《从生麦芽中提取亚精胺的方法实证研究》10000字（论文）

从生麦芽中提取亚精胺的方法实证研究目录TOC\o"1-2"\h\u15487第一章前言 116925一、实验背景 13523二、实验目的与意义 74098第二章实验部分 710652一、五种不同溶剂的提取实验 719451二、正交设计优化提取条件 1626313第三章实验结果与讨论 20亚精胺作为一种广泛存在于生物体中的多胺，在2016年细胞自噬机制获得诺贝尔生理学奖与医学奖后得到了更多的关注。细胞自噬是一种生物体自我清洁的过程，它能将老化或有害的成分分解并重新利用。大量研究表明，亚精胺能够通过激活细胞自噬产生一系列的治疗和保健作用，包括抗衰老、抗癌、保护心脑血管等。生麦芽中具有含量可观的亚精胺和诸多营养物质，但是其在生产精面粉和酿酒中常常被弃用或是作为饲料，麦芽中的营养未被全部利用。其次，关于麦芽中亚精胺的质量标准也尚未建立起来。综上所述，本实验计划利用正交设计的方法，以总生物碱含量：总多糖含量的值作为评价指标，优化从生麦芽中提取亚精胺的食品级工艺，为建立相关质量标准的建立以及亚精胺的分离纯化提供依据，为后续高亚精胺含量的生麦芽提取物的成果转化提供参考。关键词：亚精胺；生麦芽；正交设计；第一章前言一、实验背景(一)、亚精胺及其生理功能1.亚精胺性质及生物合成途径：多胺几乎存在于所有动植物体内，在生物体生长发育的过程中起着不可或缺的作用。亚精胺（Spermidine），又被称为精脒，化学式为C7H19N3，分子量为145.25，一个具有代表性的多胺分子，易溶于水、醇和醚类。它的结晶初次于1674年被荷兰科学家列文虎克在精液中发现，而其全合成在1924年由Rosenheim等人完ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Dudley</Author><Year>1924</Year><RecNum>1</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[1]</style></DisplayText><record><rec-number>1</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618820084">1</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Dudley,H.W.</author><author>Rosenheim,M.C.</author><author>Rosenheim,Otto</author></authors></contributors><titles><title>Chemicalconstitutionofspermine.I.Isolationofsperminefromanimaltissues,andthepreparationofitssalts</title><secondary-title>Biochem.J.</secondary-title><alt-title>BiochemicalJournal</alt-title></titles><periodical><full-title>Biochem.J.</full-title><abbr-1>BiochemicalJournal</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Biochem.J.</full-title><abbr-1>BiochemicalJournal</abbr-1></alt-periodical><pages>1263-72</pages><volume>18</volume><keywords><keyword>Tissue(animal,sperminefrom)</keyword></keywords><dates><year>1924</year></dates><isbn>0264-6021</isbn><accession-num>1925:8415</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1042/bj0181263</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>languageunavailable</language></record></Cite></EndNote>[\o"Dudley,1924#1"1]。亚精胺在生物体内各个细胞和组织中均可检测到，说明其分布广泛，作用多样。图1亚精胺（C7H19N3）结构式机体主要经由三种途径获取亚精胺：内源性合成、肠道微生物代谢以及从食物中摄取ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Bardocz,1995#27"2]，精氨酸和S-腺苷甲硫氨酸（SAM）能在精氨酸脱羧酶（ADC）鸟氨酸脱氢酶（OCD），S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（S-AdoMetDC），亚精胺合酶、精胺合酶等催化下先反应产生腐胺再生成亚精胺，其分解则是乙酰化后氧化。亚精胺的合成过程能够对SAM（参与生物体内众多甲基化反应和表观遗传学调控）和NO（一种重要的信号分子，其能扩张血管，保护心脏不适应重构，影响线粒体的生物发生和功能，并具有巨大的免疫调节作用）两个维持正常生理状态的化合物产生一定的影响ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Lee</Author><Year>2011</Year><RecNum>28</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[3]</style></DisplayText><record><rec-number>28</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618825536">28</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Lee,NicoleK.L.</author><author>MacLean,HelenE.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofMedicine,AustinHealth,UniversityofMelbourne,Heidelberg,Australia.</auth-address><titles><title>Polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy</title><secondary-title>J.Cell.Physiol.</secondary-title><alt-title>JournalofCellularPhysiology</alt-title></titles><periodical><full-title>J.Cell.Physiol.</full-title><abbr-1>JournalofCellularPhysiology</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>J.Cell.Physiol.