2025年中图版选择性必修3生物上册阶段测试试卷

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A.引物1与引物2B.引物3与引物4C.引物2与引物3D.引物1与引物42、严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，直接关系到是否能得到质量高，产量多的理想产物，通常所指的发酵条件不包括()A.温度控制B.溶氧控制C.pH控制D.酶的控制3、下列有关稀释涂布平板法的叙述错误的是（）A.先将菌液进行一系列的梯度稀释B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面C.适宜条件下培养D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落4、草莓皱缩病毒（SCV）感染草莓时，会使其叶片扭曲皱缩，植株矮化，导致减产。为了能快速有效检测出该病毒，研究人员利用SCV的病毒粒子免疫健康小鼠，制备相应的单克隆抗体。下列有关叙述错误的是（）A.从免疫小鼠体内分离获得的B细胞可无限增殖B.在获得能分泌相应抗体的杂交瘤细胞的过程中，需要进行两次筛选C.用单克隆抗体检测草莓是否感染SCV是利用了抗原—抗体杂交的原理D.在制备单克隆抗体的过程中，用到了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术5、下列关于微生物的培养与应用的叙述正确的是（）A.用涂布分离法分离细菌时，需要用接种环将菌液涂布到培养基平面上B.在尿素固体培养基上，产脲酶细菌菌落周围会出现白色的透明环带C.利用醋酸菌将果酒发酵成果醋，需要不断向发酵装置中通入无菌空气D.利用微生物进行发酵制成的泡菜美味可口，含有的成分对人体均有益6、PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时()。A.仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸B.与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸C.同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸D.无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链7、如图为哺乳动物早期胚胎发育的过程；下列有关叙述错误的是（）

A.Ⅰ时期为桑椹胚，该时期的细胞具有发育的全能性B.过程a和b比卵裂期胚胎，细胞数目增多，有机物的含量增多C.胚胎移植选择处于Ⅰ或Ⅱ时期的胚胎最易成功D.细胞分化从Ⅱ时期开始贯穿于动物的整个生命历程评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)8、下列就“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的有关叙述，正确的是（）A.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置B.同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数C.在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息必定相同D.在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染9、下列关于植物组织培养及其应用的说法中，正确的是（）A.植物体体内具完整细胞结构的活细胞均可作为组织培养的外植体B.不同培养阶段的培养基中生长素与细胞分裂素的比例应不同C.单倍体育种和转基因植物的培育需要利用植物组织培养技术D.利用植物组织培养技术可实现某些重要细胞产物的工厂化生产10、地中海贫血症是一种遗传性溶血性贫血症。有一对表现型正常的夫妇，他们以前生育过地中海贫血症儿子，该患儿的珠蛋白结构异常，在一岁时死去。现在妻子又怀孕了，于是进行了产前诊断，诊断时用限制酶PstI酶切后电泳结果如图1所示，图2为珠蛋白基因及其侧翼序列的Pst酶切位点。下列叙述正确的是（）

A.正常的珠蛋白基因长度为4．4kb突变后的致病基因长度为3．7kbB.若未产生新的PsI酶切位点，则致病基因可能是碱基对缺失产生的C.致病基因是隐性基因，并且夫妻两人都是隐性致病基因的携带者D.孕妇体内的胎儿虽然含有致病基因，但是生下来并不会患该病11、营养缺陷型菌株是野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种生长因子的能力，只能在补充了相应的生长因子的基本培养基中才能正常生长的变异菌株。某研究小组对酵母菌用紫外线照射后将其接种到甲培养皿的培养基上，一段时间后将甲培养皿的菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养皿的培养基中，进一步培养得到如下图所示结果。下列分析正确的是（）

A.接种到甲培养皿采用的是稀释涂布平板法B.甲、丙两培养皿中的培养基是基本培养基C.甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少D.乙中生长的酵母菌都不属于营养缺陷型菌株12、北方白犀牛目前仅剩两头雌性个体，科研人员尝试通过现代生物技术，利用实验室冷冻保藏的少量北方白犀牛精子拯救该物种。下列说法正确的是（）A.科研人员可以使用体外受精、胚胎移植等技术繁育北方白犀牛的试管动物B.若利用体细胞核移植技术培育出北方白犀牛的克隆动物，该动物一定是雌性C.为了繁育更多子代，可以选择人工繁育技术得到的原肠胚期的胚胎进行分割D.进行胚胎移植时，经同期发情处理过的雌性北方白犀牛不会发生免疫排斥反应13、克隆动物常用的核移植方法主要有细胞质内注射法和透明带下注射法两种。前者是用微型注射针将供体细胞的细胞核吸出注入去核卵母细胞质内；后者是直接将供体细胞注入去核卵母细胞透明带内，然后促使两个细胞融合。世界首例体细胞克隆北极狼的供体细胞来自哈尔滨极地公园的一只野生北极狼的皮肤样本，卵母细胞来自一只处于发情期的母犬，代孕母体则是一只比格犬。下列叙述错误的是（）A.克隆北极狼的性状由野生北极狼、发情期的母犬和比格犬的基因共同决定B.相比之下，透明带下注射法对供体细胞核和卵母细胞的损伤更小C.供体细胞注入卵母细胞透明带内后，就可自行进入卵母细胞D.细胞分裂、分化形成克隆胚胎的过程中发生了基因重组14、刚果红是一种染料，可以与纤维素形成红色复合物，当红色复合物中的纤维素被分解后红色消失。表中是筛选纤维素分解菌的培养基，利用此培养基可从土壤中筛选纤维素分解菌，结果如图。下列说法正确的是（）。培养基的成分：纤维素15gFeSO40．5gKH2PO41gZnSO40．5gK2HPO41gCaCl20．5g尿素0．5g刚果红适量MgSO40．5g琼脂20g定容1L

