生物化学检验技术 课件 第四章 实验方法的选择与检测系统

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实验方法的选择1临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价2检测系统及量值溯源3第一节实验方法的选择

实验方法的选择要结合其目的、要求等，选择适当的实验方法，这是得到准确可靠信息的前提，是检验质量的重要保障。实验方法是否适合于临床，必须进行严格的选择和评价。第一节实验方法的选择实验方法的分级1.决定性方法3.常规方法2.参考方法准确度最高，系统误差最小，经过详细研究，没有发现产生误差的原因的方法。准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构(包括国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等)颁布的方法。具有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，性能指标符合临床或其它目的需要的实验方法，由于其经济实用性，是目前临床实验室应用最为广泛的常规分析方法。第一节实验方法的选择参考物质的分级1.一级参考物质（原级参考物、一级校准品、一级标准品）

是一种已经确定的稳定而均一的杂质含量定量的物质，其计量学特性位居最高，测量不确定度最小，由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定其数值。

2.二级参考物质（次级参考物、二级校准品或二级标准品）

这类标准品可以是纯溶液(水或有机溶剂的溶液)，也可以是与临床样本相似的基质中，由参考方法定值或用一级标准品校正而确定其值。3.控制物

控制物也被称为工作参考物，临床上常用的控制物有冻干的，还有溶液的，其值以参考方法用适当的校准物来定值。第一节实验方法的选择实验方法选择的原则1.实用性（1）微量快速：检测所需的样本量少，适合批量成套分析。（2）方法简便：操作容易开展，试剂种类少，易于自动化分析。（3）费用低廉：无需昂贵试剂和仪器，可行性较强。（4）应用安全：试剂无毒，腐蚀性小，操作人员无需特殊防护措施。2.可靠性

所选方法应具有较高的精密度、准确度、特异性和稳定性，有较

大的检测能力及有较宽的测量范围，保证检测结果的准确性能符合方法允许误差限度的要求。第一节实验方法的选择实验方法选择的步骤1.广泛搜集资料：根据方法选择的要求，广泛、仔细查阅国内外已发表的相关文献，翻阅相关文件条例：条件允许时还可以通过实验室之间的交流、现场考察、专业会议信息，也可参照国外或国内室间质评和能力验证的反馈信息。2.选定候选方法：根据实验室的设备条件、技术人员业务素质、工作量等具体情况，选择适合于本实验室具体条件的方法作为候选方法。3.初步评价试验：对候选方法应作初步评价试验。第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价

精密度(precision)是指在规定检验条件和同一测量程序下，对同一样本进行重复多次测量，所得测量值之间随机误差的大小，观察各数值之间的接近程度。通常用标准差(standarddeviation,S)(或)变异系数(cefficientofvariation,CV)的大小即不精密度来描述。

基本方法：批内重复实验、批间重复试验、日内重复试验一、精密度评价第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价判断标准

将计算得到的标准差参比国家行业标准(WS/T403-2012(临床生物化学检验常规项目分析质量标》)或与美国CLIA'88规定的总允许误差进行比较，批内不精密度CV应小于CLIA'88允许误差的1/4,批间不精密CV应小于CLIA'88允许误差的1/3作为评价标准。第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价

正确度（trueness）是大批检测结果的均值与真值的一致程度；准确度（accuracy）是一次检测结果与真值的一致程度。正确度通常用偏倚(bias)表示，已经消除了不精密度的影响，偏倚又可用系统误差表示。

基本方法：回收试验、干扰试验和方法比对试验。

判断标准：比例系统误差小于国家行业标准（WST403-2012）或CLIA`88规定的总允许误差标准，则该检测方法或检测系统正确度性能可接受；否则为不可接受。二、正确度评价第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价

是指样本在不经过任何稀释，浓缩和其他预处理的情况下，直接应用检测系统，测定出样本的范围，也称为线性范围，在此范围内，测量值与预测值（真值）呈直线关系。

注意事项：线性范围评价最理想的样本是患者低值和高值的新鲜血清标本，实际上这种标本往往不容易收集到,因此,多采用人工方法制备。为使人工制备的样本与实际工作中患者样本的基质一致，多以混合血清作基质。样本浓度应覆盖待评价线性范围，上下限还应包含医学决定水平和常见疾病的检测值。三、可报告范围评价第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价

