免疫05-第五章-免疫凝集试验

临床免疫学检验技术第五章免疫凝集试验蒋红梅目录第一节免疫凝集试验的基本原理第二节直接免疫凝集试验第三节间接免疫凝集试验第四节抗球蛋白红细胞免疫凝集试验第五节自身红细胞免疫凝集试验第六节免疫凝集试验的临床应用第七节临床常用免疫凝集试验试剂方法特点第八节影响免疫凝集试验的主要因素第一节免疫凝集试验的基本原理重点提示免疫凝集现象的发生分为两个阶段：抗原抗体特异性结合阶段可见的凝集反应阶段第二节直接免疫凝集试验重点提示直接免疫凝集试验的概念玻片凝集试验试管凝集试验直接免疫凝集试验直接免疫凝集试验（directagglutinationtest）：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象凝集原agglutinogen凝集素agglutinin玻片凝集试验：定性试管凝集试验：半定量第三节间接免疫凝集试验重点提示间接免疫凝集试验的类型正向间接免疫凝集试验反向间接免疫凝集试验间接免疫凝集抑制试验协同免疫凝集试验间接免疫血凝试验颗粒免疫凝集试验胶乳颗粒凝集试验明胶颗粒凝集试验炭颗粒凝集试验甲苯胺红颗粒凝集试验间接免疫凝集试验的概念间接免疫凝集试验（indirectagglutination）：将可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、大小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，可出现肉眼可见特异性凝集现象。一、间接免疫凝集试验的类型（一）正向间接免疫凝集试验：测抗体间接免疫凝集试验的类型（二）反向间接免疫凝集试验：测抗原间接免疫凝集试验的类型（三）间接免疫凝集抑制试验：可测抗原，也可测抗体间接免疫凝集试验的类型（四）协同免疫凝集试验：测抗原，原理与反向间接免疫凝集试验相似。所用载体是细胞壁含有A蛋白（SPA）的金黄色葡萄球菌，SPA具有与IgG（IgG3除外）的Fc段结合的特性。二、间接免疫血凝试验间接免疫血凝试验：以红细胞作为载体的间接免疫凝集试验。用已知抗原或抗体致敏红细胞，检测标本中相应的抗体或抗原。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以出现明显凝集的孔为滴度终点。三、颗粒免疫凝集试验采用不同颗粒作为载体的间接免疫凝集试验。胶乳颗粒凝集试验(LAT)：载体为聚苯乙烯胶乳颗粒明胶颗粒凝集试验(GAT)：载体为明胶颗粒炭颗粒凝集试验(CAT)：载体为炭粉微粒甲苯胺红颗粒凝集试验：载体为甲苯胺红颗粒第四节抗球蛋白红细胞免疫凝集试验重点提示又称为Coombs试验：直接Coombs试验间接Coombs试验一、直接Coombs试验用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。二、间接Coombs试验用于检测游离在血清中的不完全抗体。第五节自身红细胞免疫凝集试验重点提示自身红细胞免疫凝集试验原理自身红细胞免疫凝集试验原理抗人O型红细胞的单克隆抗体。将之与另一种特异性抗体连接成双功能抗体，可用于检测标本中相应抗原。注：待检标本采用受检者的全血自身红细胞免疫凝集试验原理抗人O型红细胞的单克隆抗体。将之与特异性抗原连接，可用于检测标本中的相应抗体。注：待检标本采用受检者的全血第六节免疫凝集试验的临床应用重点提示直接免疫凝集试验的临床应用间接免疫凝集试验的临床应用抗原的检测抗体的检测一、直接免疫凝集试验的临床应用玻片凝集试验：常作定性检测。用已知抗体检测未知的颗粒性抗原，主要用于细菌菌种的鉴定及分型、ABO血型鉴定等。试管凝集试验：可作为半定量检测。多用于测定血清中某种特异性抗体的效价，以协助临床诊断或供流行病学调查；在用颗粒性抗原免疫动物后，可用该法测定免疫血清中特异性抗体的效价，判定抗体生成情况。二、间接免疫凝集试验的临床应用抗原的检测：用于病原体可溶性抗原的检测：如乙型肝炎病毒表面抗原，细菌、腺病毒及流感病毒等的抗原鉴定和细菌可溶性产物如外毒素等。用于检测各种蛋白质成分：如尿液绒毛膜促性腺激素、纤维蛋白原等血浆蛋白成分等。间接免疫凝集试验的临床应用抗体的检测：用于检测细菌、病毒、螺旋体、寄生虫等感染后产生的抗体：如抗人类免疫缺陷病毒抗体、抗溶血素O、梅毒螺旋体抗体等。用于检测自身免疫性疾病的抗体：如类风湿因子、抗DNA抗体和抗甲状腺蛋白抗体等。用于超敏反应患者的抗体测定：如青霉素抗体、某些花粉抗体等。第七节临床常用免疫凝集试验试剂方法特点重点提示诊断菌液载体颗粒其他一、诊断菌液菌种应使用标准株，制备菌液时需经无菌试验证实细菌确已被杀灭，并采用比浊管比浊调整至所需浓度。二、载体颗粒红细胞：最常用绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力，且可长期保存而不溶血。胶乳：聚苯乙烯胶乳颗粒或羧化聚苯乙烯胶乳颗粒。性能稳定，保存期长。炭粉粒子甲苯胺红颗粒......三、其他质控物：标准血清、阳性对照血清、阴性对照血清等试剂盒应2℃～8℃保存，切勿冻存，使用前使试剂接近室温(23℃～29℃)，摇匀后使用。第八节影响免疫凝集试验的主要因素重点提示抗原因素抗血清因素致敏颗粒试剂血清标本试验条件抗原、抗血清、致敏颗粒试剂和血清标本抗原的种类、数量、共同抗原决定簇、浓度、稀释剂、温育时间等。抗体的浓度以及非特异性凝集抗体的干扰。未致敏的颗粒不应与实验血清起反应，致敏所用的抗原或抗体要求纯度高，并具有良好的免疫活性。血清标本宜新鲜、无污染、无溶血。试验条件反应时间：不得少于10分钟温度：室温(23℃～29℃)酸碱度：一般为6～8离子强度：生理盐水振荡：混匀后应静置质量控制措施：必须严格按照相应的标准操作程序操作，同时可利用阴阳对照血清、标准抗原和参考血清设立试验对照进行室内质量控制。本章小结免疫凝集试验是指颗粒性抗原或覆盖了可溶性抗原（或抗体）的致敏载体颗粒与相应抗体（或抗原）结合后，在适宜的电解质条件下出现肉眼可见的凝集现象。包括直接免疫凝集试验、间接免疫凝集试验等。根据载体不同有多种试验类型，如协同免疫凝集试验