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文档简介
第3章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具基础巩固1.下列关于基因工程的叙述,错误的是()A.一种限制酶一般只能识别特定的核苷酸序列B.基因工程所依据的原理是基因突变C.基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的D.基因工程能够定向地改变生物的性状,培育出新品种答案:B解析:基因工程是将目的基因移植入受体细胞,依据的原理是基因重组。2.20世纪90年代开始兴起的DNA疫苗被称为第三代疫苗。医学专家将病毒抗原基因中的一段编码序列(通常是裸露的DNA)与质粒重组后注入人体的肌细胞内,通过表达使人获得免疫能力。下列叙述错误的是()A.病毒抗原基因与质粒重组时需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶B.病毒抗原基因在体内表达时会发生碱基互补配对C.重组质粒在机体细胞内表达后,能引起机体免疫反应D.重组质粒在机体细胞内的表达产物具有与原病毒一样的致病性答案:D解析:重组质粒在机体细胞内的表达产物为病毒抗原,能引起机体发生免疫反应,但不具有与原病毒一样的致病性。3.限制酶可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ及BglⅡ的识别序列及每一种限制酶的特定切割部位。其中切割出来的DNA片段末端可以互补结合的两种限制酶是()A.BamHⅠ和EcoRⅠB.BamHⅠ和HindⅢC.BamHⅠ和BglⅡD.EcoRⅠ和HindⅢ答案:C解析:BamHⅠ和BglⅡ切出的黏性末端的碱基能互补配对。4.下列关于质粒的说法,错误的是()A.质粒存在于细菌和酵母菌等生物的细胞中B.质粒DNA分子中每个磷酸基团都连两个脱氧核糖C.不同的质粒DNA,(A+G)/(T+C)的比值一定相同D.质粒是基因工程中常用的工具酶答案:D5.下列关于基因工程各种工具的叙述,错误的是()A.E.coliDNA连接酶只能“缝合”黏性末端B.限制酶主要来自原核生物,限制酶一般不切割自身DNAC.载体上必须有2个以上限制性内切核酸酶的切割位点D.限制酶断开磷酸二酯键,T4DNA连接酶能恢复磷酸二酯键答案:C6.已知在一线性DNA分子上有3个某种限制性内切核酸酶的切割位点,如下图中箭头所指。如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该限制酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该限制酶切开后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是()线性DNA分子的酶切示意图A.3种 B.4种C.9种 D.12种答案:C解析:有以下3种切割情况。(1)只切开1个位点,则有3种情况:切点在a、bcd之间,则片段为a、bcd2种;切点在ab、cd之间,则片段为ab、cd2种;切点在abc、d之间,则片段为abc、d2种。(2)切开2个位点,则有3种情况:切在a、b、cd之间,则片段为a、b、cd3种;切点在a、bc、d之间,则片段为a、bc、d3种;切点在ab、c、d之间,则片段为ab、c、d3种。(3)切开3个位点,即切点在a、b、c、d之间,则片段为a、b、c、d4种。所以不重复的片段共有9种。7.EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶识别的序列均由6个核苷酸组成,但切割后产生的结果不同,其识别序列和切割位点(图中箭头处)如下图所示。据图分析,下列说法正确的是()A.所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成B.SmaⅠ切割后产生的是黏性末端C.用DNA连接酶连接平末端和黏性末端的效率一样D.细菌细胞内的限制酶可以切割外源DNA,防止外源DNA入侵答案:D解析:不是所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成,也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。据图可知,SmaⅠ在它识别序列的中心轴线处将DNA片段切开,产生的是平末端。用DNA连接酶连接平末端的效率比较低。细菌细胞内的限制酶可以切割外源DNA,防止外源DNA入侵,是一套完善的防御体系。8.下列关于生物学中常见的几种酶的叙述,正确的是()A.DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合B.用限制性内切核酸酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4分子水C.限制酶能通过专一性破坏双链DNA分子中碱基之间的氢键来切割DNA分子D.T4DNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端答案:B解析:DNA连接酶能够恢复被限制酶切开的磷酸二酯键,A项错误。用限制性内切核酸酶从质粒上切下一个目的基因,要断裂4个磷酸二酯键,故需消耗4分子水,B项正确。限制酶切割DNA分子时,是破坏了同一条链上相邻脱氧核苷酸之间的化学键即磷酸二酯键,而不是两条链上互补配对的碱基之间的氢键,C项错误。T4DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端,也可以连接平末端,但连接平末端时的效率比较低,D项错误。9.某线性DNA分子含有3000个碱基对(bp),先用限制酶a切割,再把得到的产物用限制酶b切割,得到的DNA片段大小如下表所示。限制酶a和限制酶b的识别序列和切割位点如下图所示。下列有关说法正确的是()酶a切割产物(bp)酶b再次切割产物(bp)1600,1100,300800,300A.在该DNA分子中,限制酶a与限制酶b的识别序列分别有3个和2个B.限制酶a与限制酶b切出的黏性末端不能相互连接C.限制酶a与限制酶b切断的部位分别为磷酸二酯键和氢键D.用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作,若干循环后,—AGATCC——TCTAGG—序列会明显增多答案:D解析:由限制酶a、限制酶b切割后产生的DNA片段可知,限制酶a识别序列有2个,限制酶b识别序列也有2个,限制酶a和限制酶b切出的黏性末端可进行互补配对,故可连接;限制酶a、限制酶b均切割磷酸二酯键。10.下列与“DNA的粗提取与鉴定”的原理无关的是()A.DNA分子在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同B.DNA分子在温度超过90℃时双螺旋解聚为两条单链C.DNA不溶于酒精溶液,但某些蛋白质溶于酒精D.在沸水浴的条件下,DNA与二苯胺反应呈蓝色答案:B解析:DNA分子在温度超过90℃时,双螺旋解聚为两条单链与DNA的粗提取与鉴定无关。11.下图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图,据图回答下列问题。(1)a代表的物质和质粒的化学本质相同,都是,二者还具有其他共同点,如①,②(答出两点即可)。
