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备案号：47706-2015DB32BasicSeedProducingTechnologyofRiceVarietyNanjing9108江苏省质量技术监督局发布I本标准主要起草人：周丽慧、陈涛、赵庆勇、姚姝、赵春芳、赵凌、朱镇、张亚东、王才1南粳9108原种生产技术规程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适2选择标准和决选标准应符合DB32/T2791—2015水稻品种南粳9108的规定。株行选择标准应符合DB32/T27913储藏和检验按GB/T3543.1～7-1995进行，符合GB4404.1-2008之规定的原种种子4(资料性附录)南粳9108是含有暗胚乳突变基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品种，可针对这两个基因进行分子标记检测，辅助辨别品种的真伪。A.2PCR反应体系。20μLPCR反应体系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4pmol/μL)2.0μL,10×PCRBuffer(含MgCl₂)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4ResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,65℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.1.3产物分析反应产物在质量比浓度为1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察分292bp和200bp的DNA条带。(M:分子量标准；1、2、5、7、8、9、10为南粳9108稻谷标准带型，3、4、6为非标准带型。)A.2.1fgr标记序列20μLPCR反应体系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4pmol/μL)2.0μL,10×PCRBuffer(含5DB32/T2792-2015ResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.2.3产物分析反应产物在8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，经硝酸银染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用fgr基因InDel分子标记扩增水稻品种的基因组DNA,南粳9108标准稻谷能扩增出100bp的DNA条带，而非南粳9108标准稻谷则扩增出107bp或同时具有100bp和107bp的带型。

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