A.培养基中纤维素和尿素分别提供碳源和氮源B.KH2PO4和K2HPO4在提供无机盐的同时还能维持培养基的pHC.将土壤稀释液接种在平板上的方法为稀释涂布平板法D.平板上5个菌落都有透明圈，说明5个菌落都能分解纤维素15、免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（）

A.图示中的DNA可以是非牛乳基因中的DNA片段B.如果第三次冲洗不充分则有可能出现假阳性现象C.电泳检测结果只能判断阳性与否，无法判断牛乳中抗生素的含量D.微量抗原抗体反应通过PCR技术间接扩增放大，从而达到可检测的水平16、淀粉经淀粉酶水解后得到的产物是重要的工业原料；但工业化生产常需在高温条件下进行，而现有的淀粉酶耐热性不强，科研人员发现将淀粉酶（AmyS1）第27位的亮氨酸替换为天冬氨酸能产生耐热性高的淀粉酶（AmyS2），由此科研人员根据AmyS2的氨基酸序列设计并人工合成了AmyS2基因，将其导入芽孢杆菌内，具体过程如下图所示。最终结果表明，与导入质粒B相比，导入质粒C的芽孢杆菌培养液中更易获得并提纯AmyS2．下列说法错误的是（）

A.获得AmyS2基因并将其导入芽孢杆菌得到AmyS2的过程是通过基因工程实现的B.构建质粒C时需用限制酶Eco52I和BamHI同时切割质粒B和信号肽基因C.信号肽基因表达的产物可帮助核糖体上合成的AmyS2进入内质网和高尔基体D.可用PCR技术检测芽孢杆菌的DNA上是否插入了AmyS2基因评卷人得分三、填空题(共9题，共18分)17、第三步：将目的基因导入______18、目的基因是指：______19、植物基因工程：______。20、大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温，而DNA在_________℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解或破坏_______，食盐能____________细胞膜。21、动物细胞培养的流程：

取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用______处理分散成______→制成______→转入培养瓶中进行______培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续_____培养。22、沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌；被感染了沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染的食品，会使人发生食物中毒。沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死。肉桂精油是从肉桂树中提炼获得的，具有不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发的特性，能抑制沙门氏菌的繁殖。回答下列问题：

（1）培养沙门氏菌时要进行无菌操作，常用的灭菌方法有________（答出两种）。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板________（填“倒置”或“正置”）。单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是________。

（2）从鸡粪便取样，经选择培养后需要经过一系列________才能将样品涂布到鉴别培养基上。对获得的沙门氏菌常采用________的方法长期保存。

（3）根据题干信息，为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中储存、加工食品的方法是________。

（4）根据肉桂精油的化学特性，可采用________法来提取，提取过程中影响精油品质的因素有________。23、近年来，克隆技术的发展取得了巨大突破｡在日常生活中，我们遇到过与克隆技术有关的问题吗？_____。24、基因表达载体的组成及其作用。

一个基因表达载体的组成，除了______________、_______________外，还必须有__________、______________等(如图所示)。

①______________②______________③______________

④______________⑤______________⑥______________

⑦______________25、应用分析与比较的方法，对生殖性克隆与治疗性克隆进行列表阐述｡

生殖性克隆与治疗性克隆的比较。比较项目生殖性克隆治疗性克隆含义__________用到的技术__________目的__________评卷人得分四、判断题(共1题，共3分)26、胚胎发育至囊胚期时，细胞逐渐分化。（选择性必修3P58）()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共4题，共8分)27、下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图；请据图回答：

（1）泡菜是乳酸菌发酵的产物，乳酸菌的代谢类型是___________________。制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜，原因是____________________________。

（2）将盐与清水按照一定的比例配制盐水，待盐水煮沸冷却后，注入装好原料的泡菜坛中，同时加入一定量的“老汁”(陈泡菜水)。将盐水煮沸冷却的目的是____________________；加入“老汁”的作用是____________________________。

（3）测定亚硝酸盐含量的方法是_________________。即在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与____________________________发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合后形成_______________色的染料，然后将显色反应后的样品与已知浓度的____________进行目测比较，大致估算出亚硝酸盐的含量。28、化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。碳源细胞干重（g/L）S产量（g/L）葡萄糖3.120.15淀粉0.010.00制糖废液2.300.18

回答下列问题。

(1)通常在实验室分离纯化培养微生物时，需要设置对照实验，如果自变量设为培养基不同，则是检测____________________________。如果自变量设为_________________；则是检测培养基灭菌是否彻底。

(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______；用菌株C生产S的最适碳源是______。菌株C的生长除需要碳源外，还需要______（答出2点即可）等营养物质。

(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其根本原因是______。

(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：______。

(5)为测定菌株C的含量，常用_________________进行接种，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，原因是_____________。29、某些老陈醋会出现产气现象；原因是老陈醋中含有产气细菌。产气细菌是一类能产生过氧化氢酶的细菌，产气菌产生的气体积累会引起胀瓶，影响产品安全。实验小组以瓶装变质老陈醋（胀瓶）；未变质老陈醋为实验材料，筛选出导致老陈醋产气的细菌。回答下列问题：

