天然药物化学分离精制方法（天然药物化学课件）

天然药物化学天然药物化学成分的提取分离和鉴定方法色谱法2六、色谱法广泛应用的一种分离方法一般分离方法无效时待分离物性质相似分不开时仪器化、自动化、高速化3概念色谱分离法、层析法Chromatography物理化学分析方法45基本原理不同成分在固定相和流动相（移动相）中吸附、分配、亲和力存在差异而达到分离6分类依据----固定相不同氧化铝色谱硅胶色谱聚酰胺色谱凝胶色谱7分类移动相气相色谱液相色谱8分类色谱原理不同吸附色谱分配色谱离子交换色谱分子排阻色谱（凝胶色谱）9分类操作方式柱色谱纸色谱薄层色谱10(一)吸附色谱成分和固定相---吸附作用流动相和固定相---争夺被成分吸附的固定相11吸附能力化学吸附---尽量避免硅胶与生物碱，氧化铝与黄酮半化学吸附---可以用聚酰胺与生物碱物理吸附---应用最广无选择性，相似者易于吸附12常用的吸附剂硅胶微酸性多孔性物质硅氧烷交联结构，硅醇基氢键13水的影响硅胶的活化、去活化100~110℃加热30分钟不可超过500℃14氧化铝吸附能力很强的亲水性吸附剂主要用于碱性、中性物质的分离15聚酰胺商品名绵纶尼龙酚类、醌类物质如黄酮、蒽醌、鞣质16酰胺基和酚类的羟基、酸类的羧基以及醌类的醌基形成氢键产生吸附17活性炭非极性吸附剂吸附能力受溶剂影响，水、有机溶剂

分离水溶性物质（氨基酸、糖、某些苷）18提示硅胶：吸附、分配、离子交换作用活性炭：吸附力不易控制聚酰胺：水装柱，小极性的装柱，三氯甲烷19(二)凝胶色谱凝胶渗透柱色谱法、分子筛滤过柱色谱法、排阻柱色谱法分子量大小不同而分离20基本原理凝胶颗粒内部凝胶颗粒之间2122凝胶种类葡聚糖凝胶G-25型含义羟丙基葡聚糖凝胶(SephadexLH-20)23（三）离子交换色谱离子交换树脂的功能基与溶液中的其他离子进行可逆交换分离混合物中离子成分和非离子成分24基本原理离子交换树脂：含有解离型功能基团的高分子物质，球状或无定形粒状阳离子交换树脂、阴离子交换树脂25阳离子交换树脂RSO3-H+

+Na+Cl-<——>RSO3-Na++H+

Cl-阴离子交换树脂RN+OH-+Na+Cl-<——>RN+Cl-+Na+OH-26离子交换树脂的选择综合考虑被分离物质带正电，选择阳离子交换树脂被分离物质带负电，选择阴离子交换树脂27被分离物质解离能力被分离物质解离能力强，易交换，选择弱酸型或弱碱型树脂被分离物质解离能力弱，不易交换，选择强酸型或强碱型树脂28被分离物质分子量分子量大，选择低交联度的树脂分子量小，选择交联度大的树脂29交换容量尽量选择大的粒度通常选200~400目提取离子性成分，100目制备去离子水，16~60目30（四）大孔吸附树脂色谱白色球形颗粒20~60目非极性中极性极性31基本原理与离子交换树脂类似而不含交换基团范德华引力、氢键等吸附作用大孔网状结构筛选分离特点32（五）分配色谱基本原理一种溶剂被惰性固体（支持剂）吸附，另一种溶剂作为流动相，待分离物质在固定相上待分离成分在两溶剂间分配固定相33正相分配色谱：极性大（水、缓冲液）的溶剂为固定相，极性小（乙酸乙酯、氯仿、丁醇）的溶剂为流动相34反相分配色谱：极性小（氯仿、石油醚）的溶剂为固定相，极性大（水、甲醇）的溶剂为流动相35支持剂本身无吸附作用，不溶于两种溶剂，不与被分离物质发生反应，但能吸附一定量的固定相，流动相通过时不改变其组成。36分离规律正相分配色谱中：被分离组分极性越小，越容易随流动相迁移反相分配色谱中：被分离组分极性越大，越容易随流动相迁移37操作技术流动相的预饱和直接键合在硅胶上代替液体固定相RP-18>RP-8>RP-238（一）高效液相色谱法原理柱色谱的发展联用七、分离新技术和新方法39高效、高速、自动操作技术40广阔的用途分离鉴定定性识别定量分析制备高纯度样品41实例分析高效液相色谱法固定相ODS（十八烷基硅烷键合硅胶）反相色谱柱流动相甲醇-水42羟喜树碱R1=R2=OH喜树碱R1=OHR2=H10-甲氧基喜树碱R1=OHR2=OCH3脱氧喜树碱R1=R2=H43极性顺序羟喜树碱>10-甲氧基喜树碱>喜树碱>脱氧喜树碱洗脱顺序羟喜树碱>10-甲氧基喜树碱>喜树碱>脱氧喜树碱（二）液滴逆流色谱，DCCC逆流分配法的升级版流动相以液滴形式通过适用于强极性成分的分离不乳化、防止氧化4445（三）高速逆流色谱高速逆流色谱（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）