</full-title><abbr-1>JournalofCellularPhysiology</abbr-1></alt-periodical><pages>1453-1460</pages><volume>226</volume><number>6</number><keywords><keyword>Cellproliferation</keyword><keyword>Musclehypertrophy(polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy)</keyword><keyword>Androgenreceptors</keyword><keyword>Androgens</keyword><keyword>PolyaminesRole:BSU(Biologicalstudy,unclassified),BIOL(Biologicalstudy)(polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy)</keyword><keyword>reviewpolyamineandrogenmusclehypertrophy</keyword></keywords><dates><year>2011</year></dates><isbn>0021-9541</isbn><accession-num>2011:325125</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1002/jcp.22569</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Lee,2011#28"3]。由于亚精胺具有裸露的氨基，其易被质子化而带上正电荷，带负电荷的生物大分子如核酸等容易与其形成复合物而使亚精胺处于非游离状态：与DNA结合可在一定程度上影响基因的表达和稳定性，用亚精胺合成抑制剂DFMO处理肿瘤细胞，会破坏其染色质的正常结构。与RNA结合则可维持核酸分子的稳定构象，调节翻译过程ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Bardocz,1995#27"2,\o"Igarashi,2010#31"4]。图2亚精胺的体内合成和代谢2.亚精胺的生物活性亚精胺在植物和动物的生长发育和生理过程中都扮演着重要的角色。大量研究表明，外源性的亚精胺通过稳定膜结构ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Walker,1985#29"5]，清除ROSADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Duan,2008#30"6]等机制提高某些植物的抗逆性；在动物体内，亚精胺还有更加广泛的作用。自噬作用确保细胞的内环境稳定和蛋白质平衡，通过将细胞质物质控制地隔离到双膜自噬体中，自噬将大分子（包括蛋白质、脂质和核酸）或整个细胞器导向溶酶体，使受损的、有潜在毒性的细胞器和对生物体有害蛋白质聚集体的降解，从而去除和回收会在衰老过程中积累的“废物”，提高能量的利用效率，延缓细胞和组织的老化ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Klionsky</Author><Year>2007</Year><RecNum>125</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[7]</style></DisplayText><record><rec-number>125</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1620459044">125</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Klionsky,DanielJ.</author></authors></contributors><auth-address>LifeSciencesInstitute,UniversityofMichigan,AnnArbor,MI,USA.</auth-address><titles><title>Autophagy:fromphenomenologytomolecularunderstandinginlessthanadecade</title><secondary-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</secondary-title><alt-title>NatureReviewsMolecularCellBiology</alt-title></titles><periodical><full-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</full-title><abbr-1>NatureReviewsMolecularCellBiology</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</full-title><abbr-1>NatureReviewsMolecularCellBiology</abbr-1></alt-periodical><pages>931-937</pages><volume>8</volume><number>11</number><keywords><keyword>Autophagy(historyofautophagyresearch)</keyword><keyword>History(ofautophagyresearch)</keyword><keyword>reviewautophagyresearchhistory</keyword></keywords><dates><year>2007</year></dates><isbn>1471-0072</isbn><accession-num>2007:1199234</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1038/nrm2245</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Klionsky,2007#125"7]。最常用的主动引发保护性自噬的方法是热量限制，即改变自身的饮食习惯，如间歇性断食等ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>deCabo</Author><Year>2014</Year><RecNum>37</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[8]</style></DisplayText><record><rec-number>37</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618895564">37</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>deCabo,Rafael</author><author>Carmona-Gutierrez,Didac</author><author>Bernier,Michel</author><author>Hall,MichaelN.</author><author>Madeo,Frank</author></authors></contributors><auth-address>TranslationalGerontologyBranch,NationalInstituteonAging,NationalInstitutesofHealth,Baltimore,MD,USA.