(1)为了筛选产气细菌，实验人员设置了甲、乙、丙三组培养基，甲作为空白对照组，乙接种未变质的老陈醋，丙接种__________。阐述如何从上述培养基中初步筛选疑似产气细菌的菌株：__________。

(2)实验小组初步筛选出了A1；A2和A3三株疑似的产气细菌；筛选过程如下图所示。

①过程a的接种方法是__________，判断依据是__________。

②统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致__________，或培养时间太长导致__________。

③现有5%的过氧化氢溶液，A1、A2和A3菌株，必要的培养基等实验器材。写出判断A1、A2和A3三种菌株是否为产气细菌的实验思路：__________。

(3)分别用三组平板培养A1、A2、A3三种菌株，然后在培养基上分别加入等量一定浓度的青霉素溶液，培养一段时间后可以观察到一圈清晰区（抑菌圈），这是细菌生长被抑制所致。测量清晰区的直径，数据如下表所示：。细菌不同浓度青霉素条件下清晰区直径/mm5/（μg·mL-1）7.5/（μg·mL-1）10/（μg·mL-1）15/（μg·mL-1）20/（μg·mL-1）20/（μg·mL-1）A10.2281317A2710121516A356566

该实验的目的是__________。从表中数据可以看出，5μg·mL-1青霉素和20μg·mL-1青霉素在抑制A1和A3菌株上的区别是__________、__________。30、科学家的发现给人类的生活带来了无限的想象；他们采集了某深海海域的沉积物样品，分离；鉴定得到其中的深海放线菌，以期获得具有前景的抗生素替代品。据此回答下列问题：

(1)研究人员欲筛选出深海放线菌进行研究，取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后取菌液通过_______________法接种到高氏一号（加数滴质量分数为10%的酚）培养基表面以获得单菌落。

(2)通过PCR技术扩增分离得到的放线菌的16SrRNA基因可进行菌株的种属鉴定。PCR技术中起关键作用的酶是_____________。该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是______________。PCR产物一般可通过_________________鉴定。

(3)科学家还将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中。2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。在这个实验过程中，逆转录病毒的作用是_______________如何证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用？请写出实验设计思路______________评卷人得分六、综合题(共4题，共36分)31、2015年；屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。工业上青蒿素一般从黄花蒿中提取，产量低，价格高。基因工程和细胞工程等技术为培育出含青蒿素高的黄花蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量黄花蒿幼苗后，偶然发现了一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株中与青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速、大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是_________；PCR仪实质上是能够自动调控温度的仪器，因此，在合成子链时，必须加入______酶；这种酶在高温下仍能保持活性。

（2）如果用黄花蒿发育某个时期的mRNA反转录产生的cDNA与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就称为黄花蒿的_________，获得的cDNA与黄花蒿细胞中该基因的碱基序列________(填“相同”或“不同”)。

（3）将获得的突变基因导入普通黄花蒿之前；先构建基因表达载体，图1；2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_______，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上启动子，启动子是______识别和结合的部位。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取_____________技术。32、黄色镰刀菌污染动物饲料后会产生一种毒性较高的代谢产物—－脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）；这给饲养的动物及人类健康带来巨大威胁。科研人员利用杂交瘤技术制备出抗DON的单克隆抗体，实现了对DON的高效低成本检测。回答下列问题:

（1）制备单克隆抗体时，首先需要_______，随后从小鼠脾脏获得Ｂ淋巴细胞进行培养，进行细胞培养时所需气体____________。

（2）通过_________技术获得杂交细胞后，再经过筛选获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是______________。

（3）为获得大量的单克隆抗体，可将杂交瘤细胞进行______，从________中提取;或将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔；从小鼠腹水中提取。

（4）将已知浓度带荧光标记DON的溶液（标准样品）、未知浓度不带荧光标记DoN的溶液（待测样品）等量混合，加入事先吸附有上述单克隆抗体的固相载体中保温一段时间，________________________（抗体与两种DoN的结合能力相同）。得出划线部分判断所依据的原理是____________________。33、肾上腺-脑白质营养不良（ALD）是一种伴X染色体的隐性遗传病（致病基因用d表示）；患者发病程度差异较大，科研人员对该病进行了深入研究。图1是关于该病的某家系的遗传系谱图。研究人员提取了该家系中四名女性与此基因有关的DNA片段并进行PCR，产物用限制酶Ⅰ酶切后进行电泳（已知正常基因中含一个限制酶Ⅰ的酶切位点，突变基因中增加了一个限制酶Ⅰ的酶切位点），结果如图2所示：

(1)由图2可知，突变基因新增的酶切位点位于_________（填“310bp”“217bp”“118bp”或“93bp”）。图2所示的四名女性中_______________是杂合子。

(2)已知女性每个细胞所含两条X染色体中的任意一条总是保持固缩状态而失活，推测失活染色体上的基因无法表达的原因是______________________________。

由此推断，Ⅱ-3、Ⅱ-4发病的原因是来自__________（填“父亲”或“母亲”）的X染色体失活概率较高；以另一条染色体上的基因表达为主。

(3)ALD可造成脑白质功能不可逆损伤，图1家系中Ⅱ-1（不携带d基因）与Ⅱ-2婚配后，不考虑新的突变，若生女孩，则_____（填“一定”“不一定”或“一定不”）患病，原因是______________________________。

