌肽敏感，B群链球菌CAMP试验（+），D群链球菌七叶苷水解试验（+）肺炎链球菌对Optochin敏感，胆汁溶菌试验（+），菊糖发酵试验（+）一、细菌形态学检验技术A群对杆菌肽敏感B群CAMP试验（+）D群链球菌：PYR(+)，七叶苷(+)肺炎链球菌：Optochin敏感，胆汁溶菌（+），菊糖（+）肺炎链球菌Optochin胆汁溶菌（平板法）胆汁溶菌（试管法）一、细菌形态学检验技术一、生物学性状(四)分类

1.根据溶血现象：分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌和丙型链球菌。2.根据抗原结构：分为20个群（A-V），对人类致病者90%属A群。3.对氧的需求：分为需氧、兼性厌氧和厌氧分类菌落特征甲型（α）溶血性链球菌菌落周围有草绿色溶血环（α溶血）乙型（β）溶血性链球菌菌落周围有宽大透明溶血环（β溶血）丙型（γ）链球菌菌落周围无溶血环一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（五）抵抗力不强对常用消毒剂敏感青霉素为首选治疗药物，不易产生耐药性

一、细菌形态学检验技术二、临床意义（一）致病物质

溶血素、红疹毒素和侵袭性物质1.溶血素溶血素0和溶血素S2.外毒素红疹毒素3.侵袭性物质①透明质酸酶：扩散因子②链激酶：溶纤维蛋白酶③链道酶：DNA酶④M蛋白：超敏反应因子链球菌溶素(strepolysin)

抗“O”试验，用溶血素O作为已知抗原，测定患者血清中相应抗体，辅助诊断风湿热，效价1:400以上可结合临床作出诊断。链球菌溶素O（SLO）链球菌溶素S（SLS）氧

气敏感不敏感免疫原性强弱抗体+-一、细菌形态学检验技术二、临床意义（二）所致疾病1.A群链球菌化脓性疾病：如淋巴管炎、痈、咽炎、丹毒中毒性疾病：猩红热超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎，风湿热一、细菌形态学检验技术二、临床意义（二）所致疾病

2.其他链球菌甲型溶血性链球菌：亚急性细菌性心内膜炎；龋齿B群链球菌：新生儿败血症和脑膜炎；成年人肾盂肾炎、肺炎及子宫内膜炎D群链球菌：条件致病一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（一）标本采集不同疾病采集不同标本化脓病灶：脓液、渗出液疑为败血症：血液鼻咽部：拭子风湿热：采集血清进行抗链O检测一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（二）检验程序

一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

1.直接镜检革兰染色镜检见革兰阳性呈链状排列球菌，可初步报告“查见革兰阳性球菌，链状排列，疑为链球菌”。镜检见革兰阳性成双排列球菌，可初步报告“革兰阳性矛头状球菌，成双排列，疑为肺炎双球菌”。一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

2.分离培养标本经增菌培养后接种血平板或直接接种血平板，培养经35～37℃培养18～24h，观察菌落特征、溶血现象。然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

3.鉴定试验与其他球菌的鉴别葡萄球菌链球菌奈瑟菌革兰染色G+G+G-触酶试验+-+氧化酶试验--+一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

3.鉴定试验β-溶血性链球菌鉴定（A、B、C、G群）杆菌肽敏感试验CAMP试验吡咯烷酮-萘基酰胺试验（PYR）一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

3.鉴定试验非β-溶血性链球菌鉴定（D群、甲型和肺炎双球菌）α-溶血胆汁溶菌试验Optochin敏感试验胆汁七叶苷试验血清学诊断抗“O”试验原理：中和试验方法：间接凝集结果：效价大于400单位意义：风湿热及其活动性的辅助诊断肠球菌属人类肠道的正常菌群，可引起尿路感染、脑膜炎和败血症等。是G+球菌中仅次于葡萄球菌的医院内感染病原菌。一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（一）形态染色G+球菌，成双或短链状排列，无鞭毛，无芽胞。（二）培养特性营养要求不高，需氧或兼性厌氧血平板上形成灰白色、直径0.5～1.0mm大小的圆形、不透明、表面光滑的菌落耐盐（6.5%）。一、细菌形态学检验技术一、生物学性状（三）生化反应触酶（-）、胆汁七叶苷试验（+）、PYR试验（+）（四）分类及抵抗力属于链球菌D群，临床检出率最高的是粪肠球菌，其次屎肠球菌抵抗力弱对氨基糖苷类、万古霉素、替考拉宁耐药呈获得性耐药一、细菌形态学检验技术二、临床意义

G+菌中仅次于葡萄球菌的医院感染病原菌以尿路感染最常见其次为腹部和盆腔感染败血症居第3位一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

1.直接镜检标本经染色镜检见革兰阳性呈单、成双或短链状排列球菌，可初步报告“查见革兰阳性球菌”。一、细菌形态学检验技术三、微生物学检验（三）检查方法

2.分离培养标本经染色镜检见革兰阳性呈单、成双或短链状排列球菌，可初步报告“查见革兰阳性球菌”。

3.鉴定试验触酶试验（-），胆汁七叶苷试验（+）、PYR试验（+），6.5%NaCl肉汤中可生长。奈瑟菌属革兰阴性球菌，主要寄居在人类的鼻咽部、胃肠道和泌尿生殖道，本属对人类致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。一、细菌形态学检验技术（一）生物学性状1.形态染色G-球菌，成双排列，凹面相对，新分离株大多有荚膜和菌毛。

一、脑膜炎奈瑟菌一、细菌形态学检验技术（一）生物学性状2.培养特性营养要求高（巧克力），专性需氧，初次分离需5%～10%CO2形成圆形、光滑、湿润、透明、露滴状菌落产自溶酶3.生化反应触酶试验（+）、氧化酶试验（+）分解葡萄糖，分解麦芽糖巧克力平板上脑膜炎奈瑟菌一、细菌形态学检验技术（一）生物学性状4.抗原构造荚膜多糖抗原为分群依据，分13个血清群，较重要的是A、B、C、群，我国流行的菌株以A群为主。5.抵抗力弱对温度敏感对各种消毒剂敏感对青霉素、磺胺类药物敏感（对磺胺药易产生耐药性）一、细菌形态学检验技术（二）临床意义1.致病物质荚膜抗吞噬，菌毛有利于细菌黏附内毒素，主要致病物质，可导致皮肤淤斑、肾上腺出血、微循环障碍、DIC、甚至休克2.所致疾病流行性脑脊髓膜炎（Epidemicmeningitis）细菌经呼吸道侵入机体，脑膜刺激（剧烈头痛、喷射性呕吐、颈项强直）一、细菌形态学检验技术（三）微生物学检验1.直接镜检取脑脊液离心沉淀物或瘀斑渗出物，经革兰染色镜检，发现中性粒细胞内、外革兰阴性双球菌，呈肾形成双排列，可初步报告“查见革兰阴性球菌”。一、细菌形态学检验技术（三）微生物学检验2.分离培养分离于血琼脂平板、巧克力平板或卵黄双抗平板（EPV），5%～