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文档简介

DB5117TechnicalRegulationOfTissueCultureAndPropagati达州市市场监督管理局发布本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的本文件第4.2.2章节—MS培养基配制，由于日常购买的白砂糖和琼脂质量存在差异，在规定浓度范本文件第4.3章节—不同培养阶段培养基配制，在愈伤诱导培养基、继代培养基、分化培养基和生本文件第4.10.2章节—继代培养，需控制愈伤组织大小，将直径大于2cm的愈伤组织切成直径2cm本文件第5章节—炼苗，营养钵中基质成分及比例为泥炭土：珍珠岩：蛭达州黄花组织培养繁育技术规程GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的GB/T6682分析实验室用水规格和LY/T1882界定的以及下列术语和定义适用在无菌培养基上，对植物离体器官、组织或细胞进行培养，以形成再生植株，或培养新的育种材组培苗tissueculturese利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下，采用植物组织培养技术，培育出的完整植在植物组织培养中，外植体由于自身分泌的酚类化合物被氧化产生褐色醌类物质，导致外植体褐4黄花组织培养繁育技术流程4.2培养基配制4.2.1母液配制按GB/T603、GB/T6682的规定执行。将培养基所需的大量元素、铁盐、有机成分配制成比使用浓度高100倍的母液，微量元素配制成比使用浓度高1000倍的母液，均用棕色玻璃瓶保明母液号、配制倍数、日期，保存在冰箱冷藏按GB/T603、GB/T6682的规定执行。配制MS培养基时将四种母液按比例混合后，加入白砂糖、琼脂和水。所需白砂糖浓度为20g/L～30g/L，琼脂粉浓度为4g/L4.3不同培养阶段培养基配制4.3.1愈伤诱导培养基4.3.2继代培养基4.3.3分化培养基4.3.4生根培养基4.5培养基分装和灭菌4.5.1培养基分装4.5.2培养基灭菌4.6培养室消毒将培养室清扫干净，关闭门窗，按每立方米空间用高锰酸钾16g，福尔马林32ml，水16ml瓦器皿中混合产生蒸气进行消毒，消毒时间10～12h。4.7材料选取选择春苗生长期健壮无病斑的黄花幼苗整株，切除根、叶部分，保留约8cm～10cm茎基段，用软毛4.8材料消毒4.9剥离外植体和接种在超净工作台上铺上无菌滤纸，用无菌镊子将茎基段剥开直至露出茎尖生长点，在20X的显微镜下用无菌解剖针切取0.5mm茎尖1～2个，随即接种于黄花愈伤诱导培养基上，切口与培养基表面接触。每4.10组培苗培养4.10.1愈伤诱导培养将接种外植体的愈伤诱导培养基放置在培养架上进行愈伤诱导培养。温度22℃~25℃,光照强度4.10.2继代培养长出愈伤组织后，转接于继代培养基上进行增殖培养，每2-3周继代一次。温度22℃~25℃,光照4.10.3分化培养选择致密型愈伤组织转接于分化培养基上进行不定芽的分化培养。温度22℃~25℃,光照强度4.10.4生根培养光照强度2000lx～

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