紫外可见分光光度法

常用的含量测定的方法——

紫外—可见分光光度法什么是紫外—可见分光光度法？

紫外-可见分光光度法是根据物质分子对200～760nm波长范围的电磁波的吸收特征建立起来的光谱分析方法。其定量依据是Lambert-Beer.A=ELC紫外—可见分光光度法紫外分光光度计的构造：紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、显示系统和数据处理系统等部分组成。紫外—可见分光光度法

适用对象：

被测成分本身或其显色产物对可见-紫外光具有选择性吸收。如：总生物碱、总黄酮、总蒽醌、多糖等紫外—可见分光光度法

定量方法（单组分的定量方法）：吸收系数法选用溶剂应不干扰被测组分的测定根据Beer定律A=εcl，若L和吸光系数ε或即可根据测得的A求出被测物的浓度

例如：维生素B12的水溶液在361nm处的值为207,盛于1cm吸收池中,测得溶液浓度为

c=0.414/(207×1)=0.00200(g/100ml)紫外—可见分光光度法2.标准曲线法(工作曲线法)在单色光不纯的情况下,测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定,若用吸光系数换算成浓度,则产生较大的误差.但若是认定一台仪器,固定其工作状态和测定条件,则浓度与吸光度之间的关系在很多情况下仍然可以是线性关系或近于线性的关系.即A=Kc紫外—可见分光光度法

2.标准曲线法(工作曲线法)但是此时K已不再是物质的常数，不能用于定性依据。K值只是个别具体条件下的比例常数，不能互相通用。紫外—可见分光光度法3.对照法在同等条件下配制标准溶液，在选定波长处，分别测量吸光度，根据Beer定律：As=EcslAx=Ecxl因是同种物质、同台仪器及同一波长测定，故l和E相等，所以紫外—可见分光光度法紫外—分光光度法不仅可以测定试样中组分的含量，而且还可用于弱酸（碱）的离解常数和配合平衡常数及配合物的组成：配制分析浓度为c的弱酸溶液，分别调节溶液pH，在测定波长处测定吸光度，若在此波长处HA与A－均有吸收，则在高酸（碱）度，该酸几乎以HA（或A－）形式存在，此时溶液吸光度分别为：AHA=εHAc或AA-=εA-c当溶液酸度在两者之间时，根据吸光度的加和性，则紫外—可见分光光度法

特点：相对其他光谱分析方法来说，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快灵敏度高。如在紫外区直接检测VC时，其最低检出浓度可达到10-6g/ml.有较好的选择性。通过适当的选择测量条件，一般可在多种组分共存的体系中，对某一物质进行测定。精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，其相对误差可减少到1%～2%。可用于对微量组分的测定用途广泛紫外—可见分光光度法实例：分光光度法测定总姜黄素的含量材料：姜黄素对照品、姜黄醇提物（姜黄经乙醇提取，脱脂、干燥处理而得）、姜黄素胶囊测定条件的选择将姜黄素对照品及姜黄醇提物用乙醇溶解后，在λ200～500nm处扫描，结果可见从300nm的峰谷到500nm的峰谷止，说明姜黄醇提物在λ426nm处测定，很少或不受其他物质干扰。见下图1、2紫外—可见分光光度法

紫外—可见分光光度法标准曲线的制备精取姜黄素对照品5、10、15、20、25μl于试管中，乙醇稀释到4.00ml摇匀，用1ml比色皿，754分光光度计λ426nm处测定吸收度，制定标准曲线，并考察线性关系、线性范围等。经5次重复测定，得回归方程：Y=0.03493X+0.0055.r=0.9998.总姜黄素浓度在1.25～6.25μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。紫外—可见分光光度法样品的重复性考察取同一批样品，经5次称量，重复测定，结果无论是姜黄醇提物或者制剂，重复性均很好，RSD<1.50%,见下表紫外—可见分光光度法精密度考察

取同一批试液，制备5复管平行测定，结果表明，精密度良好，RSD=0.84%紫外—可见分光光度法

注意事项1.试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。2.使用的