</auth-address><titles><title>TheSearchforAntiagingInterventions:FromElixirstoFastingRegimens</title><secondary-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</secondary-title><alt-title>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</alt-title></titles><periodical><full-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</full-title><abbr-1>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</full-title><abbr-1>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</abbr-1></alt-periodical><pages>1515-1526</pages><volume>157</volume><number>7</number><keywords><keyword>Aging(antiagingagents</keyword><keyword>antiaginginterventions)</keyword><keyword>Elixirs</keyword><keyword>Fasting</keyword><keyword>Human(antiaginginterventions)</keyword><keyword>reviewantiagingregimenelixirfastingregimen</keyword></keywords><dates><year>2014</year></dates><isbn>0092-8674</isbn><accession-num>2014:1041092</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.cell.2014.05.031</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"deCabo,2014#37"8]，但这显然不是一种接受度高的方式。研究表明，外源性亚精胺的补充可有效地延长实验动物的寿命，高的血液多胺浓度往往对应着死亡率和一些疾病发病率的降低ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Eisenberg,2009#33"9,\o"Matsumoto,2011#35"10]，当敲除细胞自噬有关基因时，这个作用随之消失ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Gupta,2013#32"11]。许多类似科研表明，亚精胺等多胺可作为一种较高效的热量限制模拟物（caloricrestrictionmimetic，CRM），通过降低组蛋白乙酰转移酶的活性来减少组蛋白的Ac-化，上调饥饿反应基因的表达ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Eisenberg,2009#33"9]，在药理学上模拟饮食限制的效果，通过诱导细胞自噬而发挥作用。除了延缓衰老，亚精胺的许多有益作用与其诱导细胞保护性自噬的能力密切相关。在肿瘤形成方面，外源性亚精胺可通过消耗免疫抑制细胞，引起免疫刺激作用来增强肿瘤发生时的免疫监视ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Pietrocola,2016#42"12]，肿瘤的发生和生长会在外源性亚精胺补充下减少。Matsumoto等人实验发现，口服多胺产生菌(动物双歧杆菌亚种乳酸乳球菌LKM512)降低衰老Crj:CD-1雌性小鼠可见皮肤肿瘤的发病率ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Matsumoto,2011#35"10]，食用亚精胺也可缓解肝纤维化并降低小鼠肝细胞癌的发生率ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Yue,2017#36"13]。在心血管疾病方面，LaRocca等人研究发现亚精胺通过降低老年小鼠内皮细胞的氧化损伤逆转了年龄诱导的动脉僵硬ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"LaRoccaThomas,2013#40"14]，并减轻了高脂饮食20周内载脂蛋白E的缺乏。高亚精胺膳食能够有效降低人群中心血管疾病的死亡率和发病率，亚精胺通过抑制循环细胞因子，诱导线粒体结构改善，增强自噬和有丝分裂等机制发挥增强心肌、扩张血管、使血压降低以及减轻动脉粥样硬化等作用ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"LaRoccaThomas,2013#40"14,\o"Eisenberg,2016#38"15]；在神经调节方面，无脊椎动物模型中亚精胺可通过与离子型受体的相互作用以及诱导神经元或神经胶质细胞自噬，抑制脱髓鞘作用来保护神经，促进体内神经的修复和再生ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Gupta,2013#32"11]，而其在哺乳动物体内的神经保护作用则是由亚精胺间接抑制自身免疫反应性的T细胞活化而导致的ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Yang,2016#41"16]。Velloso等人研究发现，在纹状体注射精胺改善了亨廷顿氏病啮齿动物模型的识别记忆缺陷，通过口服精氨酸联合双歧杆菌LKM512益生菌能上调结肠多胺，从而提高了老年小鼠的空间学习和记忆能力ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Velloso,2009#126"17]。说明了在神经退行性疾病中亚精胺的神经保护作用。在改善代谢性疾病的方面，Sadasivan等人研究发现每天给吃高脂饮食的小鼠服用精胺可以预防肥胖和改善葡萄糖的耐受ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Sadasivan,2014#46"18]，亚精胺可缓解因暴饮暴食而导致的的肥胖以及肥胖的并发症，其机制与白色脂肪组织中的自噬诱导密切相关。在抵抗干细胞衰老等相关方面，Chen等人研究发现亚精胺能够在体外使体细胞脱分化为成纤维细胞，即具有诱导多能干细胞的作用，此外还具有促进人类毛囊器官培养物中的毛发生长和上皮干细胞分裂的作用ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Chen,2011#43"19]总而言之，外源性的亚精胺补充对人们抵抗衰老和维持人体各个方面正常功能有着重要的作用，Pucciarelli等人在意大利中部进行的一项横断面观察显示，老年人相比于年轻人，体内的多胺含量较低，但在健康的90岁和100岁老人中，其含量仍保持在年轻(中年)个体的水平ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Pucciarelli</Author><Year>2012</Year><RecNum>44</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[20]</style></DisplayText><record><rec-number>44</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618921206">44</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Pucciarelli,Stefania</author><author>Moreschini,Benedetta</author><author>Micozzi,Daniela</author><author>DeFronzo,GiusiS.</author><author>Carpi,FrancescoM.