山东协和学院学生口腔龋活性实验

山东协和学院学生口腔龋活性实验【摘要】目的：研究龋活性试验（cariesactivitytest，CAT）之一的刃天青纸片法（Rezazurindisctest，RDtest）纸片变色程度与唾液、菌斑中致龋细菌以及龋失补牙数（dmft）的关系。方法：给300名受测试者应用RD法检查受测试者dmft，并取其唾液和菌斑样本培养致龋细菌。结果RD法纸片变色程度与唾液、菌斑中致龋细菌以及dmft呈正相关关系，敏感度为58．8％，特异度为83．7％，阳性预测值为70．2％。结论：RD法能反映唾液、菌斑中致龋细菌数量以及受测试者患龋现状。【关键词】龋活性试验；刃天青纸片法；菌斑；唾液；龋失补牙数龋齿是一种由口腔中多种因素复合作用所导致的牙体硬组织进行性病损，表现为无机质脱矿和有机质分解，随病程发展而从色泽改变到形成实质性病损的演变过程。龋病是人类常见病、多发病，是造成牙齿丢失的主要疾病之一。龋齿是细菌性疾病，可以进一步引起牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和颌骨炎症。大学生这一特殊群体的口腔健康知识将直接影响其口腔卫生行为和口腔健康状况，从而对全社会的口腔预防保健产生深远的影响。但目前国内大量调查资料发现，大学生的口腔保健意识薄弱，没有较好地掌握正确的口腔卫生行为，龋病、牙龈炎、牙周病等依然是影响大学生口腔健康的多发病和常见病。根据2016年《全球疾病负担研究》报告显示：龋病在全球最流行的疾病中排名第12位，影响了全球约5.6亿人群。2017年9月发布的中国第四次全国口腔健康流行病学调查结果显示：中国青少年的患龋率达70.9%，比十年前上升了5.8%，并有随着年龄增加而增加的趋势，但治疗率仅有4.%。即使经过治疗，龋病的复发率可达39%-53%。对于龋病的预防和阻断越来越成为口腔医生的投入焦点：尤其是及早针对病因进行的龋病的风险评估及预测体系，对早期阻断青少年龋病的发生、发展意义重大。在龋病的风险预测中，龋活性是龋病发生、发展的关键预测指标，代表机体患龋的易感性和倾向性。龋活性检测是筛选危险和易感人群的有效方法，本实验主要是采用刃天青纸片法研究山东协和学院学生口腔中变形链球菌群的数量以及牙表面菌斑中细菌的产酸能力。刃天青纸片法（RDtest）是检测致龋细菌的一种龋活性试验。其中刃天青纸片变色程度与唾液中致龋细菌、受测试者龋失补牙数和唾液中变形链球菌数有关。而龋病是由菌斑中致龋细菌在牙面持续产酸造成，目前尚无RD法与菌斑中致龋细菌相关性的报道。本试验进行了RD法和受测试者龋失补牙数（dmft）、唾液、菌斑中致龋细菌相关性的研究。对象和方法：1.研究对象2022年8月～2022年10月期间山东协和学院口腔医学专业学生100人和非口腔医学专业学生200人。要求检查前1h内未进食，1个月内未服用过抗生素，6个月内未服用过激素和免疫抑制剂，1个月内无口腔局部用药（如使用漱口水）全身无重大系统疾病。2.刃天青纸片制作和RD法按Maki试验的方法制作直径8mm的刃天青纸片置于恒温箱烘干备用。测试时将纸片置于受测试者舌下浸透，嘱其轻闭嘴将纸片取出夹在两片聚乙烯薄膜之间，夹于其腋下15min后观察结果。固定由1名学生判断结果：紫蓝色（－）紫红色（＋），红色（＋＋），白色（＋＋＋）。3.标本采集（1）唾液采集：上午9～11时用无菌口杯取受测试者的未刺激唾液约1ml，取0.1ml唾液置于装有0.9ml林格氏液的无菌1.5ml离心管中,充分震荡。（2）取唾液标本后漱口,然后用无菌生理盐水冲洗右下颌第二前磨牙、第一磨牙和第二磨牙的邻间隙软垢，隔湿，用消毒牙签插入邻间隙至接触牙齿邻面取该处菌斑，将牙签头折断放在装有1ml硫乙醇酸钠传送液的1.5ml离心管中，超声波洁牙机间断分散菌斑10s。4.细菌鉴定通过菌落性状和菌落直接涂片革兰氏染色后显微镜下观察，初步判断厌氧菌可能的属性，随机抽取3份受测试者的标本（每份标本分别包括唾液和菌斑接种的MSB和ROGOSA培养基）的菌落用液体培养基培养后进行分子生物学鉴定以细菌特征性基因（变形链球菌是gtfb基因，乳酸杆菌是laf基因）为基础制作引物，以需检测细菌的DNA为模板，进行聚合酶链式反应，然后对扩增产物进行序列测定并比对确定所检测细菌的种类。