DB3502T 155-2024 水质 19种藻毒素的测定 液相色谱-串联质谱法

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3502福 建 省 厦 门 市 地 方 标 准DB3502/T155—2024水质 19种毒素测定 液色-联谱法Waterquality—Determinationof19algaltoxins—Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2024-12-13发布 2024-12-13实施厦门市市场监督管理局  发布DB3502/T155—2024目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1方法原理 1干扰与消除 1试剂和材料 2仪器和设备 2样品 2分析步骤 3结果计算与表示 4精密度和正确度 6质量保证和质量控制 7废物处理 7注意事项 7附录A（资料性） 方法检出限和测定下限 8附录B（资料性） 标准使用液浓度 9附录C（资料性） 目标化合物的测定参考参数 10IDB3502/T155—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由厦门市生态环境局提出并归口。本文件主要起草人：高静、陈猛、王倩、梁榕源、李振良、许方巧。IIDB3502/T155—2024水质19种藻毒素的测定液相色谱-串联质谱法范围本文件描述了水中19种藻毒素的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于地表水和海水中原多甲酸毒素1（AZA1）、原多甲酸毒素2（AZA2）、原多甲酸毒素3（AZA3）（GYM）-2（PTX2）13-去甲螺旋内酯C（SPX1）OADX1DX2NOD--RR、微囊藻毒素-YR（MC-YR）、微囊藻毒素-HtyR（MC-HtyR）、微囊藻毒素-LR（MC-LR）、微囊藻毒--R-C-A-C-Y-C-W、微囊藻毒素-LF（MC-LF）等19种藻毒素的测定。当取样量为1L，定容体积为1.0mL，进样体积为10μL时，19种藻毒素的方法检出限为0.8ng/L～3ng/L，测定下限为3.2ng/L～12ng/L。详见附录A。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB17378.3 海洋监测规范 第3部分：样品采集、贮存与运输HJ91.2 地表水环境质量监测技术规范HJ442.3 近岸海域环境监测技术规范第三部分近岸海域水质监测HJ493 水质 样品的保存和管理技术规定术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。方法原理水中的藻毒素经固相萃取柱富集，用液相色谱-串联质谱分离检测，通过保留时间、特征离子及其丰度比进行定性，外标法定量。干扰与消除1DB3502/T155—2024试剂和材料除非另有规定，仅使用色谱纯试剂。水：GB/T6682，一级。乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）：优级纯。0.1%1mL1000mL，混匀。0.1%1mL1000mL，混匀。甲醇-水（2+8）溶液：甲醇和水（6.1）2：8的体积比混合，混匀。6.6 0.1%甲酸甲醇-水（2+8）1mL甲酸，加甲醇-水（2+8）溶液（6.5）1000mL，摇匀。标准储备液：直接购买有证标准溶液，参照制造商的产品说明保存。19种藻毒素的标准储备液（6.7）BB.1中浓度的标准使用液，于-183个月。N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）1g/20mL，或其他等效萃取柱。滤膜：0.45μm玻璃纤维或其他材质等效滤膜。针式微孔滤膜：0.22μm聚四氟乙烯滤膜（PTFE）。仪器和设备液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI）。固相萃取装置：自动或手动（带真空泵），流速可调节。浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他性能相当的设备。0.01g。样品样品采集和保存按照GB17378.3、HJ442.3、HJ493和HJ91.2的相关规定进行样品的采集。样品采集时应注满棕色磨口具塞玻璃瓶或具有聚四氟乙烯衬垫瓶盖的棕色螺口玻璃瓶，不留空隙。样品采集后应于4℃冷藏、避光运输，及时分析。若不能及时分析，应置于4℃冷藏、避光保存，3天内完成分析。试样的制备水样预处理水样经0.45μm滤膜（6.10）过滤后，量取1000mL水样，加入0.5g的Na2EDTA（6.2），振荡至完全溶解。固相萃取10mL甲醇和10mL2DB3502/T155—2024将水样以6mL/min10mLmL0.1%甲酸甲醇-（2+8）溶液（6.6）定容至1.0mL，经0.22μm针式微孔滤膜（6.11）过滤于样品瓶中，待测。