</author><author>Polzonetti,Valeria</author><author>Vincenzetti,Silvia</author><author>Mignini,Fiorenzo</author><author>Napolioni,Valerio</author></authors></contributors><auth-address>SchoolofBiosciencesandBiotechnologies,UniversityofCamerino,Camerino,Italy.</auth-address><titles><title>SpermidineandSpermineAreEnrichedinWholeBloodofNona/Centenarians</title><secondary-title>RejuvenationRes.</secondary-title><alt-title>RejuvenationResearch</alt-title></titles><periodical><full-title>RejuvenationRes.</full-title><abbr-1>RejuvenationResearch</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>RejuvenationRes.</full-title><abbr-1>RejuvenationResearch</abbr-1></alt-periodical><pages>590-595</pages><volume>15</volume><number>6</number><keywords><keyword>Aging</keyword><keyword>Blood</keyword><keyword>Human</keyword><keyword>Longevity(spermidineandspermineareenrichedinwholebloodofnona/centenarians)</keyword><keyword>spermidinesperminebloodnonagenariancentenarian</keyword></keywords><dates><year>2012</year></dates><isbn>1549-1684</isbn><accession-num>2013:124604</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1089/rej.2012.1349</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Pucciarelli,2012#44"20]，亚精胺的平均每日营养摄入量为7-25mg左右时被认为对健康有益ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Zoumas-Morse,2007#34"21]。随着年龄的增长，内源性亚精胺来源日趋减少，就更要重视从食物中的摄取。(二)、生麦芽大麦芽是由禾本科植物大麦HordeurnvulgareL.的成熟的果实炮制而成。大麦是国内乃至世界上历史最悠久，分布最普遍的农作物之一，在中国大麦种植集中在少数几个省份，其中云南是中国大麦产量最高的省份，约占全国的31.9%。根据中医记载，麦芽味甜，归脾、胃经，主要用于益气消食，健脾开胃，回乳除胀，多用于帮助消化，治疗脾虚，乳汁积累或断乳的等病症。而如今的研究表明，麦芽还拥有很多重要的功效：麦芽富含食用纤维，能够帮助消化；麦芽煎剂灌胃小鼠的实验表明，其还有影响性激素分泌的功效ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈蓉</Author><Year>2008</Year><RecNum>49</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[22]</style></DisplayText><record><rec-number>49</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619010986">49</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈蓉</author></authors></contributors><auth-address>重庆医科大学中医药学院中医临床教研室;</auth-address><titles><title>麦芽对雄性小鼠性激素水平的影响</title><secondary-title>中国药房</secondary-title></titles><periodical><full-title>中国药房</full-title></periodical><pages>2087-2088</pages><number>27</number><keywords><keyword>麦芽</keyword><keyword>雄性小鼠</keyword><keyword>性激素</keyword></keywords><dates><year>2008</year></dates><isbn>1001-0408</isbn><call-num>50-1055/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"陈蓉,2008#49"22]；麦芽还能够保护肝脏，调理肠道菌群、抗血小板凝聚等。麦芽药用主要用于回乳与催乳，也有着一定的保健作用。研究表明，麦芽中的多胺含量十分可观，包括亚精胺、精胺、腐胺ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"刘俊,2004#47"23,\o"Smith,1977#50"24]，具有一定的营养价值。我国大麦资源丰富，大多被用来作为食品添加剂或制作大麦茶，仅有少部分被人们直接食用。在酿酒厂和精淀粉厂，麦芽大多被直接丢弃或是作为饲料供给牲畜，没有得到充分的利用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>辛卫云</Author><Year>2017</Year><RecNum>48</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[25]</style></DisplayText><record><rec-number>48</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619010986">48</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>辛卫云</author><author>白明</author><author>苗明三</author></authors></contributors><auth-address>河南中医药大学;</auth-address><titles><title>麦芽的现代研究</title><secondary-title>中医学报</secondary-title></titles><periodical><full-title>中医学报</full-title></periodical><pages>613-615</pages><volume>32</volume><number>04</number><keywords><keyword>麦芽</keyword><keyword>化学成分</keyword><keyword>药理作用</keyword><keyword>临床应用</keyword><keyword>中药</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><isbn>1674-8999</isbn><call-num>41-1411/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"辛卫云,2017#48"25]。