5.记录dmft根据WHO检查标准，由1名医师检查并记录dmft。根据世界卫生组织计算失牙的标准，20岁以下的青少年丧失了不该脱落的牙，如磨牙或尖牙，即为龋失。6.结果判断将dmft≥5定为龋易感人群，dmft＜5为对龋不易感人群；刃天青纸片变红色和白色定为预测阳性，紫蓝色和紫红色定为阴性。7.统计学处理采用SPSS11．0进行统计处理，RD法纸片变色程度与dmft、唾液和菌斑中的致龋细菌关系采用Spearman等级相关进行分析。结果：1.本试验共检查300名同学的dmft最小值为0，最大值为17，均数为5．78标准差为4.171。经非参数检验RD法与dmft之间Spearman检验r值为0．427双侧检验P＜0.01。2.唾液标本中所培养的致龋细菌（CFU／ml）的均数和标准差：链球菌（7．540±0．519）×105,变形链球菌（5．766±0．748）×104,乳酸杆菌（2．946±1．322）×102,放线菌（6．823±0.449）×105。表1RD法与唾液中致龋细菌Spearman等级相关统计分析统计分析链球菌变形链球菌乳酸杆菌放线菌r值0.4260.3310.3900.203双侧检验P值0.0000.0010.0000.005菌斑样本中所培养的致龋细菌（CFU／ml）的均数和标准差：链球菌（7．746±0．550）×105,变形链球菌（6．194±0．540）×104,乳酸杆菌（3．248±1．292）×102,放线菌（7.069±0.737）×105。表2RD法与菌斑中致龋细菌Spearman等级相关统计分析统计分析链球菌变形链球菌乳酸杆菌放线菌r值0.2550.2460.3350.185双侧检验P值0.0130.0170.0170.0744.细菌的分子生物学鉴定结果显示链球菌和乳酸杆菌的测序结果与标准序列比对吻合率分别为96％和93％结果可充分证实细菌种类。讨论：龋活性试验（CAT）是检测个体和人群可能发生龋病危险因素的敏感程度可为预防龋病提供信息。刃天青纸片法是CAT的一种,具有操作简单、得出结果时间短、成本低的特点。刃天青是一种氧化还原指示剂,在进行RD法时,唾液中的革兰氏阳性细菌利用刃天青纸片上的蔗糖进行氧化还原反应,产生NADH等氢离子供体,在厌氧条件下使纸片变色。Maki的研究认为刃天青纸片变色程度的致龋细菌呈正相关关系,而龋病是由菌斑中致龋细菌在牙面持续产酸造成,只有在菌斑中变形链球菌等数量,增加产酸度增强的情况下龋病才会发生。因此可以认为通过了解菌斑中致龋细菌数量来预测龋活性更有意义。目前尚无RD法与菌斑中致龋细菌相关性的报道。本试验结果显示纸片变色程度与唾液中的链球菌、变形链球菌、乳酸杆菌、放线菌呈正相关相关系数双侧检验P＜0．01,有统计学意义。这与Maki的研究结果一致。纸片变色程度与菌斑中的链球菌,变形链球菌乳酸杆菌呈正相关,相关系数双侧检验P＜0．05有统计学意义。由此可见RD法纸片变色程度不仅与唾液中致龋细菌呈正相关,而且与菌斑致龋细菌呈正相关,这可能是由于口腔内细菌处于一种动态平衡,唾液和菌斑中的致龋细菌保持一种较为恒定的关系。RD法纸片变色程度与dmft经非参数检验,相关系数为0．427双侧检验P＜0．01,有统计学意义。说明RD法可以反映患龋现状，这与刘鸿雁等的研究结果一致。Beck强调通过横断面调查进行龋活性试验得出的有意义结果，需要进行前瞻性的纵向研究验证，如果能预测新龋发生则更有意义。本试验尚需进行前瞻性试验，观察刃天青纸片变色是否与新龋发生有相关性。参考受测试者的龋均5．78将dmft≥5定为龋易感人群dmft＜5定为龋不易感人群，纸片变为红色和无色为预测阳性，纸片为紫蓝色和紫红色为预测阴性，由此得出Sn58.8％、Sp83.7％,敏感度不够理想这可能与龋病是多因素疾病有关。综上所述,要充分发挥RD法的价值还应该将其与其他因素联合起来预测,以提高敏感度。参考文献：[1]VIVIENFENG,张羽,曹桂芝,吴日玥,陈曦.一种国产龋活性培养基与标准培养基一致性及有效性的实验检测[J].口腔医学,2020,40(07):602-605.DOI:10.13591/ki.kqyx.2020.07.006.[2]于兴茹.低龄儿童龋患者及其父母龋活性的调查与研究[D].河北医科大学,2013.[3]游弋,黄培城,