空白试样的制备以水（6.1）代替水样，按照与试样的制备（8.2）相同的步骤，制备空白试样。分析步骤仪器参考条件液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：色谱柱：C18150mm3mm2.6μm，或等效反相高效液相色谱柱；A相-0.1%甲酸溶液（6.3），B相-0.1%甲酸乙腈溶液（6.4）；负离子模式：A相-水（6.1），B相-12；进样体积：10μL；流速：0.25mL/min。表1 正离子模式下梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0075251.0075253.0055456.0055458.5059510.5059510.51752514.007525表2 负离子模式下梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0075251.0075254.0040605.0040607.0010908.0010908.01752511.007525质谱参考条件3DB3502/T155—2024质谱参考条件如下：离子源类型：电喷雾离子源；离子源温度：350；3500V，负离子-3000V；检测方式：多离子反应监测（MRM）；C。对于不同质谱仪器，参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。仪器调谐按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-串联质谱仪进行质量数和分辨率的校正，以确保仪器处于最佳测试状态。标准曲线的建立依次吸取10.0μL、20.0μL、50.0μL、100μL、200μL、400μL标准使用液（6.8，参考体积），用0.1%甲酸甲醇-定容至15（9.1）测定并记录标准系列目标物的保留时间、定量离子的峰面积。试样测定按照与标准曲线的建立（9.2）相同的条件进行试样（8.2）的测定。空白试验按照与试样测定（9.3）相同的条件进行空白试样（8.3）的测定。结果计算与表示定性分析每种被测组分选择1个母离子和2个~32.5%；且待测样品谱图中，各组分定性子离子的相对丰度（Ksam，见式1）相对丰度（Kstd，见式2）进行比较，偏差在表3应的待测物。19种藻毒素的总离子流图见图1和图2。��𝑠�=�2×100·····················································(1)�1式中：Ksam——样品中某组分定性子离子的相对丰度的数值，单位为百分比A2——样品中某组分二级质谱定性子离子的峰面积；A1——样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积。4DB3502/T155—2024��𝑠�=�𝑠�2×100····················································(2)�𝑠�1式中：Kstd——标准样品中某组分定性子离子的相对丰度，单位为百分比（%）；Astd2——标准样品中某组分二级质谱定性子离子的峰面积；Astd1——标准样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差Kstd（%）Ksam最大允许偏差（%）Kstd>502020<Kstd≤502510<Kstd≤2030Kstd≤1050注：1：MC-RR；2：NOD；3：GYM；4：MC-YR；5：MC-HtyR；6：MC-LR；7：MC-WR；8：SPX1；9：MC-LA；10：MC-LY；11：MC-LW；12：MC-LF；13：AZA3；14：PTX2；15：AZA1；16：AZA2。图1 ESI+模式下16种目标化合物的总离子流图5DB3502/T155—2024注：1：OA；2：DTX2；3：DTX1。图2 ESI-模式下3种目标化合物的总离子流图定量分析（3）进行计算。��=���1×100·1)��2式中：ρi ——样品中微囊藻毒素的质量浓度，单位为纳克每升（ng/L）；Ρis——由标准曲线得出的测试液中藻毒素质量浓度，单位为微克每升（μg/L）；V1——定容体积，mL；V2——水样体积，mL。结果表示测定结果小数点后位数与方法检出限一致，最多保留3位有效数字。精密度和正确度精密度36次重复测定：——实验室内相对标准偏差分别为1.7%～13%、0.6%～13%和0.6%～8.2%；——实验室间相对标准偏差分别为2.1%～20%、0.4%～19%和2.8%～19%；——重复性限分别为0.8ng/L～3.7ng/L、1.4 ng/L～11ng/L和1.1ng/L～15ng/L；——再现性限分别为1.3ng/L～11ng/L、1.9ng/L～22ng/L和7.7ng/L～46ng/L。