《微生物学教程》(周德庆)期末复习

微生物概念：一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，个体微小、构造简单的低等生物类群：①原核类：细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体②真核类：真菌（酵母菌、霉菌、蕈菌）、原生动物、显微藻类③非细胞类：病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）五大共性：体积小，面积大吸收多，转化快生长旺，繁殖快适应强，易变异分布广，种类多影响人物①列文虎克“微生物学的先驱者”②科赫“细菌学的奠基人”③巴斯德“微生物学的奠基人”原核生物细胞核无核膜包裹(称核区)的原始单细胞微生物立克次氏体：大小介于通常的细菌与病毒之间，在许多方面类似细菌，专性活细胞内寄生的原核微生物。“虫媒微生物”衣原体：一类在真核细胞内营专性能量寄生的小型G-原核生物。“能量寄生型生物”细菌

细胞细短，结构简单，胞壁坚韧，多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物细菌的繁殖方式：细菌一般为无性繁殖。多数繁殖方式：二分裂繁殖（存在不等二分裂）少数其它方式：（1）三分裂，如绿色硫细菌（2）复分裂，如蛭弧菌（3）芽殖——芽生细菌（芽生杆菌属等）细胞壁概念：细胞最外的一层厚实、坚韧的外被，主要成分为肽聚糖，具有固定外形和保护细胞等多种功能。功能：①固定细胞外形和提高机械强度，免受低渗透压损伤；②为细胞生长、分裂和鞭毛运动所必需；③阻拦大分子（Wr>800）抗生素或酶等有害物质进入细胞；④赋予细菌特定的抗原性和致病性(如内毒素)，并与细菌对抗生素和噬菌体的敏感性密切相关。肽聚糖由肽和聚糖两部分组成。G+肽聚糖单体：双糖单位+四肽尾+肽桥双糖单位：N-乙酰胞壁酸、N-乙酰葡萄胺、b-1，4-糖苷键（易被溶菌酶水解）脂多糖革兰氏阴性菌细胞壁外壁层特有的成分，它由O-特异侧链、核心多糖、类脂A构成革兰氏染色法染色步骤：涂片固定→结晶紫液初染→碘液媒染→乙醇脱色（关键步骤）→番红复染（省略不影响）机制：细胞壁通透性学说①结晶紫初染和碘液媒染，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物②乙醇脱色：G+细胞壁较厚，肽聚糖层次多，交联致密且不含类脂，把结晶紫和碘的复合物牢牢留在壁内保持其紫色；G-细胞壁较薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖层薄交联度差，结晶紫与碘的复合物易溶出，细胞退成无色③番红复染：G-细菌呈红色，G+细胞保留最初的紫色重要性：具有十分重要的理论与实践意义，通过这一染色，可将几乎所有的细菌分成革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌两个大类，因此它是分类鉴定菌种时的重要指标，又由于这两大类细菌在细胞壁成分、结构、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面呈现出明显差异，因此任何细菌只要通过革兰氏染色，就能提供不少其他重要的生物学特性方面的信息缺壁细菌细菌在某些环境条件下，人为操作或自身突变下缺乏细胞壁①L型细菌：细菌在某些环境条件下（实验室或宿主体内）通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷变异型。