虽然麦芽含有如此丰富的营养和良好的保健作用，但如今市面上针对麦芽开发的食疗保健产品却少之又少，因此这方面存在较大的空缺。(三)、正交试验正交试验设计也称正交设计(orthogonaldesign)，一般用来设计分析多因素试验，研究每个因素对试验结果的影响程度。其根据统计学原理设计出符合实验要求的正交表(orthogonaltable)设计试验，用数理统计的方法处理得到的数据，最终可得到可信度高的结论ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>王玄静</Author><Year>2016</Year><RecNum>52</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[26]</style></DisplayText><record><rec-number>52</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619158139">52</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>王玄静</author></authors></contributors><auth-address>西北师范大学数学与统计学院;</auth-address><titles><title>正交试验设计的应用及分析</title><secondary-title>兰州文理学院学报(自然科学版)</secondary-title></titles><periodical><full-title>兰州文理学院学报(自然科学版)</full-title></periodical><pages>17-22</pages><volume>30</volume><number>01</number><keywords><keyword>正交试验</keyword><keyword>最优方案</keyword><keyword>主次顺序</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>2095-6991</isbn><call-num>62-1212/N</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"王玄静,2016#52"26]。在多因素同时变化的实验条件下，各个因素之间的相互作用十分复杂，如果一一按照控制变量法进行分析，则工作量会非常庞大。根据正交表从多种因素组合中挑选出在统计学上具有特殊意义的若干个组合开展试验，不仅降低了工作量，也能很好地观察各个因素对试验结果是否有显著性影响。正交设计应用广泛，且结果具有合理性。在多种领域的方案优化中，正交设计都表现出了不俗的潜力。在工程学领域，倪恒等人使用正交设计研究了滑坡的敏感性ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>倪恒</Author><Year>2002</Year><RecNum>51</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[27]</style></DisplayText><record><rec-number>51</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619158057">51</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>倪恒</author><author>刘佑荣</author><author>龙治国</author></authors></contributors><auth-address>中国地质大学工程学院,中国地质大学工程学院,中国地质大学工程学院武汉430074,武汉430074,武汉430074</auth-address><titles><title>正交设计在滑坡敏感性分析中的应用</title><secondary-title>岩石力学与工程学报</secondary-title></titles><periodical><full-title>岩石力学与工程学报</full-title></periodical><pages>989-992</pages><number>07</number><keywords><keyword>滑坡</keyword><keyword>因素</keyword><keyword>敏感性分析</keyword><keyword>正交设计</keyword><keyword>方差分析</keyword></keywords><dates><year>2002</year></dates><isbn>1000-6915</isbn><call-num>42-1397/O3</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"倪恒,2002#51"27]，而在生药领域，很多研究都采用此方法优选提取、分离以及分析的实验方案。正交设计的主要流程如下，确定评分标准、水平和影响新故事，每个因素的水平数要尽量保持一致，再根据因素和水平的个数选取契合的正交表，根据正交表完成多组试验，最后运用极差分析法等分析方法确定每个因素的显著性和最优的条件组合，达到筛选的目的。(四)、含量测定方法概述1.总多糖的测定方法：总多糖的测定方法有很多如碱性酒石酸铜滴定法、蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、DNS染色法以及用于测定每种糖具体含量的HPLC法。苯酚硫酸法则是生药学领域使用最为广泛的一种方法，杜洪志等人使用此法测定和分析了不同产地对叶百部的总多糖含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>杜洪志</Author><RecNum>55</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[28]</style></DisplayText><record><rec-number>55</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">55</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>杜洪志</author><author>陈子愉</author><author>覃春叶</author><author>丘米佳</author><author>陈志琳</author><author>张敏</author><author>李玮</author></authors></contributors><auth-address>贵州中医药大学;</auth-address><titles><title>不同产地对叶百部总多糖的含量测定</title><secondary-title>微量元素与健康研究</secondary-title></titles><periodical><full-title>微量元素与健康研究</full-title></periodical><pages>1-3</pages><keywords><keyword>对叶百部</keyword><keyword>总多糖</keyword><keyword>含量测定</keyword><keyword>苯酚—硫酸法</keyword></keywords><dates></dates><isbn>1005-5320</isbn><call-num>52-1081/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