(4)ALD可造成脑白质功能不可逆损伤，尚无有效的治疗方法，可通过遗传咨询和_________对该病进行监测和预防。若要调查该病在人群中的发病率，需要保证___________________（答出两点）。34、玉米是我国重要的粮食作物，白粉病是一种造成玉来严重减产的病害。科研人员利用基因工程技术将抗白粉病基因随机转入玉米中，获得抗病株。为进一步研究抗病株的遗传特性.让抗病株与原种进行杂交，结果如表所示。请回答下列问题。组别亲本F1F2表型及比例1♀抗病株x♂原种自交原种:抗病株≈4.93:12♂抗病株x♀原种自交原种:抗病株≈4.85:1

(1)玉米的感病与抗病是一对______________性状。相对于原种的感病性状，抗病性状为_______性。

(2)根据F2的表型及比例能否判断控制这对性状的基因的遗传遵循分离定律还是自由组合定律?请说明理由。_______________

(3)为了阐明抗病性状的遗传基础，研究者分别选取原种和抗病株的叶片,对候选染色体1和2上相关的基因进行PCR扩增，电泳结果如图所示，请推测抗病株抗病性状出现的原因。________________

(4)研究过程得知，插入抗病基因会引起某种配子部分致死，请设计实验确定是雄配子部分致死还是雄配子部分致死,并预测结果和结论。___________参考答案一、选择题(共7题，共14分)1、C【分析】【分析】

本题考查PCR的相关知识。PCR全称为聚合酶链式反应；是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。PCR的原理是DNA复制，需要的条件包括：模板DNA；四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。PCR扩增DNA的过程包括：高温变性、低温复性、中温延伸过程。

【详解】

要获得B链，则要获得引物之间的DNA片段，根据PCR中子链延伸方向为5，到3，，故需选择引物2与引物3进行扩增，选C。2、D【分析】【详解】

试题分析：微生物的生活需要适宜的温度和PH；溶氧量的多少直接影响到发酵产物的生成，都需要加以控制，酶由微生物细胞产生，对微生物细胞的代谢有催化作用，通常不需要加以控制，A；B、C三项均错误，D项正确。

考点：本题考查微生物发酵的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。3、D【分析】【分析】

稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落；即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞；

计数时；首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度；一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数．此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。

【详解】

AB；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释；然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，AB正确；

C；涂布平板后需要将其放置在适宜的条件下培养；以便长出菌落，C正确；

D；在不同稀释度的菌液接种后；只有在一定的稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物才能分散成单个细胞，从而能够在培养基表面形成单个菌落；如果稀释度过低，将不会形成单个菌落；如果稀释度过高，可能没有菌落生成，D错误。

故选D。4、A【分析】【分析】

单克隆抗体的制备：

（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原；然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。

（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

（3）克隆化培养和抗体检测。

（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。

（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

【详解】

A；从小鼠体内中分离获得的已免疫的B细胞；能产生抗体，但不能增殖，A错误；

B；将已免疫的小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；获得能分泌特定抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过选择培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过专一抗体检测筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；

C；单克隆抗体的优点特异性强；灵敏度高，可大量制备，单克隆抗体检测草莓是否感染SCV，利用了抗原-抗体杂交的原理，C正确；

D；动物细胞培养技术是动物细胞工程技术的基础；动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体，D正确。

故选A。5、C【分析】【分析】

1；参与果酒制作的微生物是酵母菌；其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。

2；参与果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陈代谢类型是异养需氧型，果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。

【详解】

A；用涂布分离法分离细菌时；所用的工具是涂布器，不是接种环，A错误；

B；在尿素固体培养基上；产脲酶细菌菌落周围会出现红色环带，因为细菌产生的脲酶催化尿素分解产生了氨，导致培养基呈碱性，培养基中的酚红指示剂遇碱性条件会变红，B错误；

C；醋酸菌在有氧条件下才能将乙醇氧化成醋酸；所以利用醋酸菌将果酒发酵成果醋，需要不断向发酵装置中通入无菌空气，C正确；

D；利用微生物进行发酵制成的泡菜中含有一定量的亚硝酸盐；其对人体是有害的，D错误。

故选C。6、B【分析】【分析】

关于PCR技术的相关知识：

1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

2、原理：DNA复制。

3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。

4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶；高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

【详解】

当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时，此单链引物固定端为5′端，因此与它互补的子链从另一端开始合成，即与引物II结合进行DNA子链的延伸。

故选B。7、B【分析】1；胚胎发育的过程：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体。①卵裂期：细胞进行有丝分裂；数量增加，胚胎总体积不增加。②桑椹胚：32个细胞左右的胚胎（之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞）。③囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔（注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化）。④原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。（细胞分化在胚胎期达到最大限度）

2；分析题图：Ⅰ表示桑椹胚；Ⅱ表示囊胚，Ⅲ表示原肠胚。

【详解】

A；Ⅰ时期为桑椹胚；含有的所有细胞都是全能细胞，该时期的细胞具有发育的全能性，A正确；

B、过程a表示卵裂形成桑椹胚，过程b表示桑椹胚形成囊胚；这两个过程细胞均需要消耗能量，故胚胎中有机物的含量均减少，B错误；

C；胎移植选择处于Ⅰ桑椹胚或Ⅱ囊胚时期的胚胎最易成功；C正确；

D；细胞分化从Ⅱ囊胚时期开始贯穿于动物的整个生命历程；D正确。

故选B。

【点睛】二、多选题(共9题，共18分)8、A:B:D【分析】【分析】

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中；需要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，计数的关键是经梯度稀释后的倍数要合适，计数时通常选择菌落数在30-300之间的实验组平板进行计数。

【详解】

A；倒置培养的原因是可以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染；经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置，以防止杂菌污染，A正确；