6DB3502/T155—202436次重复测定：——实验室内相对标准偏差分别为1.6%～18%、0.8%～12%和0.6%～9.4%；——实验室间相对标准偏差分别为2.4%～20%、0.5%～16%和2.1%～20%；——1.1ng/L～4.8 ng/L、1.3ng/L～10ng/L2.5ng/L～14ng/L；——1.6ng/L～9.2ng/L、2.6ng/L～20 ng/L3.8ng/L～49ng/L。正确度36次重复测定：——加标回收率范围分别为50.7%～111%、51.0%～115%和51.3%～117%；——加标回收率最终值分别为（52.6±3.5）%～（90.4±36.0）%、（51.2±0.4）%～（99.9±27.7）%和（53.7±2.2）%～（94.6±12.1）%。36次重复测定：——加标回收率范围分别为51.1%～110%、51.0%～107%和52.4%～112%；——加标回收率最终值分别为（51.9±2.5）%～（91.5±.5.3）%、（52.0±2.4）%～（94.9±20.8）%和（54.3±2.5）%～（96.4±27.6）%。质量保证和质量控制空白试验每批样品（≤20个/批）应至少做一个空白试验，测定结果应低于方法检出限。校准每批样品应绘制标准曲线，相关系数应≥0.990，否则重新绘制标准曲线。（≤20个/批平行样的测定每批样品（≤20个/批）应至少测定一个平行双样。平行双样测定结果的相对偏差应控制在20%以内。基体加标（≤20个/批废物处理注意事项在分析完高浓度样品后，应分析一个或多个空白试验样品检查仪器残留。7DB3502/T155—2024附 录 A（资料性）方法检出限和测定下限表A.1给出了19种藻毒素的方法检出限和测定下限。表A.1方法检出限和测定下限序号目标化合物英文名称CASNo.化学式方法检出限（ng/L）测定下限（ng/L）1原多甲酸毒素1（AZA1）Azaspiracid-1214899-21-5C47H71NO12282原多甲酸毒素2（AZA2）Azaspiracid-2265996-92-7C48H73NO12283原多甲酸毒素3（AZA3）Azaspiracid-3265996-93-8C46H69NO12284环亚胺毒素（GYM）Gymnodimine173792-58-0C32H45NO40.83.25蛤毒素-2（PTX2）Pectenotoxin-297564-91-5C47H70O1428613-13-desmethylspirolideC334974-07-1C42H61NO7287大田软海绵酸（OA）Okadaicacid78111-17-8C44H68O13288鳍藻毒素1（DTX1）Dinophysistonxin-181720-10-7C45H70O13289鳍藻毒素2（DTX2）Dinophysistonxin-2139933-46-3C44H68O131410节球藻素（NOD）Nodularin118399-22-7C41H60N8O102811微囊藻毒素-RR（MC-RR）Microcystin-RR111755-37-4C49H75N13O122812微囊藻毒素-YR（MC-YR）Microcystin-YR101064-48-6C52H72N10O1331213微囊藻毒素-HtyR（MC-HtyR）Microcystin-HtyR478001-08-0C53H74N10O1331214微囊藻毒素-LR（MC-LR）Microcystin-LR101043-37-2C49H74N10O122815微囊藻毒素Microcystin-WR138234-58-9C54H73N11O1231216微囊藻毒素-LA（MC-LA）Microcystin-LA96180-79-9C46H67N7O122817微囊藻毒素-LY（MC-LY）Microcystin-LY123304-10-9C52H71N7O132818微囊藻毒素Microcystin-LW157622-02-1C54H72N8O1231219微囊藻毒素-LF（MC-LF）Microcystin-LF154037-70-4C52H71N7O12288DB3502/T155—2024附 录 B（资料性）表B.1给出了19种藻毒素标准使用液的浓度。表B.119种藻毒素标准使用液的浓度序号目标化合物溶剂标准使用液浓度（μg/L）1AZA1甲醇2602AZA2甲醇2443AZA3甲醇2364GYM甲醇1255PTX2甲醇2206SPX1甲醇2517OA甲醇4208DTX1甲醇3909DTX2甲醇19010NOD甲醇50011MC-RR甲醇50012MC-YR甲醇50013MC-HtyR甲醇50014MC-LR甲醇50015MC-WR甲醇50016MC-LA甲醇50017MC-LY甲醇50018MC-LW甲醇50019MC-LF甲醇5009DB3502/T155—2024附 录 C（资料性）目标化合物的测定参考参数表C.1给出了目标化合物的保留时间及多离子反应监测条件等测定参考参数。表C.1目标化合物的保留时间、多离子反应监测条件等测定参考参数序号目标化合物（min）采集模式（m