DB32T3358-2018红花石蒜组培快繁技术规程

ICS65.020.20

B05

备案号：58094-2018DB32

江苏省地方标准

DB32/T3358—2018

红花石蒜组培快繁技术规程

TechnicalregulationfortissuecultureofLycorisradiata

2018-2-10发布2018-3-10实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T3358—2018

红花石蒜组培快繁技术规程

1范围

本标准规定了红花石蒜（Lycorisradiata）外植体采集与处理、培养基配置、外植体接种、组织培

养、炼苗移栽、移栽苗管理和记录等技术要求。

本标准适用于红花石蒜组培苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6001育苗技术规程

LY/T1000容器育苗技术

3外植体采集与处理

3.1外植体采集

3.1.1在3月~10月选择晴天的天气，采集表面无损的鳞茎作为外植体。

3.1.2将红花石蒜周围约30cm的土壤挖开，用手刨出鳞茎球，拨掉球茎所带的泥土。采集完球茎后，覆

土填平。

3.2外植体处理

3.3.1剪去红花石蒜鳞茎球根部，剥去外层鳞茎片，带鳞茎盘切成长为2cm~3cm的鳞茎片，放入烧杯

中用1%洗衣粉溶液浸泡5min，然后流水冲洗1h~2h，最后用蒸馏水冲洗，转至超净工作台。

3.3.2在超净工作台上，用配制好的75%乙醇浸泡30s，然后用无菌水冲洗2次~3次。

3.3.3配制终浓度为1%的次氯酸钠消毒液，用其浸泡材料30min后，用无菌水冲洗5次~6次，并用无

菌滤纸吸干水分后备用。

4培养基配制

4.1MS培养基母液配制

4.1.1制作培养基前需先配制培养基母液，MS培养基母液配制比例参见附录A。

4.1.2母液配制应用蒸馏水。

4.1.3配制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。

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4.1.4配制后的母液应置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应及时

使用，贮存时间不宜超过3个月。

4.1.5母液容器上应贴好标签，注明名称、配制日期，发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用。

4.2植物生长调节物质母液配制

植物生长调节物质母液的配制浓度为0.5mg/mL，其配制方法参见附录B。母液配制好后滤膜过滤

除菌，滤液贴好标签并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超过3个月。

4.3培养基选择

诱导培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L；增殖培养基：MS+6-BA5.0mg/L+2,4-D

1.0mg/L+NAA0.5mg/L；生根培养基：MS+IBA1.0mg/L。

4.4培养基制作

4.4.1准备好配制容器（1L烧杯、玻璃棒和量筒）、蒸馏水、琼脂粉、蔗糖和各类母液等。

4.4.2先用烧杯盛有少量蒸馏水，参考用量参见附表A。

4.4.3按蔗糖浓度30g/L计算用量，称量后用蒸馏水溶解，然后用容量瓶定容。

4.4.4根据培养基的选择加入植物生长调节物质，玻璃棒搅拌均匀。用pH计测试酸碱度，调节pH值至

5.6~5.8。

4.4.5将称量好的琼脂粉（6g/L~7g/L）加入烧杯中加热搅拌至完全溶解。

4.4.6分装时，不应将培养基倾倒在培养瓶瓶口。分装后立即用瓶盖盖上，并旋紧。

4.5培养基灭菌

4.5.1将分装好的盛有培养基的培养瓶放入高压蒸汽灭菌锅内。打开冷凝阀，排尽灭菌锅内的冷空气。

当气压达到0.1Mpa、温度升至121℃时开始计时，保持温度并进行压力灭菌20min。

4.5.2关闭灭菌锅电源，以慢排方式排放热气。待灭菌锅内的气压表指针降至0时再打开高压灭菌锅盖，

取出培养基。将培养基平放置于接种室或培养室内进行冷却。

4.6培养基保存

灭菌后的培养基应注明培养编号及配制日期，同时按培养基种类、配制先后顺序分别储存于接种室

或培养室。储存时间不宜超过2周。

5外植体接种

5.1接种环境

接种前，接种室和超净工作台内要进行紫外线消毒20min~30min，操作人员关闭紫外灯并通风15min

后再进行操作。操作时应佩戴一次性乳胶手套，并在进入超净台前用75%乙醇喷洒消毒。接种结束后，

应及时清理接种室和超净工作台及杂物。

5.2接种

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5.2.1将接种工具（手术刀和镊子）用牛皮纸包好，放入高压蒸汽灭菌锅内，按照4.5的方法，进行高