B；为使实验结果更准确；同一稀释度下可以多涂布几个平板，至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数，求平均值，B正确；

C；细菌在分裂生殖中也会产生基因突变；虽然一个菌落是由一个活菌繁殖而来，但是个菌落中所有细胞的遗传信息不一定相同，C错误；

D；证明选择培养基没有被杂菌污染的方法是对培养基进行空白培养；即选取未接种的培养皿与接种样品的培养皿同时培养，在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染，D正确。

故选ABD。9、A:B:C:D【分析】【分析】

植物组织培养：1；过程：离体的植物组织；器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化产生胚状体，最好发育成植株（新植体）。决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要。

2；原理：植物细胞的全能性。

3；应用：植物繁殖的新途径（快速繁殖优良品种、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种和突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。

【详解】

A；用于培养的植物细胞必须具有完整的细胞核；以保证有全套的遗传信息，因此植物体体内具完整细胞结构的活细胞均可作为组织培养的外植体，A正确；

B；脱分化过程和再分化过程所需的培养基中生长素与细胞分裂素的比例应不同；如生长素与细胞分裂素用量比值适中时，促进愈伤组织的形成；生长素与细胞分裂素用量比值低时，有利于芽的形成；生长素与细胞分裂素用量比值高时，有利于根的形成，B正确；

C；单倍体育种和转基因植物的培育都要经历细胞到植株的过程；因此都需要用到植物组织培养技术，C正确；

D；利用某些细胞能产生特定的产物；通过组织培养使细胞数量增加，进而增加产量，实现工厂化生产，D正确。

故选ABCD。

【点睛】10、B:C:D【分析】【分析】

限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列；并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。

【详解】

A、由图示可知，两个PstI酶切位点之间分别是4.4kb和3.7kb，正常的β珠蛋白基因和突变的致病基因位于酶切位点内部，因此两个基因长度分别小于4.4kb和3.7kb；A错误；

B、含有珠蛋白基因的DNA片段的PstI酶切位点之间的长度由4.4kb变为3.7kb；而突变并未产生新的酶切位点，由此可知酶切位点之间发生了碱基对的缺失，而且这种差异导致了正常基因突变为致病基因，因此突变可能就是碱基对的缺失所导致的，B正确；

C；该夫妇已经生育过患病孩子；因此致病基因是隐性的，夫妻两人都是携带者，C正确；

D、图1可以看出胎儿含有3.7kb，即含有致病基因，但是同时含有4.4kb；即含有显性的正常β-珠蛋白基因，即胎儿为杂合子，不会患病，D正确。

故选BCD。11、A:C:D【分析】【分析】

微生物常见的接种的方法：

（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种；划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；由甲平板观察可知；平板中菌落分布均匀，采用的是稀释涂布平板法，A正确；

B；由题图信息分析可知；甲、丙培养基菌落数目多，含有野生型酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株，而乙培养皿菌株是某种营养缺陷型酵母菌菌株，据此推测，乙培养皿的培养基是基本培养基，甲和丙是补充了相应的生长因子的培养基，B错误；

C；由于基因突变具有不定向性；因此接种到甲培养皿的酵母菌可能还有其他营养缺陷型，且有些菌落不一定由一个酵母菌形成，故甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少，C正确；

D；由题图信息分析可知；乙培养皿的培养基是基本培养基，故该培养皿中能够形成的菌落是野生型菌株，不属于营养缺陷型菌株，D正确。

故选ACD。12、A:B:D【分析】【分析】

胚胎移植：（1）概念：是指将雌性动物的早期胚胎；或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的；生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术，其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”；

（2）胚胎移植的基本程序主要包括：①对供；受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体；有健康的体质和正常繁殖能力的受体，用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹胚或囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。

【详解】

A；因为有两头雌性个体和少量北方白犀牛精子；所以科研人员可以使用体外受精、胚胎移植等技术繁育北方白犀牛的试管动物，拯救北方白犀牛物种，A正确；

B；目前只有雌性个体；即体细胞只有雌性动物的体细胞，若利用体细胞核移植技术培育出北方白犀牛的克隆动物，该动物一定是雌性，B正确；

C；为了繁育更多子代；可以选择人工繁育技术得到的桑椹胚或囊胚时期的胚胎进行分割，C错误；

D；在进行胚胎移植时；要用激素进行同期发情处理，为胚胎移入受体提供相同的生理环境，经同期发情处理过的雌性北方白犀牛不会发生免疫排斥反应，D正确。

故选ABD。13、A:C:D【分析】【分析】

动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核；移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成为动物个体。

【详解】

A；克隆北极狼的供体细胞来自野生北极狼；卵母细胞来自发情期的母犬，因此性状由野生北极狼、发情期的母犬的基因共同决定，比格犬只是代孕母体，不提供遗传物质，A错误；

B；透明带下注射法不抽取供体细胞的细胞核；操作简单且对供体细胞核损伤小，同时注射的位置是卵母细胞外的透明带，然后诱导两个细胞融合，对卵母细胞的损伤小，B正确；

C；供体细胞注入卵母细胞透明带内后；还需要电融合法等诱导才能使供体细胞进入卵母细胞形成重构胚，C错误；

D；细胞分裂、分化形成克隆胚胎的过程是有丝分裂过程；而基因重组发生在减数分裂过程，D错误。

故选ACD。14、A:B:C【分析】【分析】

本题知识点为刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理、培养基中各物质的作用。刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。纤维素为纤维素分解菌提供碳源，尿素为纤维素分解菌提供氮源，KH2PO4和K2HPO4具有缓冲作用；在提供无机盐的同时还能维持培养基的pH。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。