特点：没有完整而坚韧的细胞壁，细胞呈多形态；有些能通过细菌滤器，故又称“滤过型细菌”对渗透敏感，在固体培养基上形成“油煎蛋”似的小菌落（直径在0.1mm左右）；②原生质体：在人为条件下，用溶菌酶处理或在含青霉素的培养基中培养而抑制新生细胞壁合成而形成的仅由一层细胞膜包裹的，圆球形、对渗透压变化敏感的细胞，一般由革兰氏阳性细菌形成。特点：对环境条件变化敏感，低渗透压、振荡、离心甚至通气等都易引起其破裂；有的原生质体具有鞭毛，但不能运动，也不被相应噬菌体所感染；在适宜条件（如高渗培养基）可生长繁殖、形成菌落，形成芽孢。及恢复成有细胞壁的正常结构。比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料③球状体：采用溶菌酶处理G-细菌后能获得的残留部分细胞壁（外壁层）的球形体。与原生质体相比，它对外界环境具有一定的抗性，可在普通培养基上生长。④支原体：是一类无细胞壁的能离开活细胞独立生长繁殖的最小型原核细胞型微生物。细胞很小，光学显微镜下勉强可见，能透过细菌滤器。被认为是整个生物界中尚能找到的能独立营养的最小型生物。又称“霉形体”。糖被概念：某些细菌在一定营养条件下向胞外分泌出厚度不定的胶粘状物质，包被于细胞壁表面，此称为糖被。类型：1.包裹在单个细胞壁上：（1）有固定层次的糖被荚膜（capsule）微荚膜（microcapsule）（2）呈松散状态、未固定的糖被粘液层（slimelayer）(无明显界面)2.包裹几个细胞或一群细胞：菌胶团（zoogloca）功能：保护作用贮藏碳源和能源养料透性屏障和离子交换系统表面附着作用细菌间的识别作用堆积代谢废物芽孢概念：某些细菌细胞内形成的一种抗逆性强的休眠结构。一个细胞只产生一个芽孢，无繁殖功能。常见菌属：芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)实践意义：1.芽孢的形态和位置是细菌分类的依据之一。2.利用芽孢的抗热性，易于提高芽孢产生菌的筛选。3.是否能消灭芽孢是衡量各种消毒灭菌手段的最重要的指标4.芽孢在适宜的条件下可以重新萌发成为营养态细胞，产芽孢细菌的保藏多用其芽孢。放线菌一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌。广泛分布在含水量较低，有机物较丰富和呈微碱性的土壤中特征：①放线菌的菌丝为单细胞②有原核，核糖体为70S③细胞壁主要成分是肽聚糖，不含纤维素，几丁质，革兰氏染色阳性，对溶菌酶敏感④最适生长pH值近中性或微碱性，与细菌相近而不同于真菌(一般偏酸性)⑤凡能抑制细菌的抗生素也能抑制放线菌，而抑制真菌的抗生素对放线菌无抑制作用⑥有的放线菌产生有鞭毛的孢子，其鞭毛结构与细菌鞭毛相同真核微生物细胞核具有核膜；能进行有丝分裂；细胞质中有线粒体或同时有叶绿体等细胞器。真菌的特点：①细胞核:真核；②营养体:一般为发达的菌丝体，也有单细胞；③细胞壁:多含壳多糖（几丁质）；④营养方式:不能进行光合作用，吸收式异养；⑤繁殖方式:产生无性孢子和(或)有性孢子；⑥生长环境：陆生性较强。细胞壁：藻类：纤维素为主酵母菌:葡聚糖和甘露聚糖低等真菌：纤维素为主高等真菌：几丁质(chitin)为主酵母菌俗称，凡单细胞世代时间较长，通常以出芽方式进行无性繁殖的真菌特征:

1.

个体一般以单细胞状态存在；

2.

多数营出芽生殖，有的裂殖；

3.

能发酵糖类产能；

4.

细胞壁常含有甘露聚糖；

5.

喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。繁殖方式无性生殖：①芽殖②裂殖③无性孢子繁殖（掷孢子、厚垣孢子、节孢子）2.有性生殖：子囊孢子生活史：①世代交替型（单倍体与二倍体共存）：酿酒酵母（出芽/4个子囊孢子）②单倍体型（N时间长，2N不能生存）：八孢裂殖酵母（裂殖/8个子囊孢子）③双倍体型（营养体以2N形式存在）：路德类酵母丝状真菌——霉菌丝状真菌（俗称霉菌）——指菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体结构的真菌丝状真菌与人类的关系：①工业上有利于酶制剂、抗生素、维生素、生物碱等生产②有利于酱油、豆豉、腐乳等食品制造③良好的实验材料④大量真菌可引起农业产品霉变⑤是植物最主要的病原菌⑥引起动物和人体传染病气生菌丝特化形态——子实体（1）结构简单的子实体①产无性孢子：分生孢子头：曲霉属、青霉属孢子囊：毛霉属、根霉属②产有性孢子：担子菌的担子（2）结构复杂的子实体常见的霉菌种属及其特征毛霉属（无隔菌丝；匍匐菌丝；孢囊孢子）根霉属（无隔菌丝；匍匐菌丝、假根；孢囊孢子）曲霉属（有隔菌丝；子实体；分生孢子；足细胞）青霉属（有隔菌丝；子实体；分生孢子）Aspergillusflavus（黄曲霉）Asp.niger（黑曲霉）Rhizopusoryzae（米根霉）Penicilliumchrysogenum（产黄青霉）Neurosporacrassa（粗糙脉孢霉）Agaricusbisporus(双孢蘑菇)Mucor(毛霉属)Fusarium(镰孢霉属)烟草花叶病毒（TMV）TMV是无包膜病毒，外观刚直杆状，由衣壳蛋白和单链RNA组成，病毒粒对称体制为螺旋对称，大约每3个核苷酸结合一个蛋白质亚基。噬菌体的繁殖1）吸附：噬菌体与特异性细胞表面受体接触；2）侵入：尾管插入细胞壁/膜,酶解CW，头部核酸注入宿主细胞，蛋白外壳留外；3）增殖：噬菌体的核酸复制与蛋白质合成，时序性。4）成熟：分部自我装配，成为噬菌体颗粒；5）裂解：酶解细胞膜和壁，裂解细胞，释放。烈性噬菌体：如T4、ΦΧ174，感染细胞后,能在寄主细胞内增殖，产生大量子代噬菌体并能引起敏感细菌细胞迅速裂解的噬菌体温和噬菌体/溶原性噬菌体：噬菌体侵染宿主后，其基因组与宿主DNA整合，并与宿主DNA同步复制，一般不引起宿主细胞裂解的噬菌体。如E.coli的、P1、P2。微生物六大类营养要素碳源氮源能源生长因子无机盐水碳源物质主要有：糖、有机酸、醇、脂、烃根据碳源划分微生物的营养类型：异养微生物：必须利用有机碳源，微生物种类多。对于一切异养微生物来说，其碳源同时又兼作能源，因此这种碳源又称为双功能营养物自养微生物：以无机碳源为唯一或主要碳源，微生物少微生物利用碳源的特点（1）有速效碳源和迟效碳源之分（糖类>有机酸/醇/脂类）（2）具有选择性，利用能力有差异氮源物质主要有：蛋白质（肽、氨基酸）、铵盐、硝酸盐速效氮源：分子氮、玉米浆，有利于菌体生长迟效氮源：黄豆饼粉、玉米饼粉，有利于代谢产物积累（酿酒酵母：氨基酸自养型）生长因子：一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳源，氮源自行合成的、所需极微量的有机物。作用：辅酶或酶活化所需。狭义：维生素广义：维生素、碱基（嘌呤及嘧啶）、卟啉、C4-C6脂肪酸、氨基酸等培养基中生长因子来源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、肝浸液等维生素的生产菌种阿舒假囊酵母或棉假囊酵母生产维生素B2谢氏丙酸杆菌、若干链霉菌和产甲烷菌生产维生素B12杜氏盐藻属生产b-胡萝卜素划分依据营养类型特点碳源自养型以CO2为唯一或主要碳源异养型以有机物为碳源(大多数)能源光能营养型以光为能源化能营养型化学能为能源有机营养型以有机物为电子供体生长因子野生型或原养型不需外界需提供生长因子营养缺陷型需提供生长因子营养物质进入微生物的方式自由扩散物质通过原生质膜上的小孔，由高浓度向低浓度扩散的物理过程。无载体，依靠胞内外溶液浓度差，顺浓度梯度运输；不消耗代谢能，无特异性；运输H2O、O2、CO2、甘油、乙醇、某些氨基酸等小分子或亲水性分子。促进扩散特点：需要特异性的载体蛋白顺浓度梯度运输不消耗能量运输SO42-、PO43-、各种单糖、氨基酸、维生素、甘油3.主动转运特点：是微生物吸收营养的主要方式可逆浓度梯度运输。对贫养菌有利。需特异性载体蛋白的构象改变，耗能。亲和力改变→蛋白构象改变→耗能运输无机离子、有机离子（氨基酸、有机酸）、乳糖、葡萄糖等糖类4.