"杜洪志,#55"28]；商澎等人使用苯酚硫酸法结合后续HPLC分析鉴定了当归总多糖以及各部位的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>商澎</Author><Year>2001</Year><RecNum>60</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[29]</style></DisplayText><record><rec-number>60</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">60</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>商澎</author><author>杨铁虹</author><author>贾敏</author><author>梅其炳</author><author>赵文明</author><author>曹之宪</author><author>赵德化</author></authors></contributors><auth-address>西安交通大学生物工程研究所!陕西西安710049,第四军医大学基础部药理学教研室!陕西西安710033,第四军医大学基础部药理学教研室!陕西西安710033,第四军医大学基础部药理学教研室!陕西西安710033,西安交通大学生物工程研究所!陕西西安710049,香港大学医学院药理系!香港沙宣道5?</auth-address><titles><title>当归多糖的分离、纯化及分析鉴定</title><secondary-title>第四军医大学学报</secondary-title></titles><periodical><full-title>第四军医大学学报</full-title></periodical><pages>1311-1314</pages><number>14</number><keywords><keyword>当归/分离和提纯</keyword><keyword>当归/分析</keyword><keyword>多糖</keyword></keywords><dates><year>2001</year></dates><isbn>1000-2790</isbn><call-num>81-5046/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"商澎,2001#60"29]；刘培等人同法测定了四君子汤中总多糖的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>刘培</Author><Year>2020</Year><RecNum>56</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[30]</style></DisplayText><record><rec-number>56</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">56</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>刘培</author><author>王伊楠</author><author>张莉丹</author><author>王科</author><author>郭宇航</author><author>王鹏飞</author><author>段秀俊</author></authors></contributors><auth-address>山西中医药大学;</auth-address><titles><title>四君子汤中总多糖、总黄酮和总皂苷提取工艺优化</title><secondary-title>辽宁中医药大学学报</secondary-title></titles><periodical><full-title>辽宁中医药大学学报</full-title></periodical><pages>67-71</pages><volume>22</volume><number>04</number><keywords><keyword>四君子汤</keyword><keyword>总多糖</keyword><keyword>总黄酮</keyword><keyword>总皂苷</keyword><keyword>提取工艺</keyword><keyword>含量测定</keyword></keywords><dates><year>2020</year></dates><isbn>1673-842X</isbn><call-num>21-1543/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"刘培,2020#56"30]足以说明苯酚硫酸法是一种可靠的分析方法。2.总生物碱的测定方法生药中总生物碱的测定方法主要有HPLC法由于生物碱类化合物结构的多样性，其测定也有很多方法，酸性染料比色法，是药典中规定的，测定总生物碱含量常用的一种方法，其具有专属性优秀，灵敏度高，操作简便等优点。姜华等人用此法测定了白屈菜中总生物碱含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>姜华</Author><Year>2017</Year><RecNum>63</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[31]</style></DisplayText><record><rec-number>63</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">63</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>姜华</author><author>李军</author><author>徐强</author><author>冯晴爽</author><author>付兴兴</author></authors></contributors><auth-address>河南科技大学化工与制药学院;</auth-address><titles><title>白屈菜中总生物碱含量的酸性染料比色法测定</title><secondary-title>时珍国医国药</secondary-title></titles><periodical><full-title>时珍国医国药</full-title></periodical><pages>854-856</pages><volume>28</volume><number>04</number><keywords><keyword>白屈菜</keyword><keyword>总生物碱</keyword><keyword>酸性染料比色法</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><isbn>1008-0805</isbn><call-num>42-1436/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"姜华,2017#63"31]；何立巍等人用优化了板蓝根总生物碱的提取方式并研究了其抗病毒的药理作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>何立巍</Author><Year>2014</Year><RecNum>66</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[32]</style></DisplayText><record><rec-number>66</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