微生物综合实验

实验五微生物大小测定、显微镜直接计数及微生物的生理生化反应一、实验目的二、实验原理三、实验器材四、实验内容步骤主页学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。返回目镜测微尺外观镜台测微尺外观全长1mm等分100格，每格10um镜台测微尺放大01020304050目镜测微尺放大每小格的长度随目镜、物镜放大倍数的大小而变动刻度超下，安装于右目镜中01020304050目镜测微尺镜台测微尺微生物细胞目镜测微尺的标定两条重合线间镜台测微尺的格数目镜测微尺每格长度/μm=×10两条重合线间目镜测微尺的格数返回光线不宜太强放置镜台测微尺目镜测微尺每格长度的计算菌体大小的测定低倍镜高倍镜装目镜测微尺测定结束返回酵母菌－取少量菌液，加在载玻片上，盖上盖玻片，进行观察；随机选取10个细胞进行测量，计算平均值使用后，请将目镜测微尺和镜台测微尺归还到讲台！！不得擦拭测微尺一、实验目的二、实验原理三、实验器材四、实验内容步骤主页学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法返回显微镜直接计数法利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目优点：直观、快速、操作简便缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察计数公式1ml菌液中的总菌数=（5个中方格的总菌数/5）×16×104×稀释倍数或1ml菌液中的总菌数=（5个中方格的总菌数/5）×25×104×稀释倍数1ml菌液中的总菌数=平均每小格的菌数×400×104×稀释倍数本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中见图：即本格中计数细胞为3个。返回返回清洗计数器－自然晾干观察计数室加样品酵母菌－取适量菌液，进行系列稀释（已稀释100倍）低倍镜高倍镜菌悬液制备显微镜计数用移液器吸取少量摇匀后的菌悬液，从盖玻片边缘滴加10ul样品（自然虹吸）,静置5min计数后，及时清洗计数板，并归还到讲台！！不得擦拭计数板如遇酵母菌出芽，芽体大小达到母细胞一半，即作为两个菌体计数一、实验目的二、实验原理三、实验器材四、实验内容步骤主页一、大分子物质水解试验二、糖发酵试验三、IMVC试验四、本次实验所用培养基和菌种五、报告要求实验原理大分子物质微生物细胞胞外酶小分子物质淀粉培养基碘液

碘液

明胶培养基

25℃以下

实验步骤淀粉水解试验倒平板分区标记接种培养观察加卢戈氏碘液，观察无色透明圈制固体淀粉培养基1-枯草杆菌5-大肠杆菌所接种的细菌菌名代号、组别、日期实验步骤明胶水解试验标记明胶培养基试管穿刺接种培养观察观察明胶液化情况制明胶培养基所接种的细菌菌名代号、组别、日期1-枯草杆菌5-大肠杆菌糖发酵试验实验原理糖类物质细菌有机酸气体溴甲酚紫指示剂黄色pH6.8pH5.2

德汉氏小管

实验步骤糖发酵试验接种培养观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡标记所接种的细菌代号5－大肠杆菌1－枯草杆菌IMVC吲哚(indoltest)试验甲基红(methylredtest)试验伏-普(Voges-Prokauertest)试验柠檬酸盐(citratetest)试验这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查IMVC实验原理蛋白胨中的色氨酸吲哚丙酮酸对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚细菌色氨酸酶吲哚产生吲哚试验原理葡萄糖有机酸甲基红指示剂pH6.3红色pH4.2甲基红试验（M.R.试验）葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰蛋白胨中精氨酸的胍基红色化合物OH—乙酰甲基甲醇（V.P.）试验原理NH2NH2柠檬酸盐和磷酸铵碱性化合物1％溴麝香草酚蓝指示剂pH6.0-7.0蓝色pH大于7.6柠檬酸盐利用接种培养结果观察5-大肠杆菌7-产气肠杆菌葡萄糖蛋白胨水培养基各2支柠檬酸盐斜面培养基各1支IMVC实验步骤甲基红试验甲基红试剂（5滴）伏-普试验40％KOH（5－10滴）5％a-荼酚溶液（等量）37℃温箱中保温（15－30min）柠檬酸盐试验？现象观察反应名称培养基名称接种菌名淀粉水解淀粉培养基平板（1块）1、5明胶液化明胶培养基试管（2个，半固体）1、5糖发酵乳糖发酵培养基（2个，紫色）1、5甲基红试验葡萄糖蛋白胨水培基（2个，黄色）5、7伏-普试验葡萄糖蛋白胨水培基（2个，黄色）5、7柠檬酸盐试验柠檬酸盐培养基斜面（2个，绿色）5、7（一）写出目镜测微尺的标定结果物镜目尺格数台尺格数目尺标定值（μm）10×40×（二）分别列表10个酵母菌的长和宽，并计算其平均值12345678910平均值长宽结果计算

长μm＝平均格数×校正值宽μm＝平均格数×校正值大小表示：宽μm×长μm实验结果及思考题（三）显微计数结果各中格菌数5个中方格中总菌数菌液稀释倍数两室平均值菌数/ml12345酿酒酵母第1室第2室（四）生理生化反应结果记录表淀粉水解试验明胶水解实验乳糖发酵实验甲基红实验伏-普实验柠檬酸盐实验1：枯草芽孢杆菌5：大肠杆菌7：产气肠杆菌思考题1.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？2.假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖，葡萄糖发酵实验应该出现什么结果？实验名称实验时间授课时间代课教师抗植物病原真菌的枯草芽孢杆菌筛选及鉴定2015.11.2-11.1111月2日下午2:303115微生物实验室孙燕抗植物病原真菌的假单胞菌筛选及鉴定2015.11.11-11.2211月11日下午2:303115微生物实验室李治高效石油降解菌的筛选及初步鉴定201