基团移位特点：属主动运输类型溶质分子被运输过程中发生化学修饰、定向磷酸化需复杂的运输酶系参与，如大肠杆菌中的PTS运输葡萄糖、果糖、甘露糖、嘌呤、核苷酸等培养基类型按微生物的主要类群，所需要的培养基成分也不同：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基，LB(Luria-Bertani)放线菌：高氏一号培养基（淀粉硝酸盐培养基）霉菌（真菌）：察氏合成培养基（蔗糖硝酸盐培养基），PDA(Potato-Dextrose-Agar)酵母菌:麦芽汁培养基大肠杆菌：葡萄糖铵盐培养基按物理性质分：液体培养基：用途：大量培养微生物，研究生理代谢等。固体培养基：琼脂含量一般约为15-20g/L或50-120g/L用途：固体培养基能提供表面，形成单菌落，可用于菌种分离、菌落计数、鉴定、保藏等。固体培养，获取真菌孢子。半固体培养基：琼脂含量一般约为0.5%（0.2～0.7％）用途：观察细菌的运动，厌氧菌培养，测定噬菌体效价。脱水培养基：用途：方便运输和使用。按功能不同分：选择培养基根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。功能：混合菌中劣势菌变成优势菌，提高该菌的筛选效率类型：①加富型选择培养基②抑制性选择培养基应用实例：我国宋代利用红曲霉耐酸和耐高温的特性，采用明矾调节酸度和用酸米抑制杂菌的高温培养法，获得了纯度很高的红曲常用的选择培养基：①酵母菌富集培养基②Ashby无氮培养基（富集好氧性自生固氮菌用）③Martin培养基（富集土壤真菌用）④含糖酵母膏培养基（在厌氧条件下富集乳酸菌用）鉴别培养基加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌落与外形相似的其他菌落相区分的培养基。用途：（肠道致病菌）细菌学检验，遗传研究EMB——伊红美蓝乳糖培养基EMB鉴别原理：G+菌抑制剂，产酸指示剂，酸性染色剂EMB中的伊红和亚甲蓝两种苯胺染料可抑制G+细菌和一些难培养的G-细菌，在低酸度下，这两种染料会结合并形成沉淀，起着产酸指示剂的作用。因此，试样中多种肠道细菌会在EMB培养基平板上产生易于用肉眼识别的多种特征性菌落，尤其是大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌：能强烈分解乳糖而产生大量混合酸，菌体表面带H+，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与亚甲蓝接合，故使菌落染上深紫色，且从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。培养基四个原则：目标明确、营养协调、理化适宜、经济节约培养基四种方法：生态模拟、借鉴文献、精心设计、试验比较培养基的灭菌：高压蒸汽灭菌、过滤除菌、分别灭菌、间隙灭菌大肠菌群任何可发酵乳糖产酸产气的G-、杆状、无芽孢、兼性厌氧，在温血动物肠道中的正常菌群，数量极多，用作指标可以灵敏地推断水源是否曾与动物粪便接触以及污染程度如何类型：大肠杆菌、产气肠杆菌、柠檬酸杆菌属、肺炎克氏杆菌饮用水的微生物指标：《生活饮用水卫生标准GB5749-2006》：细菌总数：<100CFU/mL，总大肠菌群（CFU/100mL）：不得检出耐热大肠菌群（CFU/100mL）：不得检出大肠埃希氏菌（CFU/100mL）：不得检出。微囊蓝细菌毒素-LR（mg/L）：0.001。典型生长曲线定量描述液体培养基中单细胞微生物群体生长规律的实验曲线功能：群体中微生物细胞数量的增加或细胞生物量的增加（ΔN或ΔM）能反映细菌和酵母菌的群体生长状况根据微生物的生长速率常数，一般可把典型生长曲线粗分：迟缓期/延滞期特点：①生长速率常数等于零，即细胞不分裂②细胞合成新的成分，代谢活跃，RNA（特别是rRNA）含量增高③细胞形态变大或变长④对外界不良环境敏感缩短延滞期的方法：①以指数期接种龄的种子接种②采用较大的接种量③营养丰富的（天然）培养基指数期/对数期特点：①生长速率常数最大，生长速率恒定。②代时最短，细胞数目呈指数增长③代谢旺盛，细胞平衡生长④群体的生理特性较一致计算公式：①繁殖代数n==3.322(lgX2-lgX1)②生长速录常数R=n/（t2-t1）③代时G=1/R影响因素：①菌种②营养成分：营养丰富，代时短③营养物浓度：影响生长速率和总生长量④培养温度：影响生长速率实践意义：①代谢、生理研究的良好材料②增殖噬菌体的最适宿主③发酵工业中用作种子的最佳材料稳定期/最高生长期特点：①活细胞总数维持不变，即新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，菌体总数达到最高点（细菌109/ml）。②细胞生长速率为零③细胞生理上处于衰老，代谢活力钝化，细胞成分合成缓慢，G+染色发生变化。④代谢产物合成期。芽孢形成，次级代谢物开始形成稳定期到来原因/细胞总数不增加的原因：①营养物质不能满足生长需要：生长限制因子耗尽C/N比例失调②代谢废物或有害物质积累到抑制生长水平③pH、氧化还原势等物化条件越来越不适宜实践意义：①菌体和与菌体平行生长的终产品（SCP,乳酸）的最佳收获期；②代谢产物合成期：积累次生代谢产物，或形成芽孢(如Bt)；③导致了连续培养原理的提出和工艺技术的改进。延长稳定期的方法：

