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DB37DB37/T3479—2018苹果苗木传带病虫害检测与防控技术规范Technicalspecificationfordetectionandcontrolofnurseryappletree-transmittedpests2018-12-29发布2019-01-29实施山东省市场监督管理局发布I1苹果苗木传带病虫害检测与防控技术规范苗传病虫害(SeedlingTransm造成树体生长发育不良和严重危害的病毒与类病毒，包括锈果类病毒(ASSVd)、坏死花叶病毒在常规栽培品种上，能造成明显症状和严重危害的病毒或类病毒，主要为锈果类病毒(ASSVd)2宜选择开阔通风、灌溉与排水条件良好、土壤肥沃地块作育苗地。周围5km范围内不3用0℃~4℃的冷藏箱短期保存(2周内)；长期保存时，需先将样品用液氮速冻后，放于负80检测混合样品时，可分成多个样品检测。RT-PCR检测技术按附录A的方法进行，免疫学检测和生物4冬春季室内嫁接的苗木，嫁接后立即喷淋有效成份含量为0.03%～0.05%的吡唑醚菌酯或0.3%~喷3～5波美度的石硫合剂、1%～2%多量式波尔多液或95%机油乳剂80倍～100倍药液等于5月、6月份和9月、10月份绵蚜迁飞期，用诱虫板监测迁飞成虫，发现有绵蚜迁入时雨水少的季节或年份，结合其他病害防治喷施杀菌剂；遇雨量大于10mm雨，雨后及时喷施内吸性杀菌剂。多雨季节或连续阴雨期，每7d～10d喷施一次杀菌剂，内吸起苗后剔除染有病虫和生长不良的苗木，用苗木处理剂处理苗木，或用有吡唑醚菌酯或0.3%～0.5%甲基硫菌灵药液，混加0.05%～0.1%吡虫啉或0.3%～0浇足水后，移入温度为20℃~30℃的光照环境中培养，后期不再浇水。苗木萌芽后检查苗木发芽率、5增DNA序列。这是一个指数增长的过程，上一轮的扩增产物又可作为下一轮扩增的模板，使其成A.2.1Trizol试剂：由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提--380ml/L，硫氰酸胍盐（0.8M）--118.16g/L，硫氰酸铵（0.4M）A.4.1.3研磨液室温放置5min，然后每1mlTrizol加入0.2ml氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离A.4.1.4取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10min，12000r/min离心10miA.4.1.5弃去上清液，加入1ml的6A.4.1.7将RNA溶于DEPC处理过的无菌水中，可55℃~60℃水浴10min，增加RNA的溶解度。RNA可进计算其浓度由下面公式计算。1OD260≈40μg/mlRNA，RNA(μg/ml）=测得ODR:AGTCTACAGGCTATTTATF:GGAATTTCACACGACTCCTAAR:CCCGCTGTTGGATTTGATF:TGCCTCAAAGTACACCCF:CC

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