第二章天然药物化学成分的提取分离方法第三节色谱分离法讲解

第二章天然药物化学成分的提取分离方法

第三节色谱分离法课前回顾1.凝胶过滤色谱的原理？2.吸附色谱常用的吸附剂有哪些？3、试述薄层色谱法的操作步骤？教学目的和要求1、掌握薄层色谱和柱色谱的操作流程和原理2、熟悉薄层色谱和柱色谱点样时的注意事项3、了解高相液相的工作原理第三节色谱分离法一、薄层色谱：（一）定义：薄层色谱法通常指以吸附剂为固定相的一种液相色谱法。即将固定相在玻璃的表面上，试样点在薄层的一端，流动相借毛细作用经固定相,使被分离物质展开（二）、基本参数5比移值（Rf）

Rf=原点至组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离组分A的Rf=a/c

组分B的Rf=b/c（三）、薄层色谱的操作

吸附剂的选择薄层板的制作展开剂的选择点样展开定位与显色薄层层析的定量测定6(四)、薄层层析用的吸附剂1、常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。2、吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等；其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其价格等。7891、薄层板的制作过程层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂均匀地涂在薄层板上，干燥（110℃活化）后即可使用。(五)、薄层板的制作2、薄层板的分类：

（1）、软板：颗粒之间空隙大，分离的斑点较为扩散，缺点是薄层不牢固，展开时只能选择近于水平。（2）、硬板：是用粘合剂的湿法制版。特点：薄层牢固，不易脱落。缺点：展开缓慢，斑点集中。10（五）、黏结剂1、无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。2、有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。11（六）、薄层板活化涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：硅胶110℃1h氧化铝110℃30min12（七）点样1、要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。2、采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。3、点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差。2025/2/8134、常用的点样方式a一般点样b径向点样c条状点样d线形小孔点样e样品填入沟槽

径向展开与普通展开的区别（八）、展开方式1、多次展开——一次展开未达满意分离时，可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复多次，直到混合物分离为止。2、分步展开——混合物性质差别较大时，一种流动相不能有效分离时，可采用不同溶剂依次展开不同距离。2025/2/8163、二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方向成90

的方向进行展开。2025/2/817原点124、连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对保留值。5、离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于制备色谱。6、锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术可以在一般的展开室中进行类似展开。2025/2/819薄层被刮掉部分溶剂前沿二、薄层层析中展开剂的选择

（一）、各种展开剂按其极性不同排序为：烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<酯类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸20（二）、选择薄层条件的简图

图2化合物的极性、吸附剂的活度及展开剂极性间的关系（1）为被分离化合物的极性（2）为吸附剂的活度（3）为展开剂的极性。2122

（三）、展开剂的选择：

(1)查阅文献

(2)微型薄层：用小玻片铺上薄层，用各种经初步选择认为可能应用的展开剂展开，从而选择适当的展开剂，再用于一般的薄层层析。用微型薄层，节省材料和时间。

(3)微量圆环技术三、微量圆环技术

（一）、原理：

将试样溶液点点成同样大小的圆点，用展开剂，加到试样点中心，让展开剂自毛细管中慢慢流出进行展开。23

微量圆环技术

1用环己烷展开

2用苯展开

3用氯仿展开（二）、展开时的注意事项：1、展开室要用溶剂饱和2、注意空气湿度对展开剂的影响。3、注意边缘效应4、展开剂的用量5、展开结束后，立即画出溶剂前沿24（三）、定位与显色1、紫外定位法：紫外光常用两种波254nm与365nm。2、试剂显色法：喷雾显色，浸渍显色25四、柱色谱1、吸附剂和洗脱机的选择：TLC的Rf值为0.2-0.3为最佳溶剂2、装住：干法装柱，湿法装柱3、上样：溶液加样法，拌样加样法4、洗脱：26课堂论述题：简述展开剂选择的原理和方法？薄层色谱与液相色谱法比较HPLCTLC每次只能分析一个样品在一块板上点上多个样品同时进行分离对样品制备要求高，必须不含可吸留在柱上的杂质，否则柱性能受损用毕一次弃去，可直接用样品的粗提物点样可用检测器种类较少展开后可用多种手段检测28

小结测评1、两相溶剂萃取法的原理为：Ａ．分配系数Ｂ．熔点Ｃ．沸点Ｄ．类型2、硅胶作为吸附剂用于吸附色谱时其为：Ａ．非