压灭菌。将灭菌好的接种工具放入65℃烘箱中干燥24h，喷洒75%的乙醇表面消毒后立即转移至超净

工作台。每转接完一个培养瓶中的培养材料，均应将接种工具放在酒精灯外燃火焰上灼烧10s，同时更

换接种器皿中的滤纸，以避免交叉污染。

5.2.2在无菌的培养瓶中，将消毒处理后的鳞茎小块接种于诱导培养基上，每瓶接种1块~2块。接种完

成后，用记号笔在培养瓶上标注接种日期、编号或名称。

5.2.3每次接种完毕后，应用75%的乙醇将超净工作台的台面及两边挡板等擦拭干净，同时将接种器皿

及接种工具重新按照5.2.1的方法进行灭菌消毒处理。

6组织培养

6.1培养条件

培养室内温度为24±2℃，培养瓶上部的光照强度为100μmol-1m-2s-1~150μmol-1m-2s-1，光照时间为每

天12h~16h。

6.2诱导培养

将已消毒的鳞茎小块接种在诱导培养基上，15d~20d后芽开始萌发，25d左右茎尖变绿并伸长生长，

40d左右芽可长高至2cm~3cm。

6.3增殖培养

将诱导培养形成的单个幼芽或丛生芽，接种到增殖培养基上进行培养。增殖培养周期约为30d。

6.4生根培养

将增殖培养后的丛生芽切割成单个完整的幼芽，并使其基部插入生根培养基中，进行生根培养2周

~3周。

7炼苗移栽

7.1炼苗

选取株高大于3cm，根长1cm~4cm，且形成小鳞茎的组培苗放置温室自然散射光下，打开瓶盖，加

注少量无菌水（水深0.5cm左右）炼苗2d~3d，控制温度在18℃~28℃，湿度控制在70%~80%。

7.2移栽

7.2.1移栽基质泥炭土与珍珠岩比例为2:1，并加入0.5g/L的多菌灵搅拌均匀，然后装入营养钵中压紧

待用。

7.2.2用镊子将无菌苗从培养瓶中小心取出，注意保护根系，将根部粘附的琼脂用30℃~35℃清水清洗

干净，移到营养钵中，用基质将根埋好。移栽后及时浇透水，外面用遮阳网罩着，避免阳光直射。

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8移栽苗管理和记录

8.1水分管理

在遮荫且通风条件下培养2d~3d，向叶面喷水1次，2周后，撤掉遮荫，但要注意通风。此后，每隔2

周~3周浇水1次。

8.2大田移栽时间

移栽苗移栽完成2个月以上于当年秋季或翌年春季移栽至大田。

8.3记录

应建立完整、真实的组培栽培管理记录档案，档案保存2年以上。

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AA

附录A

（资料性附录）

MS培养基母液配制表

表A.1MS培养基母液配制表

原配方量称取量母液体积配制1L培养基应

母液化合物扩大倍数

(mg.L-1)（mg）（mL）吸取量（mL）

大量元素NH4NO316502033000100050

KNO3190038000

CaCl2·2H2O4408800

MgSO4·7H2O3707400

KH2PO41703400

微量元素KI0.8320016610005

H3BO36.21240

MnSO4·4H2O22.34460

ZnSO4·7H2O8.61720

NaMoO4·2H2O0.2550

CuSO4·5H2O0.0255

CoCI2·6H2O0.0255

铁盐FeSO4·7H2O28.7200556010005

Na2.EDTA·2H2O37.37460

维生素和肌醇1002002000010005

氨基酸烟酸0.5100

盐酸吡哆醇0.5100

盐酸硫胺素0.120

甘氨酸2.0400

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BB

附录B

（资料性附录）

常用植物生长调节物质配制表

表B.1常用植物生长调节物质配制表

化学试剂名称分子式或英文名配制方法