DB35-T 2026-2021 口蹄疫病毒（O 型）抗体高敏荧光免疫分析 操作规程

35DB35/T2026—2021操作规程Detectionoffootandmouthdiseasevirus(Otype)antibodybyhypersensitivefluorimetricimmunoassay2021-11-23发布2022-02-23实施福建省市场监督管理局发布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草本文件主要起草人：郑腾、张体银、吴冠英、吴俊清、章键、谢向机、张志灯、唐寰宇、林杰、1NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技5.1.3恒温培养箱（20℃~25℃和37℃±1℃)。2把硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上，采用划膜喷金机在硝酸纤维素膜上喷涂已经稀释成0.5mg/mL用封闭液（配制方法应符合附录A中的A.1）封闭硝酸纤维素膜30min，用10mmol/L磷酸盐缓（配制方法应符合附录A中的A.2）清洗硝酸纤维素膜30min，室温（20℃~25℃)干燥2h后备用。加入10mg碳二亚胺和10mgN-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐搅拌溶解，室温（20℃~25℃)反应30min后，在4℃下，18000r/min离心10min，取离心后沉淀物用50mL硼酸缓冲液（pH8.2，配制方法应符合附录A中的A.3）重悬，加入2mg透析过的鸡IgY，在室温（20℃~25℃)下搅拌反应24h，行封闭，再加入5mL样品稀释液（配制方法应符合附录A中的A.4）保存（2℃~8℃)。加入10mg碳二亚胺和10mgN-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐搅拌溶解，室温（20℃~25℃)反应30min后在4℃下，18000r/min离心10min，取离心沉淀物用50mL的0.05mol/L硼酸缓冲液（pH8.2，25℃)下搅拌反应24h，在4℃下，18000r/min离心10min，取离心沉淀物加入5mL含0.5%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲溶液封闭，再加入5mL样品稀释液（配制方法应符合附录A中的A.4）保存（2℃~8℃)。3将高敏荧光纳米微球标记的鸡IgY抗体和口蹄疫病毒O型重组抗原，分别稀释成0.1μg/mL和3μg/mL，采用点膜喷金机器喷涂在标记物垫上，喷量为2.5μL/cm，然后在37℃±1℃的温度PVC底板上从左到右依次粘贴样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫的右端搭在标记静置后的血液样品在3000r/min下离心3m待检血清在2℃~8℃下可保存48h，在-20℃条件下可以长期保存。将平衡至室温的口蹄疫病毒（O型）抗体高敏荧光检测试剂卡置于洁净平坦的台面上，在加样孔内4结果为可疑，需要重新进行一次试验，如果仍然为可疑，建议判定为阴性；当抗体效价＜15磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯），0.2g；磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O，分析纯），2.9g；氯化钠（NaCl，分析纯），8.0g；氯化钾（KCl，分析纯），0.2g；牛白蛋白，5.0g；聚乙烯醇,磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯），0.2g；磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O，分析纯），2.9g；氯化钠（NaCl，分析纯），8.0g；氯化钾（KCl，分析纯），0.2g。加水至1000mL，溶解后A.30.05mol/L