T-GDSF 0003-2024 花鲈苗种质量检验技术规范

GDSFSpecificationforexaminationofqualityinspectionforseedingsofspotted本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件主要起草人：王鹏飞、邱丽华、赵超，1花鲈苗种质量检验技术规范GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定4.3可数指标4,4疫病按照GB/T18654.3规定的方法5.3.1全长、体重合格率检验25.3.2畸形、伤残率检验5.4疫病检验录A和附录B。采用PCR方法检测花鲈苗种是否携带真鲷虹彩病毒，详见附录6.2抽样方法3行脑组织RNA提取。采用商品化cDNA合成试剂盒将提取的脑组织RNA逆转录为cDNA，用于PCR扩增。无症状的鱼最多15尾为1个样品，有症状的鱼每1尾A.3.1设置对照中提取的RNA所逆转录的cDNA、或纯化的NNVRNA所逆转录的cDNA；阴性对照为从未感染NNV的健康鱼组）；）；），将转录好的NNVcDNA进行第一轮PCR扩A.4结果判定阳性对照满足第一轮PCR扩增在1017bp附近有特异性目的条带或第二轮PC样品的第一轮PCR扩增在1017bp附近有特异性目的条带，或第二轮PCR扩增在777bp附近有特异性），样品的第一轮PCR扩增在1017bp附近无特异性目的条带，且第二轮PCR扩增在777bp附近无特异性41ATGGTACGCAAAGGTGAGAAGAAATTGGCAAAACCCGCG61CAACCCCGCCGACGTGCTAACAATCGTCGGCGTAGTAACCGCACTGACGCA121AAGGCCTCGACTGTGACCGGATTTGGACGTGGGACCAAT181TCGAGAATCTCCCAGGCCGTCCTCCCAGCCGGGACAGGA241GACGCAACCATCGTCCCCGACCTCCTGCCACGACTGGGACACGCTGCTAG301CGATACGCTGTTGAAACACTGGAGTTTGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGC361GGTGGTTACGTTGCTGGCTTCCTGCCTGATCCAACTGACAACGACCACAC421CTTCAAGCAACTCGTGGTGCAGTCGTTGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTC481CAGTACACCCGCACGCTCCTCTGGACCTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATG541GGTCGGCTGATACTCCTGTGTGTCGGCAACAACACTGATGTGGTCAACGT601TGTCGCTGGAGTGTTCGACTGAGCGTTCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAG661CCCATCATGACACAAGGTTCCCTGTACAACGATTCCCTTTCCACAAATGAC721ATCCTCCTAGGATCCACACCACTGGACATTGCCCCTGATGGAGCAGTCT781CGTCCGCTGTCCATTGACTACAGCCTTGGAACTGGAGATGTTGATCGAG841CACCTCAAGAAGTTTGCTGGAAATGCTGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCT901TGGGACAACTTCAACAAGACGTTCACAGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATG961CGTCAAATCCTGCTGCCTGTTGGCACTGTCTGCACCAGGGTTGACTCG1AGCCGGGACAGGAACAGACGGATACGTTGTTGTTGACGC61GCCACGACTGGGACACGCTGCTAGAATCTTCCAGCGATACGCTGTTGAAAC121TGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGCAAACACGGGCGGTGG181TGATCCAACTGACAACGACCACACCTTCGACGCGCTTCA241TGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTCCGACCCCAGTACACCCGCACGC301CTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATGTCACCTGGTCGGCTGATACTC361CAACAACACTGATGTGGTCAACGTGTCAGTACTGTGTCGCTGGAGTGTTC421TCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAGACAACCGCTCCCATCATGACACAAGGTTC481CAACGATTCCCTTTCCACAAATGACTTCAAGTCCATCCTCCTAGGATCCACACC541CATTGCCCCTGATGGAGCAGTCTTCCAGCTGGACCGTCCGCTGTCCATTG601TGGAACTGGAGATGTTGATCGAGCTGTCTATTGGCACCTCAAGAAGTTTGC661TGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCTGGGGCATCTGGGACAACTTCAACAA721AGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATGAGCAGCCCCGTCAAATCCT5引物IV-F1和IV-R1是第一轮PCR引物，目的产物大小为570bp；引物IV-F2在PCR扩增过程中，应设立阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照为从确定感染RSIV的病鱼组）；），将提取好的组织DNA同时用引物对IV-F1/R1和IV-F2/R2进行PCR扩增，程序为：95℃阳性对照PCR扩增在570bp附近有特异性目的条带，同时阴性对照和空白扩增在567bp附近有特异性目的条带，判定检测结果为样品携带R扩增在567bp附近无特异性目的条带，判定检测结果样品携带传染性脾肾坏死病毒（ISKNV），而带RSIV。IV-F1/R1及IV-F2/R2扩增的序列61CTCAAACACTCTGGCTCATCTATGTCATCGTAGTCGTCC61AGCAGTGTAGGCGGTGGAGTAACATTATCGGLGTCTGTTGGCAGCTCACAT121ACACAAGGCTGACTGTCAGATGAGATGCGGCLGGCGTGG181TGAGGTTTCAGCTTGATGACAGACAAGATGGTACCGTCA241AGGACTTCACTGCTGTTGCGGCCTACATGGACCACCTCGCCATGTACAAC301AAGAGGCTGTTGCTGTCGCTTGACCAAACAATCTTCACATCCGTCTCTCG361CAGCTGAGGGTGGTCGTCTGGTTGTCGATTTCCAGGTTATAGAAGGTGGT421CACGCCACAGTCAGCAACAGAAGAAGTAGCAGGGTCGCCATTGCTCATGTAGCT481CACAGTAGTCACCTATGACATGAGGATATTCAAAATTTTTATACAAGTAAAAGA541CTGTGCTTGAGATAGGAGAT1CGGGGGCAATGACGACTACATACTGCGGCCGCAAGCTGA61TCAAGACGGTGGTGGGCGCTACCATTGTGTACGGCGACACCGACTCATGCT121TGGGCCACGACCGCGCATCACTCGATGAACTGTGGCAGA181CTGTGTCGGCCTTCTTTGAGCGCCCGGTGCGCCTCGAGT241AGTTCATCATCTTCACCAAGAAACGTTATGTGTACAGGGCATTCACACGC301AGCGAACAGGCAGCAAGGGTGTCATGTTGTCCAGACGTGACAGCGCCATG361ACACGTATGCAGC