(2)若质粒DNA分子的切割末端为—A
—TGCGC,则与之连接的目的基因切割末端应为;可使用把质粒和目的基因连接在一起。
(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为,其作用是。(4)下列常在基因工程中用作载体的是。
A.苏云金杆菌的抗虫基因B.土壤农杆菌的环状RNA分子C.大肠杆菌的质粒D.动物细胞的染色体答案:(1)DNA能够自我复制具有遗传效应(2)CGCGT—A—DNA连接酶(3)标记基因便于重组DNA分子的筛选(4)C能力提升1.(不定项选择题)某种着色性干皮病的致病原因是相关染色体DNA发生损伤后,未能完成下图所示的修复过程。下列相关说法错误的是()A.完成过程③至少需要2种酶B.酶Ⅰ或酶Ⅱ功能异常或缺失都可导致患该病C.该病是染色体结构变异所致D.该修复过程的场所是细胞质答案:CD解析:完成过程③需要DNA聚合酶将脱氧核苷酸连接到DNA片段上,之后还需要DNA连接酶将DNA片段连接起来。由题图可知,该DNA的修复需要酶Ⅰ和酶Ⅱ,因此酶Ⅰ或酶Ⅱ功能异常或缺失都可导致患病。该病是由于基因结构改变引起的,属于基因突变。染色体位于细胞核中,因此修复染色体DNA损伤的过程发生在细胞核中。2.现有一长度为1000个碱基对(bp)的DNA分子,用限制性内切核酸酶(EcoRⅠ)酶切后得到的DNA分子仍是1000bp,用KpnⅠ单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子,用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子。下列能正确表示该DNA分子的酶切图谱的是()答案:D解析:A项所示的DNA用KpnⅠ单独酶切会得到600bp和200bp两种长度的DNA分子,不符合题意。B项所示的DNA用EcoRⅠ单独酶切会得到800bp和200bp两种长度的DNA分子,不符合题意。C项所示的DNA用EcoRⅠ酶切后得到200bp和800bp两种长度的DNA分子,不符合题意。D项所示的DNA用EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子的长度是1000bp,用KpnⅠ单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子,用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子,符合题意。3.下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。用下图所示质粒和目的基因构建重组质粒,最宜选用哪两种限制酶切割?()限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点图1图2A.BamHⅠ和HindⅢ B.BclⅠ和HindⅢC.BamHⅠ和Sau3AⅠ D.BclⅠ和Sau3AⅠ答案:B解析:由题意可知,选择的限制酶应在目的基因两端和质粒上均有识别位点,故排除Sau3AⅠ;BamHⅠ的切割位点位于质粒的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因中间,若选用此酶切割会破坏这两种抗性基因,影响后续重组质粒的筛选,故排除BamHⅠ酶,因此应选用BclⅠ和HindⅢ进行切割。4.有关下图所示黏性末端的说法,错误的是()A.甲、乙、丙黏性末端是由各自不同的限制性内切核酸酶酶切产生的B.甲、乙具有相同的黏性末端,可相互连接,甲、丙之间不能C.DNA连接酶的作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键D.切割甲的限制性内切核酸酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子答案:C解析:甲、乙黏性末端可相互连接,但甲、丙之间不能相互连接。DNA连接酶作用位点在a处,催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键。切割甲的限制性内切核酸酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子。5.回答下列有关基因工程的问题。(1)基因工程中使用的限制酶,其特点是。下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别序列,Apr表示青霉素抗性基因,Tcr表示四环素抗性基因。
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X1混合连接,连接后获得的质粒类型有。(可多选)
A.X1 B.X2C.X3 D.X4(3)若将上图所示X1、X2、X3、X4四种质粒分别导入大肠杆菌,并分别涂布在含有青霉素的培养基上和含有四环素的培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌类型有、。
(4)如果X1用E1酶切,产生含850个碱基对和3550个碱基对的两种片段,那么质粒X2(Tcr基因的长度为1200个碱基对)用E2切后的片段长度为个碱基对。
答案:(1)特异性地识别和切割DNA(2)ABC(3)无质粒的大肠杆菌含X3的大肠杆菌(4)4750解析:(1)限制酶能特异性地识别和切割DNA。(2)用E1切开质粒X1后,质粒X1暴露出1
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