①补料(增加养料）②调节pH值③移取代谢产物以解除阻遏衰亡期特点：①负生长，细胞以指数速率死亡。但有时由于部分细胞产生抗性而使细胞死亡速率降低②细胞变形退化，有的发生自溶，G+染色发生变化③进一步合成或释放次级代谢产物④释放芽孢生长期的另一种分类方式：以指数期为主的菌体生长期以稳定期为主的代谢产物合成期分批培养将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获的培养方式连续培养培养过程中不断地补充营养物质和以同样的速率转移培养物，以使培养系统中的细胞数量和营养状态保持恒定，即处于稳态。优点：高效，便于自动控制，产品质量稳定；缺点：菌种易退化，易污染杂菌，培养基利用率低影响微生物生长的物理因素温度：生长温度三基点（最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度）各微生物的生长温度：嗜热链球菌37℃乳酸链球菌34℃灰色链霉菌37℃北京棒杆菌32℃产黄青霉30℃丙酮丁醇梭菌37℃酸碱度微生物的最适生长pH值细菌:pH7.0~8.0放线菌：pH7.0~8.5酵母菌:pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~6.0维持培养基PH的方法内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培养基的碳氮比。外源调节：按实际需要不断向培养液流加酸或碱液①磷酸缓冲液：pH值从6.0～7.6之间②加入CaCO3或碳酸氢钠3.氧浓度①专性好氧菌：固氮菌属、绿脓杆菌、白喉棒杆菌②兼性厌氧菌：酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、产气杆菌③微好氧菌：霍乱弧菌、螺杆菌属④耐氧菌：乳酸乳杆菌、乳链球菌、粪肠球菌⑤厌氧菌：产甲烷菌、梭菌属、拟杆菌属、梭杆菌属、双歧杆菌属生物氧化有机物质在生物体内经过一系列连续的氧化还原反应，逐步分解并释放能量的过程。实质是分解代谢。1.形式：①某物质与氧结合②脱氢③失去电子2.过程：脱氢、递氢、受氢3.类型：①呼吸作用（有氧或无氧）②发酵作用4.功能：①产能②产还原力③产小分子中间代谢物生物固氮大气中的分子氮通过微生物固氮酶的催化而还原成氨的过程，生物界中只有原核生物才具有固氮作用生物固氮六要素：①ATP的供应②还原力[H]及其传递载体③固氮酶④还原底物——N2⑤镁离子⑥严格的厌氧微环境固氮菌种类：自生固氮菌：独立固氮（固氮菌属、蓝细菌、巴氏梭菌等）共生固氮菌：须与它种生物共生（根瘤菌属、弗兰克氏菌属等）联合固氮菌：须生活在植物根际、叶面或动物肠道等处。根际—类芽孢杆菌属；叶面—固氮菌属；肠道：肠杆菌属等产ATP的磷酸化方式循环光合磷酸化非循环光合磷酸化嗜盐菌的紫膜光合磷酸化发酵广义：利用微生物生产有用代谢产物或食品、饮料的一类生产方式。狭义：无氧等外源电子受体条件下，在生物氧化过程中，以某些内源性中间代谢物作为最终电子受体的产能过程。特点：1）通过底物水平磷酸化产ATP；2）葡萄糖氧化不彻底，大部分能量剩存于发酵产物中；3）产能率低；4）产多种发酵产物类型：酒精发酵、乳酸发酵、混合酸发酵、丁二醇发酵、丁酸型发酵、氨基酸发酵有害微生物的控制灭菌采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。分杀菌作用和溶菌作用消毒采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，对被处理物体基本无害的措施防腐利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止物品发生霉腐的措施食品防腐措施低温：利用4℃以下的各种低温以保藏食物、药品、菌种等缺氧：在密闭容器中加入除氧剂，如铁粉；真空保藏干燥：采用晒干或红外线干燥保藏粮食、食品等，或在密封条件下用吸湿剂也可达到防霉高渗：通过盐渍或糖渍达到高渗高酸度：如泡菜、酸菜等。高醇度防腐剂：0.1%苯甲酸、0.2%山梨酸、脱氢醋酸等化疗利用具有高度选择毒力即对病原菌具高度毒力而对其宿主基本无毒的化学物质来抑制宿主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗该宿主传染病的一种措施抗生素微生物在其生命过程中合成的次生代谢产物或其人工衍生物。能抑制或干扰其它微生物的生命活动。最小抑制浓度往往很低。产生菌主要是放线菌类，50%以上是链霉菌属产生的。抗生素作用机制：抑制细菌细胞壁合成（万古霉素、杆菌肽）破坏细胞质膜（两性霉素）作用于呼吸链以干扰氧化磷酸化抑制蛋白质合成（链霉素、四环素、红霉素）抑制DNA合成（灰黄霉素）抑制RNA合成（利福平、利福霉素）青霉属、红霉素主要抗G+细菌链霉素、新霉素主要抗G-细菌、结核分枝杆菌四环素等抗G+、G-以及立克次氏体和衣原体加压蒸汽灭菌法方法：121℃（1.05kg/cm2或15p/吋2）维持15～20min。112℃（0.5kg/cm2或8p/吋2）20～30min。115℃（0.7kg/cm2或10p/吋2）20～30min。应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度例如：生理盐水、营养琼脂等培养基用121℃。含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用112℃。适用：耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品。控制微生物的化学方法：表面消毒剂、抗代谢药物、抗生素突变的类型①营养缺陷型：因突变而丧失产生某种生长所需物质合成的能力，因而必须在基本培养基中添加适量的某种物质才能生长的突变类型。（负选择标记，需采用影印平板法分离）②抗性突变型：因突变而产生了对某种代谢物（如抗生素）、代谢类似物、噬菌体、重金属离子或毒物的抗性的突变类型。（正选择标记，浓度梯度平板分离法易分离抗性突变株）③条件致死突变型：突变后在某种（温度）条件下可正常生长繁殖，而在另一条件下却无法生长繁殖的突变型（如大肠杆菌正常10～47.5℃，其温度敏感突变株在37℃可生长，42℃不可）突变的特点自发性、不对应性、稀有性、独立性、可诱变性、稳定性、可逆性诱变育种用物理或化学诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群，提高突变率，并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。如青霉素生产菌株的选育。步骤：原始菌种（出发菌株的选择）→单细胞悬液→诱变剂处理→初筛（以量为主）→复筛（以质为主）制备悬浮液要求：

