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组培中常见问题及解决办法——褐变

褐变（一）定义

在组培过程中，培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之变褐死亡养材料向培养基中释放褐色物质，致使的现象。

发生部位：在外植体与培养基接触的位置，材料里面一些物质分泌到培养基表面以及组培苗本身切割外植体时，体内多酚氧化酶被激活，使细胞里的分类物质氧化成棕褐色醌类物质，扩撒到培养基后，抑制其他酶活性。从而影响所接种外植体的培养。

褐变导致植物死亡1、基因型：品种有关。有些植物体内多酚氧化酶不发达，不褐化的品种。不同植物所含酚类化合物数量不同

由于多酚氧化酶活性上的差异，有些品种多酚氧化酶活性强，外植体在接种后较易褐变。2、生理状态：规律：

幼嫩的组织在接种后褐变程度不明显，老熟的组织在接种后褐变程度较为严重。木本植物比草本植物容易发生褐变外植体老化程度高，木质素含量高，容易褐变

外植体伤口越大，酚类物质被氧化面也越大，褐化程度越严重。（仙客来小叶诱导）

取材时间和部位：不同生长季节，植物体内含分类化合物含量和多酚氧化酶活性不同。

比如苹果、核桃，春季冬季褐变死亡率低。夏天容易褐变（二）褐化的主要原因3、培养基成分：无机盐浓度过高会使褐化程度增加

细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐化现象加深。

4、培养条件不当：

例如光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速被培养的外植体的褐变程度。培养材料继代时间：培养过程中，如果推迟继代时间会导致材料褐变，最终全部死亡。

一些办法

母株枝条先进行遮光处理，然后切取外植体培养抑制褐变

暗培养条件对抑制褐变有一定效果（酶系统活性受光照影响）

低温;(温度高容易褐变严重，低温控制酚类化合物的氧化)，降低活性。如卡特兰1、选择合适的外植体：最好选择生长处于旺盛的外植体。最好避免夏季高温2、合适的培养条件：调节降低无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。降低激素浓度、暗光、低温（15-20度）外植体流水冲洗后冰箱冷藏低温处理12-14小时，灭菌后先接种到只含蔗糖的培养基3-7天，酚类部分渗入培养基中后，取出外植体用0.1%漂白粉溶液浸泡10分钟，然后接种到培养基中3、使用抗氧化剂：在培养基中，使用维生素c，抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。

0．1％～0．5％的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果。阻断酚类物质氧化过程，防止醌类物质的形成4、连续转移：对容易褐变的材料可间隔12～24小时培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7～

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