">66</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>何立巍</author><author>吴晓培</author><author>杨婧妍</author><author>李祥</author><author>李伟</author></authors></contributors><auth-address>南京中医药大学药学院;</auth-address><titles><title>板蓝根总生物碱的提取纯化工艺及其抗病毒药理作用研究</title><secondary-title>中成药</secondary-title></titles><periodical><full-title>中成药</full-title></periodical><pages>2611-2614</pages><volume>36</volume><number>12</number><keywords><keyword>中药化学</keyword><keyword>总生物碱</keyword><keyword>工艺条件</keyword><keyword>大孔树脂吸附</keyword><keyword>抗病毒</keyword></keywords><dates><year>2014</year></dates><isbn>1001-1528</isbn><call-num>31-1368/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"何立巍,2014#66"32]。说明作为一种较传统的方法，酸性染料比色法仍能很好地完成总生物碱含量的测定。3.柱前衍生化-HPLC由于多胺类物质没有共轭结构，紫外吸收吸光系数很低，所以无法直接用HPLC-UV进行检测，而其余方法如毛细管电泳-质谱法、气相色谱-质谱法、ELISA法等条件复杂，价格昂贵，所以就选择用衍生化法向多胺中引入生色团，不仅可以使其产生紫外吸收，也可以改善其在HPLC中的分离度。常用的衍生化试剂有丹磺酰氯（DNS-Cl）、苯甲酰氯、领苯二甲醛等。张一名等人用苯甲酰氯作为衍生化试剂优化了棉花中多胺的测定方法ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>张一名</Author><Year>2016</Year><RecNum>64</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[33]</style></DisplayText><record><rec-number>64</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">64</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>张一名</author><author>刘玲玲</author><author>谢韫泽</author><author>孙艳香</author><author>冯雪</author><author>贾永红</author></authors></contributors><auth-address>廊坊师范学院生命科学学院;南京农业大学资源与环境学院;</auth-address><titles><title>应用高效液相色谱-二极管阵列检测器优化棉花体内多胺的测定方法</title><secondary-title>江苏农业科学</secondary-title></titles><periodical><full-title>江苏农业科学</full-title></periodical><pages>328-331</pages><volume>44</volume><number>08</number><keywords><keyword>棉花</keyword><keyword>幼苗组织</keyword><keyword>多胺含量</keyword><keyword>高效液相色谱</keyword><keyword>二极管阵列检测器</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1002-1302</isbn><call-num>32-1214/S</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"张一名,2016#64"33]，梁梦洁等人则使用丹磺酰氯柱前衍生化，测定了烟叶中七中多胺的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>梁梦洁</Author><Year>2020</Year><RecNum>20</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[34]</style></DisplayText><record><rec-number>20</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618820642">20</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>梁梦洁</author><author>黄丽佳</author><author>宋春满</author><author>李应郡</author><author>刘欣</author><author>李银科</author><author>杨光宇</author><author>李晶</author></authors></contributors><auth-address>昆明医科大学药学院;云南中烟工业有限责任公司技术中心;天津科技大学食品工程与生物技术学院;</auth-address><titles><title>柱前衍生法测定烟叶中的7种生物胺</title><secondary-title>分析试验室</secondary-title></titles><periodical><full-title>分析试验室</full-title></periodical><pages>953-957</pages><volume>39</volume><number>08</number><keywords><keyword>生物胺</keyword><keyword>柱前衍生</keyword><keyword>丹磺酰氯</keyword><keyword>液相色谱</keyword><keyword>烟叶</keyword></keywords><dates><year>2020</year></dates><isbn>1000-0720</isbn><call-num>11-2017/TF</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"梁梦洁,2020#20"34]。二、实验目的与意义麦芽因含有亚精胺等丰富的营养物质具有很高的药用和食用价值，而目前对这方面的研究较少，并且关于生麦芽中多胺的质量标准尚未完善。综合以上的背景，本课题先通过预实验探索大致的提取条件，再基于预实验的结果，用正交设计的方法筛选出制备高亚精胺含量的麦芽提取物的食品级提取条件。可以基于这一提取物设计众多药品和保健品，有效降低亚精胺提取物的生产成本；同时也能够扩大在酿酒和精面粉制造过程中没有得到充分利用的麦芽的用途，实现“废物”利用，提高大麦这一农作物的价值，为完善麦芽作为食品药品的质量标准以及从生麦芽提取物中进一步纯化亚精胺提供依据；也能为后续亚精胺含量高的生麦芽提取物的成果转化提供参考。第二章实验部分本实验总目标为利用正交试验的设计和分析方法，对从生麦芽中提取生物碱的工艺进行考察，通过一系列分析方法确定检测指标，优选从生麦芽中提取生物碱特别是亚精胺的方案，为之后有关生麦芽中亚精胺的研究提供一定的依据。一、五种不同溶剂的提取实验首先我们需要确认大致以何