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文档简介

新冠试剂盒使用方法新冠病毒检测是目前防控疫情的重要措施之一。病毒核酸检测试剂盒是检测新冠病毒(SARS-CoV-2)的常规检测方法之一。以下将详细介绍新冠病毒核酸检测试剂盒的使用方法。一、试剂盒的准备1、检测过程必须在满足病原学实验条件和质量管理要求的实验室进行。2、试剂盒应在启封前存放在干燥、阴凉处,避免高温、直射阳光,防止受潮、霉变、交叉污染等。3、打开试剂盒前,准备必要的实验设备,如离心机、移液器、PCR仪、电泳仪等。4、启封前应检查试剂盒是否完好,是否过期。如有问题应及时联系生产厂家。二、病毒核酸提取1、样本采集(1)标本类型病毒核酸检测需要采集呼吸道(鼻、咽)或肺泡灌洗液、支气管肺泡灌洗液、气管刷样本等临床标本。(2)采集方法a.鼻咽拭子或组织样本采集受试者用卫生纸或湿巾擦去鼻翼分泌物、口腔中的食物残渣,保持口腔清洁后,采用59mmx150mm的单用无菌鼻咽拭子。步骤1:受试者头后仰,插入鼻咽拭子,一直插到鼻后庭,转动4~5次,停留15-30秒,在收缩肌的作用下慢慢提出鼻咽拭子。步骤2:将拭子放入约3ml-5ml的悬液用匀液管中样品收集管中,轻轻旋转拭子10几次,在拭子上反复挤压,最后将拭子扔掉。b.肺泡灌洗液和支气管灌洗液采集:肺泡灌洗液和支气管灌洗液是从患者口腔进人支气管,直达肺泡的液体,是比较理想的标本来源,在病毒核酸检测中具有更高的灵敏度。c.气管刷样本采集:气管刷是通过呼吸道进入气管及支气管,使用刷取技术对其进行采集的样本,作为呼吸道病原体检测的一种重要方法。钝头也可用于采集这类样品。此方法适用于接近1岁以上年龄的儿童及成人。2、核酸提取核酸提取是将病毒核酸从样本中分离出来的过程。提取过程中避免交叉污染和失去模板DNA等问题。核酸提取方法有多种,本文不作详细介绍。三、PCR反应1、PCR反应体系正常量测量,每个PCR反应体系为20-25μl,并且每个PCR试管必须加上反应前2.5μl的热激酶,堆积的PCR体系如下:PCR反应体系分离如下:PCR扩增酶20μM10XPCRBuffer2.5μlProbe1μlMgCl21.5μlProbe制成的稀释剂(所有合成肺炎冠状病毒的探针都应在同一试管中配制)0.5μl超纯水xμl(样品和控制PCR使用的Δλ值为9μl)2、扩增步骤步骤1:连接PCR仪,使用软件设置反应体系,预热和全聚合过程,并根据核酸提取质量设定稀释倍数。步骤2:将扩增管中的超纯水(或稀释液)和样品混合,充分混合,放入PCR仪中,开始反应。步骤3:设置PCR反应程序。步骤4:反应结束后,离心样品,取出管内溶液。四、检测结果解读病毒核酸检测结果的解读应结合临床症状和流行病学史等因素综合判断。对于阳性结果的样本,应及时告知患者并报告到相关部门,开展相应的隔离和检测工作。以上是新冠病毒核酸检测试剂盒的基本使用方法,需注意的是,实验前必须充分了解试剂盒的使用说明和生物

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