【详解】

A；在此培养基中；纤维素为纤维素分解菌提供碳源，尿素为纤维素分解菌提供氮源，A正确；

B、KH2PO4和K2HPO4具有缓冲作用；在提供无机盐的同时还能维持培养基的pH，B正确；

C；从平板上纤维素分解菌的菌落分布可以看出（菌落较均匀）；接种方法为稀释涂布平板法，C正确；

D；菌落周围有透明圈不一定是细胞分解了纤维素；还有可能是分解了刚果红染料，D错误；

故选ABC。15、A:B:D【分析】【分析】

免疫PCR是一种抗原检测系统；将一段已知序列的DNA片段标记到抗体2上，通过抗原抗体的特异性识别并结合，抗体2会和固定抗体1；抗生素形成复合物“固定抗体1—抗生素—抗体2”，再用PCR方法将这段DNA进行扩增，通过检测PCR产物的量，即可推知固定抗体1上吸附的抗生素的量。

【详解】

A；免疫PCR中所用的DNA不选用受检样品（牛乳）中可能存在的DNA。待检测的牛乳中可能含有牛乳腺细胞的DNA（其上含有牛乳基因的DNA片段）；若图示中的DNA用牛乳基因中的DNA片段，经过PCR扩增后的产物中，不仅有抗体2上的DNA扩增产物，还可能有牛乳中本身含有的牛乳基因片段的扩增产物，使检测结果偏大，A正确；

B；如果第三次冲洗不充分；可能使残留的、呈游离状态的抗体2上的DNA也作为PCR的模板参与扩增，会出现假阳性现象，B正确；

CD；微量抗原抗体反应；是通过PCR技术扩增抗体2上连接的DNA，最后通过检测扩增产物—DNA的量来确定抗生素的量的方法。因此，PCR扩增产物的量与牛乳中抗生素的量呈正相关，抗原、抗体的数量可通过PCR技术间接扩增放大，C错误，D正确。

故选ABD。16、A:B:C【分析】【分析】

基因工程：目的基因的筛选与获取；构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

分泌蛋白的合成：首先；在游离的核糖体中以氨基酸为原料开始多肽链的合成。当合成了一段肽链后，这段肽链会与核糖体一起转移到粗面内质网上继续合成过程，并且边合成边转移到内质网腔内，再经过加工；折叠，形成具有一定空间结构的蛋白质。内质网膜鼓出形成囊泡，包裹着蛋白质离开内质网，到达高尔基体，与高尔基体融合，高尔基体对蛋白质做进一步的加工，然后形成包裹着蛋白质的囊泡转运到细胞膜，与细胞膜融合。

【详解】

A；科研人员根据AmyS2的氨基酸序列设计并人工合成了AmyS2基因；因此获得AmyS2基因并将其导入芽孢杆菌得到AmyS2的过程是通过蛋白质工程和基因工程实现的，A错误；

B；BamHI会破坏AmyS2基因；B错误；

C；在分泌蛋白的合成过程中；信号肽序列可帮助肽链进入内质网，在内质网被切割，因此信号肽基因表达的产物可帮助核糖体上合成的AmyS2进入内质网，但不能引导其进入高尔基体，C错误；

D；可用PCR技术检测芽孢杆菌的DNA上是否插入了AmyS2基因；如果经过PCR扩增，不出现扩增产物，说明没有插入基因，反之，则成功插入，D正确。

故选ABC。三、填空题(共9题，共18分)17、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】受体细胞18、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】是人们所需要转移或改造的基因19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】80细胞膜溶解21、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】胰蛋白酶单个细胞细胞悬液原代传代22、略

【分析】【分析】

微生物实验中常用的灭菌方法有干热灭菌；高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌；其中对于培养基一般用高压蒸汽灭菌，对于接种环一般用灼烧灭菌，对于培养皿等可以用干热灭菌。培养基放入培养箱中需要倒置培养，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，即将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养，当菌落长成后将试管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后放在-20℃的冷冻箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸馏法、压榨法和萃取法，如玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏，常采用蒸馏法提取；对于如橘皮精油，其主要储存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊问题，所以一般采用压榨法提取。

【详解】

（1）微生物培养中常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法；灼烧灭菌法、干热灭菌法等。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板倒置；可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物。

（2）从鸡粪便取样；经选择培养后，如果要将样品涂布到鉴别培养基上，需要经过一系列梯度稀释。对获得的沙门氏菌进行长期保存常采用甘油管藏法。

（3）根据题干信息；沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死，因此为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中可采取低温储存；高温加工方法进行处理。

（4）根据题意；肉桂精油不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发，故可采用水蒸气蒸馏法进行提取，提取过程中蒸馏的温度、时间都会影响精油品质。

【点睛】

本题主要考查现代生物科技的原理和运用，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力，能运用所学知识，准确判断问题的能力。【解析】灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法倒置在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征梯度稀释甘油管藏低温储存、高温加工水蒸气蒸馏蒸馏的温度、时间23、略

