DB14T-草莓脱毒原原种苗制备技术规程

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB14/T1591—XXXX目次TOC\o"1-1"\h\u5967前言 II312581范围 1202102规范性引用文件 124843术语和定义 1232334外植体选择 171845脱毒与检测 1208496茎尖初代培养 2167247组培苗继代扩繁 235318组培苗生根诱导 2121499组培苗驯化移栽 325336附录A（资料性）草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 413787附录B（资料性）草莓脱毒原原种苗出圃登记表 5前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替DB14/T1591—2018《草莓脱毒原原种苗制备技术规程》，与DB14/T1591—2018相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：——更改了病毒检测方法（见5.2）；——增加了脱毒原原种苗的保存（见9.3.3）。本文件由山西省农业农村厅提出、组织实施和监督检查。本文件由山西省市场监督管理局对标准的组织实施情况进行监督检查。本文件由山西省农业标准化技术委员会（SXS/TC19)归口。本文件起草单位：山西农业大学。本文件主要起草人：刘伟、樊新萍、王国平、郭华、史华平、李磊、李志强、程春振、武敏、赵琪、李倩。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：——2018年首次发布为DB14/T1591—2018；——本次为第一次修订。草莓脱毒原原种苗制备技术规程范围本文件规定了草莓脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒方法、病毒检测方法、茎尖的初代培养、组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽、原原种苗的保存方式。本文件适用于草莓脱毒原原种苗的制备。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T3032-2016草莓脱毒种苗生产技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

草莓脱毒原原种苗指脱毒的草莓组培苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区内生长的植株。

微茎尖脱毒从匍匐茎上切取约0.2mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可脱除病毒。外植体选择采集时期外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。选择要求选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植体材料。脱毒与检测脱毒方法采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。病毒检测针对草莓斑驳病毒(Strawberrymottlevirus,SMoV)、草莓轻型黄边病毒(Strawberrymildyellowedgevirus,SMYEV)、草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandvirus,SVBV)利用RT-PCR法进行检测，具体操作依据NYT3032-2016的要求执行。茎尖初代培养初代培养基的选择草莓茎尖初代培养的培养基为MS+0.5mg/L~1.0mg/L6-BA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。外植体消毒方法切取匍匐茎顶端2cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗0.5h~2h。在超净工作台下，用75%酒精将外植体浸泡30s，再用1.0%次氯酸钠消毒10min~15min或0.1%升汞溶液消毒5min~10min，无菌水冲洗3次~5次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。茎尖分生组织切取将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开，直至露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约0.2mm的茎尖，接种于初代培养基中。初代培养条件初始接种的茎尖暗培养2d，之后转置于常规培养条件下培养，培养温度25℃，光照强度3000Lux~5000Lux，光照时间14h/d~16h/d，相对湿度70%~75%。茎尖组织在该培养条件下生长约50d~60d形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。组培苗继代扩繁继代培养基的选择适宜草莓继代扩繁的培养基为MS+0.1mg/L~0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。继代过程的条件控制草莓组培苗继代培养条件为：培养温度25℃，光照强度3000Lux~5000Lux，光照时间14h/d~16h/d，相对湿度70%~75%。继代培养每隔30d~40d需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培苗在继代次数上应控制在7次以内，总继代培养时间不宜超过一年，即草莓组培苗应在每年重新制备。组培生产过程应参照附录A进行详细登记。组培苗生根诱导生根培养基的选择诱导草莓生根的培养基为1/2MS+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。生根过程的条件控制用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。选择高度在2cm以上的组培幼苗接种至生根培养基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养30d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的条件。生根阶段的培养条件与继代过程相同。组培苗驯化移栽组培苗的炼苗措施将达到驯化移栽条件的组培苗移至塑料薄膜（或玻璃）温室或遮阴网室，温室内温度控制在10℃~30℃，保持良好的通风条件，在自然光条件下炼苗7d左右，每天10：00~15：00需进行适当遮荫，避免日光曝晒。采用闭盖炼苗2d、松盖炼苗2d、开盖炼苗3d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。移栽基质的准备移栽基质由草炭、蛭石和珍珠岩按4：3：1的比例复配而成，同时添加氮、磷、钾比例为20：10：20的复合肥料200g/m3。移栽容器采用50孔育苗穴盘，提前装好基质并浇透水备用。组培苗移栽及栽后管理移栽时间与方法组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛，此时即可进行移栽。移栽适宜在晴天的傍晚或阴天进行。移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出，用清水将根部的培养基清洗干净，然后将幼苗在75%百菌清可湿性粉剂800~1000倍液浸泡杀菌10min。杀过菌的幼苗即可移栽至育苗穴盘，移栽时应注意使根系保持舒展直立的状态，以利于新根的发生与幼苗的成活。移栽后管理移栽后将育苗穴盘整齐摆放于温室，然后需立即浇水，并搭建小拱棚外覆薄膜保湿。第一遍水需浇透，以利于迅速发根，以后每天上下午需各浇水1次。移栽后需仔细观察幼苗状态，及时控制温室内环境条件。移栽7d内温室内温度应控制在25℃~30℃，湿度70%以上，并且晴天的10：00~15：00需特别注意遮阴。移栽7d后草莓植株挺立且有新叶发生则证明移栽成活。脱毒原原种苗的保存草莓脱毒原原种苗应在隔离网室中进行保存。为防止蚜虫、叶蝉等病毒介体昆虫的进入，网室应使用100目以上的网纱，确保有效的隔离效果，阻断病毒传播途径。脱