DB21∕T 2289.3-2016 海洋微藻成分分析 第3部分：酸值的测定

第3部分：酸值的测定ThirdPart:Determinati2016-03-28发布2016-05-28实施I本标准是按照GB/T1.1-200《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草DB21/T2289《海洋微藻成分分析》分为以下9个部分：—第1部分：中性脂的测定；—第2部分：极性脂的测定；——第3部分：酸值的测定；——第4部分：脂肪酸组成成分的测定；——第5部分：蛋白质的测定；——第6部分：总糖的测定；——第7部分：淀粉的测定；——第8部分：色素的测定；—第9部分：灰分的测定。本部分为DB21/T2289《海洋微藻成分分析》的第3部分。本部分由大连市质量技术监督局归口。本部分主要起草人：薛松、姚长洪、刘娇、姜君鹏、曹旭鹏、刘亚男。海洋微藻是海洋初级生产力的主要来源，其生长繁殖快，光合效率高，培养不占耕地，节约淡水资源，在水产养殖、生物能源、食品、医药等领域有广泛的应用前景，是未来海洋经济的潜在增长点。然而，目前缺少相应的海洋微藻成分测定的标准方法，不同方法测定的各成分含量差别较大，使得不同实验室公布的数据可比性小，影响了海洋微藻天然产物代谢的研究，限制了海洋微藻生物质产业的发展。海洋微藻中存在的脂酶使其在收获后水解脂类生成游离脂肪酸，导致微藻油脂酸值升高，影响海洋微藻生物质的品质，进而影响微藻生物质的下游炼制工艺。因此海洋微藻中酸值的大小是海洋微藻品质的重要指标之一。不同的微藻培养方式、微藻生物质的储藏条件和储藏时间等均对酸值造成影响。分析海洋微藻酸值有利于在微藻生物质的培养、收获和相关制品的制备过程中控制游离脂肪酸的含量，指导下游炼制工艺的选择，提高海洋微藻制品的品质，促进海洋微藻相关产业的发展。1海洋微藻成分分析第3部分：酸值的测定1范围本部分规定了用滴定法进行海洋微藻酸值测定的术语和定义、原理、试剂、仪器设备、操作步骤、本部分适用于海洋微藻油脂酸值的测定。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T601-2002化学试剂标准滴定溶液的制备微藻生物质经干燥、研磨、过80目筛后得到的粉状物质。试样在氯仿-甲醇(v/v=2:1)溶液中经超声辅助萃取，所得到的油脂经乙醚-乙醇(v/v=2:1)混合溶液溶解，加入饱和氯化钠溶液，以酚酞为指示剂，用氢氧化钾标准溶液滴定，由消耗的氢氧化5.4无水乙醇：分析纯。25.11提取溶剂：体积比为2:1的氯仿(5.1)/甲醇(5.2)混合溶液，现配现用。5.12油脂溶解溶剂：体积比为2:1的乙醚(5.3)/乙醇(5.4)混合溶液，现配现用。5.130.01mol/L氢氧化钾标准溶液：称取0.14g氢氧化钾固体(5.6),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至250mL,按GB/T601-2002中5.1410mg/mL酚酞指示剂：称取0.5g酚酞固体(5.7),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至50mL。5.15饱和氯化钠溶液：称取400g氯化钠(5.10)固体加入到1L水(5.9)中，搅拌至氯化钠固体6.6烘箱：温度不小于100℃。称取0.5g~0.6g微藻藻粉(3.1),加入10mL提取溶剂(5.11),超声清洗仪(6.2)辅助萃取10min,于离心机(6.3)上4000r/min离心10min,收集上层溶液于离心管(6.4)中；重复以上提取操作3次，合并提取液，用氮气装置(6.5)吹扫，待溶剂挥发至小于0.5mL后转移至烘箱(6.6)中，60℃烘干16h。称取7.1.1所述的微藻油脂样品10mg~15mg于磨口锥形瓶(6.7)中，加入40mL油脂溶解溶剂(5.12),盖上塞子，磁力搅拌器(6.8)搅拌溶解30min备用。每份油脂样品制备2瓶。3向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL饱和氯化钠溶液(5.15)至分层，加入4滴～5滴酚酞指示剂(5.14),用3mL碱式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入氢氧化钾标准溶液(5.13)7.2.2样品的实际滴定向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL饱和氯化钠溶液(5.15)至分层，加入4滴～5滴酚酞指示剂(5.14),用3mL碱式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入80%滴定参考体积(V₁)的氢氧化钾标准溶液(5.13),再逐滴滴定至溶液变成浅粉红色且30s内不褪色，记录此时所消耗的氢氧化钾标准溶液(5.13)总体积(V₂)。7.3空白试验以40mL油脂溶解溶剂(5.12)代替微藻油脂溶液，按照7.2的方法滴定，记录空白样品所消耗的氢氧化钾标准溶液(5.13)总体积(V₀)。8结果表示样品酸值按式(1)进行计算：A——微藻油脂的酸值，单位为毫克每克(mg/g);c——已标定的氢氧化钾标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L);V₂——样品分析时所消耗的氢氧化钾标准溶液总体积，单位为毫升(mL);Vo——空白试验时所消耗的氢氧化钾标准溶液总体积，单位为毫升(mL);56.1——氢氧化钾摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol);m-—微藻油脂质量，单位为克(g)。9重复性在同一实验室、由同一操作人员完成的三个平行测定结果，相对偏差不大于10%,以三次平行测定4(资料性附录)酸值(mg/g)相对标准偏差(%)新鲜微拟球藻(Nannochloropsissp.)存放两年的微拟球藻(Nannochloropsissp.)新鲜湛江等鞭金