【分析】【详解】

在日常生活中；我们遇到过的与克隆技术有关的问题有：

①濒临灭绝动物的克隆：克隆可以拯救濒危的国家保护动物以及植物；我们可运用克隆，复制濒临灭绝的生物，让其不至于在我们的生活中消失；

②农业克隆：应用于农业等领域；通过转基因的方式，增加粮食的亩产量，提高土地的单位出产量；

③细胞克隆替代或者修复人体细胞问题；比如胚胎干细胞；

④畜牧业克隆：应用于畜牧业，提升优良品种群体基数，缩短畜牧育种年限。【解析】有，比如：①濒临灭绝动物的克隆；②农业克隆：应用于农业等领域，通过转基因的方式，增加粮食的亩产量，提高土地的单位出产量；③细胞克隆替代或者修复人体细胞问题，比如胚胎干细胞；④畜牧业克隆：应用于畜牧业，提升优良品种群体基数，缩短畜牧育种年限。24、略

【分析】略【解析】目的基因标记基因启动子终止子启动子上游RNA聚合酶终止子下游转录标记25、略

【分析】【详解】

生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎；并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术，其目的是用于生育，获得人的复制品；治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术，其目的是用于医学研究和疾病的治疗。

据概念可知，实现生殖性克隆和治疗性克隆都会用到的技术有体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等；治疗性克隆在获取胚胎干细胞后，根据治疗目的诱导干细胞分化形成各种组织和器官，供患者移植用，故治疗性克隆还会应用到的技术为干细胞培养技术。【解析】生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等体细胞核移植技术，早期胚胎培养技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术、干细胞培养技术等用于生育，获得人的复制品用于医学研究和疾病的治疗四、判断题(共1题，共3分)26、A【分析】【详解】

胚胎发育至囊胚期时，细胞逐渐分化。聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胚胎的各种组织，即发育成完整的胚胎，而沿透明带内壁拓展和排列的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘，为胚胎的发育提供营养，故该表述正确。五、实验题(共4题，共8分)27、略

【分析】【分析】

1；泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌；代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸。

2；泡菜的制作过程：按照清水与盐的质量比为4：1的比例配制盐水；将盐、水煮沸冷却。将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡莱坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，再徐徐注入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料，盖好坛盖。向坛盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。在发酵过程中要注意经常向水槽中补充水。发酵时间长短受室内温度的影响。

3；泡菜中的亚硝酸盐含量可以用比色法测定；即在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，重氮盐与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。

（1）

乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型；制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料；这是因为新鲜的蔬菜亚硝酸盐的含量低。

（2）

将盐水煮沸冷却的目的是煮沸的目的是除去盐水中的空气和杀菌；冷却的目的是防止高温杀死原料中的乳酸菌（乳酸菌的生命活动不受影响）；加入“老汁”的作用是“老汁”中含有大量的乳酸菌；可使其在短时间内成为优势菌。

（3）

测定亚硝酸盐含量的方法是比色法。即在盐酸酸化条件下；亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合后形成玫瑰红色的染料，然后将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行目测比较，大致估算出亚硝酸盐的含量。

【点睛】

本题考查制作泡菜，要求考生识记制作泡菜的原理和过程，理解用比色法测定亚硝酸盐的含量，意在考查考生的识记能力和分析能力。【解析】（1）异养厌氧型亚硝酸盐的含量低。

（2）煮沸的目的是除去盐水中的空气和杀菌；冷却的目的是防止高温杀死原料中的乳酸菌（乳酸菌的生命活动不受影响）“老汁”中含有大量的乳酸菌；可使其在短时间内成为优势菌。

（3）比色法对氨基苯磺酸玫瑰红标准显色液28、略

【分析】【分析】

微生物的接种方法包括稀释涂布平板法和平板划线法，二者都可以用于筛选单菌落，但是前者可以用于计数，后者不行。培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。微生物培养基需要为微生物繁殖提供碳源、氮源、水、无机盐等营养物质，此外还要满足微生物对特殊营养物质，pH和O2的需求。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释；然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。利用稀释涂布平板法得到数值往往偏小，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

【详解】

（1）在实验室分离纯化培养微生物时；常见的对照实验有两种，当用不同的培养基作为自变量进行对照实验时，常用来检测所配制的培养基是否具有选择作用，例如以牛肉膏蛋白胨培养基和以尿素为唯一氮源的培养基进行对照实验，可以后者筛选分解尿素的微生物，验证其起到选择培养基的作用；当用同一种培养基进行接种和不接种微生物的对照实验时，则可检验培养基灭菌是否合格，若未接种的空白培养基上生长出部分菌落，说明该培养基灭菌不合格。

（2）由实验结果可知；当碳源为葡萄糖时，菌株C的细胞干重最大，为3.12g/L，因此，菌株C生长的最适碳源是葡萄糖。当碳源为制糖废液时，S产量最大，为0.18g/L，因此菌株C生产S的最适碳源是制糖废液。

微生物生长所需的营养物质包括碳源；氮源、无机盐、水等。

（3）碳源为淀粉时菌株C细胞干重为0.01g/L；几乎不能生长，其直接原因是该菌细胞内不含有分解淀粉的酶，因此无法分解淀粉作为碳源，根本原因是菌株C缺少合成淀粉酶的基因。

（4）若要探究生产S的最适制糖废液的浓度；则实验自变量为不同浓度的制糖废液，因变量为S产量，因此需要配制一系列不同浓度梯度的制糖废液为唯一碳源的培养基，接种菌株C，然后将其置于相同且适宜的环境中进行培养，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度即为生产S的最适碳源浓度。

（5）微生物接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，后者可以用于计数，前者不行，在进行稀释涂布平板法计数微生物时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该计数方法得到的菌落数往往比活菌的实际数目少。【解析】(1)选择培养基是否具有选择性接种与不接种。