①菌体处于对数生长期，并使细胞处于同步生长

②细胞分散且为单核单细胞，以避免表型迟延诱变剂：①非电离辐射类:紫外线、激光和离子束②电离辐射类：X射线、r射线、快中子③化学诱变剂：烷化剂、碱基类似物、吖啶化合物筛选的方法：一般筛选：平皿快速检测法、摇瓶培养法特殊筛选：①琼脂块移植法（产量突变株）实例：春日霉素要点：把诱变后的春日链霉菌分生孢子悬液均匀涂布在营养琼脂平板上，待长出稀疏的小菌落后，用打孔器一一取出长有单菌落的琼脂小块，并分别把它们整齐地移入灭过菌的空培养皿内，在合适额温湿度下继续培养4-5天，然后把每一个长满单菌落的琼脂块再转移到已混有供试菌种的大块琼脂平板上，以分别测定各小块的抑菌圈并判断其抗生素效价，然后择优取之②梯度平板法（抗药性突变株）梯度平板:一种含有某药物的梯度浓度的琼脂培养基平板，它由含药物的上半个斜面和不含药物的下半个斜面分两次浇合而成③营养缺陷型突变株筛选方法：诱变剂处理淘汰野生型：抗生素法/菌丝过滤法检出缺陷型：夹层培养法/限量补充法/逐个检出法/影印平板法鉴定缺陷型：生长谱法与筛选营养缺陷型突变株有关的培养基①基本培养基（MM）[-]：仅能满足野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基。②完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌株生长的天然或半合成培养基。③补充培养基（SM）[x]：在MM中有针对性地加入一或几种营养成分以满足某种相应营养缺陷型菌株生长的合成培养基。艾姆丝（Ames）试验原理：诱变剂能提高（回复）突变率材料：鼠伤寒沙门氏菌His－菌株（且DNA修复酶缺陷），老鼠肝脏抽提液（含羟基化酶）效果：快速、准确、价廉用途：检测环境中致癌物方法：在含待测可疑“三致”物的试样中，加入鼠肝匀浆液，经一段时间保温后，吸入滤纸片中，将滤纸片放置在平板中央培养，观察平板上菌落产生情况反映出是否含诱变剂及其浓度