医学教材 病毒性肝炎血清标志物检测

哈尔滨医科大学第一临床医学院实验诊断教研室（LaboratoryDiagnosticsDepartmentofTheFirstHospitalofHMU)关秀茹.1病毒性肝炎血清标志物检测(Testsonserummarkersofviralhepatitis).2病毒性肝炎分类(ClassificationofViralHepatitis)1、已确定的肝炎：甲、乙、丙、丁、戊五种。2、未定论的：己、庚和输血传播病毒（TTV）引起的肝炎。3、非甲~戊型肝炎.3甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎病毒直径核酸种属27nm单链RNA微小RNA病毒科42nm双链DNA嗜肝DNA病毒科30~60nm单链RNA黄病毒科35~37nm单环RNA缺陷病毒科27~38nm单链RNA杯状病毒科主要传播途径流行性季节性

潜伏期发病黄疸粪至口散发或流行秋冬2~6周急性较多多见血液、母婴散发无2~6月缓慢多见较少见血液散发无２~26周多缓慢多无血液散发无4~20周多缓慢多无粪至口散发或流行雨季或洪水后2~10周急性较多较重5型病毒性肝炎病原体、流行病学和临床特征.4甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎慢性病毒携带者病变慢性化肝炎病毒标志物无无抗-HAVIgM抗-HAVIgG有有HBsAgHBeAg抗-HBe抗-HBc抗-HBs前S1蛋白前S2蛋白HBV-DNA有有,多见抗-HCVIgM抗-HCVIgGHCV-RNA有有,较多见HDAg抗-HDIgM抗-HDIgG无无抗-HEVIgM抗-HEVIgG5型病毒性肝炎病原体、流行病学和临床特征.5甲型肝炎(HepatitisA)

HA

由甲型肝炎病毒（HAV）引起的一种以肝脏损害为主的传染性疾病。一、血清标志物检测及意义1、抗HAV-IgM：出现较早，HAV感染后1-2周内血中即可检出，3-6个月转阴，是早期诊断甲型肝炎最简便而可靠的血清学指标。2、抗HAV-IgG：出现于急性感染后期和恢复期，可持续多年甚至终身，是一种保护性抗体。3、HAV-RNA：PCR法测定。.6二、流行特征与预后

潜伏期1个月左右，易暴发流行，通过消化道传播，预后较好，一般3个月至半年恢复，不留后遗症。.7HBV为DNA病毒，球形颗粒，结构包括外壳蛋白（HBsAg，前S1、前S2）和核心颗粒（HBeAg，HBcAg，DNA聚合酶）。乙型肝炎(HepatitisB).8一、血清标志物检测及意义1、乙肝表面抗原（HBsAg）感染乙肝病毒2-11周后血清开始出现HBsAg，尔后出现转氨酶异常和临床症状。HBsAg阳性：见于急性乙肝，慢性乙肝患者，无症状乙肝病毒携带者。.92、前S1和前S2抗原（1）早期出现：比HBsAg还早，在转氨酶升高前1-2个月即可出现阳性。（2）病毒复制的指标：与HBV-DNA，HBeAg几乎同时出现。（3）对于评价药物疗效是一项重要的指标。.103、乙肝病毒表面抗体（HBsAb）是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。初感染2-6月出现，抗-HBs阳性见于HBV既往感染者，乙肝恢复期及乙肝疫苗免疫后。（1）抗-HBs定量测定：抗-HBs含量大于10mIu/ml，表示具有保护性。（2）抗PreS1和抗PreS2：见于乙肝急性期和恢复早期。抗PreS1和抗PreS2阳性表示病毒正在或已被清除，表示预后好，抗PreS1和抗PreS2迟迟不出现，则意味着预后较差或转为慢性。.114、乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗HBc）（1）构成病毒核心颗粒部分，HBcAg活性部分位于颗粒内部，外周血没有游离的HBcAg，经过特殊处理后HBcAg可释放出来。HBcAg阳性表示病毒在复制，传染性强。（2）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。.12对抗-HBc单独阳性的解释：l首先排除假阳性结果。l急性感染后的恢复早期（窗口期）：在HBV急性感染消退时，HBsAg减少甚至消失，抗-HBs尚未出现，称为窗口期。抗HBc-IgM阳性，有传染性。抗HBc-IgG阳性，恢复期，可持续多年，甚至终身。.135、乙肝病毒e抗原和e抗体HBeAg为可溶性，可分泌到细胞外，是病毒复制的标志。HBeAg刺激机体产生抗-HBe抗体。（1）e抗原可作为急性乙肝辅助诊断和预后的指标。HBeAg在乙型肝炎潜伏期后期出现，晚于HBsAg，它随着HBsAg的消失而消失，若急性肝炎发病3-4个月后HBeAg转阴，则预后良好。.14（2）HBeAg存在于HBsAg阳性的病人和携带者的血液中，其中大多数伴有HBV-DNA，DNA多聚酶阳性。HBeAg阳性说明病毒复制，具有很强的传染性。抗-HBe阳性者传染性较低。（3）对HBsAg阴性而HBeAg阳性原因分析：l