(2)葡萄糖制糖废液氮源；无机盐、水。

(3)菌株C缺少合成淀粉酶的基因。

(4)分别配制一系列不同浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基；培养菌株C，其他条件相同且适宜，一段时间后，测定并比较不同浓度制糖废液中的S的产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度即为生产S的最适碳源浓度。

(5)稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落29、略

【分析】【分析】

题中用瓶装变质老陈醋（胀瓶）；未变质老陈醋为实验材料；经过分离、纯化、并初步筛选出A1、A2和A3三株疑似的产气细菌，进一步探究了不同浓度青霉素对A1、A2、A3菌株的抑制作用，表中数据所示的清晰区直径（抑菌圈）越大，代表该菌种生长受到的抑制作用越强。

【详解】

（1）为了筛选产气细菌；实验人员设置了甲；乙、丙三组培养基，甲作为空白对照组，乙接种未变质的老陈醋，丙接种等量的变质老陈醋，对比乙和丙培养基上的菌落形态，从丙培养基上分离出和乙培养基形态不同的菌落，可以从上述培养基中初步筛选疑似产气细菌的菌株。

（2）①过程a所得待测培养基中菌落的分布较为均匀；据此判断，该过程所采用的接种方法为稀释涂布平板法。

②区分菌落种类的依据是菌落的形态；大小、隆起程度和颜色等特征；统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，能有效防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目；或培养时间太长导致菌落粘连影响计数、培养基表面干燥脱水影响菌落数目的统计。

③因为老陈醋中的产气细菌是一类能产生过氧化氢酶的细菌；若有5%的过氧化氢溶液，A1；A2和A3菌株，必要的培养基等实验器材，可以将A1、A2和A3菌株分别接种到滴有5%的过氧化氢溶液的培养基上，观察是否产生气泡，若产生气泡则为产气细菌。

（3）根据题意和表格信息分析可知，该实验的目的是探究不同浓度青霉素对A1、A2、A3菌株的抑制作用。在抑制A1方面，5μg·mL-1的青霉素抑菌效果较差，20μg·mL-1的青霉素抑菌效果好；在抑制A3方面，5μg·mL-1和20μg·mL-1青霉素的抑菌效果相差不大。【解析】(1)等量的变质老陈醋对比乙和丙培养基上的菌落形态；从丙培养基上分离出和乙培养基形态不同的菌落。

(2)稀释涂布平板法培养基中长出的菌落是均匀分布的遗漏菌落的种类和数目菌落粘连影响计数（或培养基表面干燥脱水）将A1；A2和A3菌株分别接种到滴有5%的过氧化氢溶液的培养基上；若产生气泡则为产气细菌。

(3)探究不同浓度青霉素对A1、A2、A3菌株的抑制作用在抑制A1方面，5μg·mL-1的青霉素抑菌效果较差，20μg·mL-1的青霉素抑菌效果好在抑制A3方面，5μg·mL-1和20μg·mL-1青霉素的抑菌效果相差不大30、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

【详解】

（1）分析题意可知；研究人员取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后可通过稀释涂布平板法接种到培养基表面以获得单菌落。

（2）PCR技术是一项通过体外控制温度扩增DNA的技术，该技术中由于温度较高，起关键作用的酶是耐高温DNA聚合酶；PCR扩增的前提是要有一段目的基因的核苷酸片段，分析题意，该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是：引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的；PCR产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定：凝胶中的DNA分子通过染色；可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

（3）分析题意，科学家将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，该过程中逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞；分析题意，实验目的是iPS细胞的产生不是由于培养基的作用，故实验的自变量是外源基因的有无，因变量是IPS细胞的产生情况，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故可设计实验如下：将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用。【解析】(1)稀释涂布平板法##涂布平板法

(2)耐高温DNA聚合酶引物能与16SrRNA基因特异性结合（引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的）琼脂糖凝胶电泳。

(3)逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞。将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用六、综合题(共4题，共36分)31、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）

PCR技术利用的是DNA双链复制的原理。将PCR所需的物质准备完毕后；在PCR仪上用94～96℃的温度预热5min，其目的是利用高温使DNA变性形成单链片段，故需要加入Taq（热稳定DNA聚合）酶，该酶在高温下仍能保持活性。

（2）

该基因库是由青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段组成；因此只包含某种生物的部分基因，因此该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做黄花蒿的cDNA文库（或部分基因文库）。通过逆转录得到的目的基因中缺少基因结构中的非编码区以及编码区的内含子，因此获得的cDNA与黄花蒿细胞中该基因碱基序列不同。

（3）

分析图2可知；目的基因和抗生素抗性基因中含有SmaⅠ限制酶的切割位点，因此用SmaⅠ切割图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因，所以不能使用SmaⅠ切割。构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是RNA聚合酶识别结合位点，用于驱动基因的转录。

（4）

检测目的基因是否表达出相应蛋白质；应采取抗原—抗体杂交技术。

【点睛】

本题考查PCR技术及基因工程的相关知识，学生要熟悉基因工程的过程，同时要理解好限制酶的使用要求和完整载体所需的条件。【解析】（1）DNA双链复制Taq(热稳定DNA聚合)

（2）cDNA文库不同。

（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因RNA聚合酶。

（4）抗原—抗体杂交32、略

【分析】1、动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。

2；单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应；之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

【详解】

（1）结合分析可知，为获得抗DON的单克隆抗体，制备单克隆抗体时，需要先给小鼠注射DON，以刺激机体产生的抗体；动物细胞培养时所需的气体是95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。

（2）为制备杂交细胞；需要通过动物细胞融合技术获得杂交细