检出限也叫检测限、检测低限。是指在给定的显著性水平内，能够检出被测物的最低浓度。注意事项：1）检出限是定性检出，不能进行准确定量。2）有些因子，无法准确的单独进行检测，比如PT和APTT的检测。3）理想的空白样品或低值样本要与患者具有相同或相似的基质.4）实验过程中，如果LOB和LOD的未知，应建立自己的数值。四、检出限的验证第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价临床实验方法的评价

是指某项检查结果在正常人群中的分布范围，是解释检验结果、分析检验信息的一个基本尺度和依据。五、参考区间验证第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

通过方法学评价可以得知候选方法的误差，解决了样本与检验方法的问题。但是一个实验在临床上的应用价值，还要与临床诊断相结合，解决候选方法和临床受试者的关系，主要包括试验的诊断敏感度、诊断特异度、预测值、似然比和ROC曲线等指标。

诊断试验指用于某种疾病诊断的临床试验检查方法。金标准是指当前临床医学界公认的诊断疾病最可靠的方法。第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

又称灵敏度、真阳性率（truepositiverate，TPR），指在用“金标准”确诊的患者中，应用诊断试验检查得到同为某病患者的百分比。灵敏度反映诊断试验正确识别患病者的能力，灵敏度的理想值是100％。

通常用于：①拟诊为严重但疗效好的疾病，以防漏诊；②拟诊为有一定治疗效果的恶性肿瘤，以便早期确诊及时治疗；③存在多种可能疾病的诊断，可排除某一诊断；④普查或定期健康体检，能筛选某一疾病，以防漏诊。一、敏感度第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

又称特异性、真阴性率（truenegativerate，TNR），指用“金标准”诊断的非某病者中，应用诊断试验检查得到同为非某病患者的百分比。特异度反映诊断试验正确鉴别非患病者的能力，理想值为100％。

常用于：①拟诊患有某病的概率较大时，以便确诊；②拟诊疾病严重但疗效与预后均不好的疾病，以防误诊，尽早解除患者的压力；③拟诊疾病严重且根治方法具有较大损害时，需确诊，以免造成患者不必要的损害。二、特异度第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

也称预告值或诊断价值，包括阳性预测值和阴性预测值，分别表示诊断试验结果确定或排除某种疾病存在与否的诊断概率。预测值受流行率的影响，不同流行率的人群中疾病的预测值不同。三、预测值第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

似然比是某一特定水平的诊断试验结果在患病者中出现的概率与在未患病者中出现的概率之比，性质稳定，不因流行率的改变而改变。似然比包括阳性似然比和阴性似然比。

似然比可直接判断一个诊断试验的好坏。四、似然比第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

受试者工作特征曲线（ROC曲线）又称为感受性曲线，是以真阳性率（敏感度）为纵坐标，假阳性率（1-特异度）为横坐标，并将相对的点连接起来所形成的曲线。

作用：ROC曲线能很容易地查出任意界限值时对疾病的识别能力；选择最适的诊断阈值（界限值）；比较两种或两种以上不同诊断试验对诊断同种疾病的可靠性，ROC曲线围成的面积越大，诊断性能越好。五、ROC曲线第二节临床实验方法的评价和检验项目临床应用性能评价检验项目临床应用性能评价

又称正确指数，为灵敏度加上特异度减去1。可以用于两种诊断方法的比较，理想的诊断指数为100%。

公式为：诊断指数=（灵敏度＋特异度－1）×100%

诊断指数表示诊断实验发现真正某患病和非患某病的总能力，其值在0-1之间波动，其值愈大表明诊断试验的真实性越好。六、诊断指数第三节检测系统及量值溯源检测系统性的定义

检测系统是指完成一个检验项目的测定所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、设备维护程序等的组合。如果是手工操作，还应包括具体的操作人员。第三节检测系统及量值溯源检测系统性能的验证与确认（一）检测系统的性能验证

如果实验室采用的分析系统具有溯源性。实验室需对该检测系统进行验证，用验证实验的结果来验证该系统能够达到预期的水平和取得应有的结果。验证内容至少应包括正确度、精密度和可报告范围。（二）检测系统的性能确认

实验室如果要自建检测系统或对厂商完整的检测系统中的任何一个组分作出改变,都必须对该系统的性能进行全面确认,用确认实验的结果来确认该系统的预期用途和应用要求。确认内容主要包括正确度、精密度、检出限、可报告范围、生物参考区间等。第三节检测系统及量值溯源量值溯源的定义

通过一条具有规定不确定度的不间断的传递链