是一种连续高效的

液-液分配色谱分离技术。4647螺旋分离柱48特点该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱来说，具有无不可逆吸附和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。（四）高效毛细管电泳色谱HPCE经典电泳+现代微柱分析4950（五）亲和色谱分子间高亲和力与高专一性可逆结合能与目标化合物结合的配基用于蛋白质的分离纯化天然药物化学天然药物化学成分的分离精制方法溶剂法沉淀法透析法分馏法结晶法52溶剂法色谱沉淀法结晶法透析法分馏法分离（一）酸碱溶剂法酸碱性差异生物碱和非碱性难溶于水物质含内脂或内酰胺的物质一、溶剂法两种不相混溶的两相溶剂成分分配系数不同54(二)溶剂萃取法55醇提取液提取物浓缩水溶液（混悬液）适量水石油醚层水层石油醚萃取乙酸乙酯层水层乙酸乙酯萃取正丁醇层水层正丁醇萃取提取液中加入试剂，使产生沉淀或溶质的溶解度降低，从而获得有效成分去除杂质的方法。56二、沉淀法水提醇沉——去蛋白、糖皂苷乙醇液加乙醚——逐级沉淀皂苷57（一）溶剂沉淀法某些成分与特定试剂产生沉淀，与其他物质分离1.操作技术提取液沉淀(溶解度降低)滤过特定试剂分离58（二）专属试剂沉淀法2.适用范围与某些试剂能生产沉淀的提取物成分3.特点沉淀反应可逆或不可逆59生物碱+生物碱沉淀试剂水溶性季铵碱+雷氏铵盐胆固醇+甾体皂苷鞣质+蛋白质、明胶604.举例（三）盐析法水提液加无机盐黄藤中提取防己碱三颗针中提取小檗碱61透析膜可选择性透过物质分子量的差异使之分离62三、透析法631.操作技术提取液置于透析膜中，放入水中，不断更换水保持浓度差。可加电极使速度加快642.适用范围大分子物质皂苷、蛋白质、多肽、多糖3.特点操作简单、分离完全654.提示透析膜的膜孔选择要依据待分离物质动物性膜、火棉胶膜、玻璃纸膜、蛋白胶膜利用沸点不同进行分离1.操作技术分馏装置66四、分馏法672.适用范围沸点相差较小的液体混合物挥发油、液体生物碱683.特点操作简单，加热可能破坏某些成分4.提示保持适当的温度，严格控制热源温度69成分溶解度的差别KNO3NaCl70五、结晶与重结晶71A量大，溶解度随温度上升而增大B量少，易溶C量少，不易溶某固体混合成分A有效成分B杂质C杂质72操作技术（1）制备结晶溶液加热状态下制成近饱和溶液73操作技术（