输血相容性检测操作规程

输血相容性检测操作规程1目的规范输血相容性检测，保证输血相容性检测质量，保障临床输血安全。2职责输血科岗位人员负责输血相容性检测全过程。3适用范围适用于输血科血相容性检测。4生物安全要求输血相容性检测，存在潜在的生物传染性物质为人体血液污染物和损伤性废弃物。所有上述生物传染性物质的操作过程必须遵守如下规定：被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。5设备和材料5.1标本5.2试剂：抗-A、抗-B血型定型试剂、RhD血型定型试剂、2-5%A、B、O标准试剂红细胞、标准I、Ⅱ、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、凝聚胺(低离子强度溶液(LIM)、凝聚胺溶液、悬浮液)、生理盐水等。5.3设备：输血科(血库)血型血清学专用离心机、标本离心机、显微镜、试管架等。5.4耗材：清洁干燥一次性塑料试管(5ml)、清洁干燥一次性塑料吸管(1ml)、清洁干燥载玻片、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、利器盒、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套、干净工作服、口罩等。6环境输血相容性检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。7操作步骤7.1ABO血型鉴定操作规程7.1.1方法：试管法。7.1.2原理：根据红细胞上有或无A抗原和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及○型4种。利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型就是用已知抗-A和抗-B血型抗体来测定红细胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A红细胞和B红细胞来测定血清/血浆中有无相应的抗-A或/和抗-B。7.1.3标本种类：受检者血清/血浆、2-5%受检者红细胞盐水悬液。7.1.4试剂及器材：抗-A、抗-B血型抗体；2-5%A、B、0标准试剂红细胞；生理盐水；试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。7.1.5操作步骤7.1.5.1检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。7.1.5.2检查标本的状态和类型。7.1.5.3加样：1）正定型：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B。血型抗体各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者2-5%红细胞悬液1滴，混匀。2）反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A、B、O细胞。用滴管分别加入受检者血清/血浆2滴于试管底部，再分别加入2-5%A、B、O试剂红细胞1滴。7.1.5.4离心：立即以1000×g离心15秒。7.1.5.5观察结果：检查是否有溶血，再将试管轻轻摇动，使沉于试管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集。如肉眼未见凝集或溶血，应再以低倍镜观察有无凝集。7.1.5.6ABO血型结果判读。ABO血型正反定型结果正定型反定型血型抗体+受检者红细胞受检者血清/血浆+试剂红细胞受检者血型抗-A抗-BA细胞]B细胞0细胞+一—+—A++—B —++ O++— —AB注：“+”=凝集；“-”=不凝集7.1.6注意事项：7.1.6.1试管、滴管保持干燥，以免溶血。7.1.6.2离心时间不宜过长或过短、速度不宜过快过慢，以防假阳性和假阴性。7.1.7备注：凝集强度判断标准1）4+:红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。2）3+:红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。3）2+:红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。4）1+:肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±:镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。6）-:镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。7）MF:即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。7.2Rh(D)血型鉴定操作规程7.2.1方法：试管法。7.2.2原理：根据Rh(D)血型定型试剂与对应红细胞上的抗原凝集反应，区分Rh(D)阳性、阴性。7.2.3标本种类：2-5%红细胞悬液。7.2.4试剂及器材：IgM单克隆抗D试剂，效价≥64(ccDee);生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。7.2.5操作步骤：7.2.5.1检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。7.2.5.2检查标本的状态和类型。7.2.5.3加样：标记试管1支，加抗D试剂1滴，再加受检者2-5%红细胞悬液1滴，混匀。7.2.5.41000×g离心15秒，轻轻摇动试管，观察结果。7.2.5.5检查是否有溶血(溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染),然后轻轻摇晃使红细胞再悬浮起来，观察凝集的状况，并立即记录结果，必要时可借助显微镜。7.2.5.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟左右，然后再离心观察结果。7.2.6结果判读：7.2.6.1阳性反应：出现红细胞凝集，为Rh(D)阳性。7.2.6.2阴性反应：红细胞不出现凝集，为Rh(D)阴性。7.2.7备注：凝集强度判断标准1）4+:红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。2）3+:红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。3）2+:红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。4）1+:肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。5）±:镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。-:镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。6）MF:即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。7.3盐水+凝聚胺介质法筛选不规则抗体操作规程7.3.1方法：试管法。7.3.2原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。应用特定的抗体筛选红细胞(I、Ⅱ、Ⅲ号),与受检者血清/血浆在二种介质(盐水、凝聚胺)中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。7.3.3标本种类：血清或血浆。7.3.4试剂及器材：特定的I、Ⅱ、Ⅲ号2-5%筛选红细胞；低离子强度溶液(LIM)、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。7.3.5操作步骤：7.3.5.1检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。7.3.5.2检查标本的状态。盐水法：7.3.5.3取洁净试管3支，分别标明I、Ⅱ、Ⅲ,用滴管分别加入受检者血清/血浆2滴。7.3.5.4再对应加入2-5%I、Ⅱ、Ⅲ号抗体筛选细胞1滴，混匀。7.3.5.51000×g离心15秒或按试剂说明书操作，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液少许于玻片上，在显微镜下察看有无凝集现象。凝聚胺法：7.3.5.6取洁净试管3支，按照盐水法的操作滴加受检者血清/血浆、抗体筛选细胞，各管加低离子溶液(LIM)0.65ml,混匀，再各加凝聚胺溶液2滴，混匀。7.3.5.71000×g离心15秒或按试剂说明书操作，倒掉上清液，让管底残留约0.1ml液体，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重做。7.3.5.8最后各加2滴悬浮液，轻轻摇动试管混合，同时肉眼观察结果。7.3.5.9如果60秒内凝集散开，再进一步用显微镜观察有无凝集，镜下无凝集红细胞则为凝聚胺引起的非特异性凝集，不规则抗体筛选结果阴性；60秒内凝集不散开