检测HBsAg的方法不够灵敏。l

血清中RF的干扰（用热聚IgG处理）l

HBsAg与抗-HBs形成复合物。

.15

●

HBsAg的浓度过高，抗原、抗体比例不合适，出现HBsAg假阴性。

●试剂盒的质量和操作原因，可导致e抗原假阳性。

6、HBV-DNA：PCR法

.16经典的乙肝血清标志物时象曲线图

.17.18.19常见乙肝病毒标志物检测模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)-----未感染(uninfection)+----感染早期(lateinfection)或携带者（carrierstate）+-+--急性感染初期(acutehepatitisB)

+-+-+急性或慢性乙型肝炎，高传染性(acuteorchronichepatitisBwithhighinfectivity)

+---+急性、慢性乙型肝炎或HBsAg携带者(acuteorchronichepatitisBorpersistentcarrierstate)

+--++急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性(acuteorchronichepatitisBwithlowinfectivity)

.20HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)----+急性HBV感染“核心窗口期”或既往曾感染过乙肝，有流行病学意义

---++乙肝恢复期，弱传染性(recoveryfromacutehepatitisBwithlowinfectivity)

-+-++急性乙肝康复期，开始产生免疫力(rcoveryfrominfectionandbeginproducingimmuneability)

常见乙肝病毒标志物检测模式.21HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)-+--+急性HBV感染康复期或有既往感染史，目前保持免疫力(recoveryfromacuteinfectionandreceiveimmuneabilityrecently)

-+---疫苗接种后或HBV感染后康复(recentHBVvaccination,repeatedexposuretoantigenwithoutinfection,orrecoveryfrominfectionwithlossofdetectableanti-HBc)

常见乙肝病毒标志物检测模式.22二、流行特征与预后60%感染，10%发病，农村多于城市，男性多于女性，主要经血液传播，潜伏期1-6个月→无症状携带者和隐性感染，亚临床感染和急、慢性临床感染。急性乙肝，一般持续1-3个月，最多半年，80-90%可以治愈，10-20%转为慢性肝炎，少部分转为肝硬化和肝癌。.23丙型肝炎(HepatitisC)一、血清标志物检测及临床意义1、抗-HCV：非保护性抗体，只是HCV感染指标，可终身携带。2、HCV-RNA：比抗-HCV出现早，可作为早期诊断和献血员筛查的指标。二、流行特征及预后目前，输血后丙型肝炎占70%，潜伏期1-6个月，临床经过较轻，与乙肝比较，转氨酶和胆红素水平较低，但发展为慢性肝炎的比例较高。

.24丁型肝炎(HepatitisD)一、血清标志物检测及临床意义HDV是一种有缺陷的病毒，在许多方面需要嗜肝DNA病毒（主要是乙肝病毒）的辅助，所以认为HDV不单独存在，通常与乙肝伴存。1、抗HDV-IgM，感染早期出现，抗-HD-IgG，感染后期和恢复期。2、HDV-RNA：PCR法二、流行特征与预后潜伏期4-20周，人感染HDV后可表现为HBV/HDV联合感染或重叠感染。.25戊型肝炎(HepatitisB)一、血清标志物检测及临床意义1、抗HEV-IgM：出现于感染早期，3个月内转阴。2、抗HEV-IgG：感染后期和恢复期。3、HEV-RNA：PCR法二、流行特征及预后经消化道传播，易暴发流行。潜伏期10-60天，不发展为慢性，4-6周症状消失，肝功能恢复正常。.26血清病毒标志物的检测方法

1、ELISA方法（酶联免疫吸附试验）2、RIA法3、胶体金法4、化学发光法.27ELISA方法1、特点：敏感性高，特异性好，重复性好，试剂制备容易，结合物高度稳定，有效期长，仪器设备简单，可用肉眼观察结果，操作易于自动化和判断结果客观，成本较低等优点，可用于定性或定量测定可溶性抗原或抗体。

.282、反应原理：酶能与抗原或抗体结合形成酶标抗原或抗体。酶标抗体具有酶和抗体双重活性。待检标本（含抗体或抗原）与预先包被在固相载体表面