临床输血检验技术 课件 项目二 血型检测技术

项目二血型检测技术任务一红细胞血型系统检测技术一、红细胞血型系统分类及命名红细胞血型分类传统分类器官组织血型分类ISBT分类红细胞型ISBT命名红细胞血型抗原的表达方法红细胞血型表型的表述红细胞血型等位基因和基因型命名红细胞血型集合、系列表述二、ABO血型系统人类ABO基因位于第9号染色体，常染色体显性遗传。ABO血型受控于3个等位基因，即A、B、O基因，A、B是显性基因，O是隐性基因。ABO基因通过编码糖基转移酶，转移糖分子到前体物质上形成ABO抗原。ABO血型遗传符合孟德尔遗传学规律，子代从亲代各获得一半的遗传基因，产生相应的血型抗原，可以根据双亲血型推断子女可能的血型。二、ABO血型系统ABO血型遗传示意图二、ABO血型系统二、ABO血型系统ABO血型抗体出生前尚未产生抗体。出生后3-6个月出现ABO抗体，5-10岁时达高峰；成人随年龄增长而降低。新生儿抗体常来自母体IgG，偶尔自身产生的IgM。新生儿血型抗原少，抗体效价低，易误定血型。抗-A、抗-B、抗-AB存在于所有缺乏相应抗原的人的血清、唾液、乳汁、泪液等各种体液及分泌物中。二、ABO血型系统A型、B型：以IgM为主，有少量IgG、IgA抗体。O型：以IgG抗体为主，主要是抗-AB，不是抗-A和抗-B的混合，通过吸收放散试验予以证实。A亚型：可以出现抗-A1，A2B型产生抗-A1的概率高于A2型。抗-A1：多数是IgM抗体，可干扰血型鉴定和交叉配血试验。ABO抗体的特性二、ABO血型系统母胎不相容输血不相容自身溶血性贫血随着妊娠、输血次数增加，IgG抗体产生增多。二、ABO血型系统A抗原：主要为A1和A2。其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、Amos、Aint、Aw和Ael。B亚型：一般比A亚型更少，B3、Bx、Bm、Bmos和Bel等。ABO亚型二、ABO血型系统A1和A2表型鉴别血型抗原抗-A抗-A1抗-ＢA1A、A1++-A2A+--A1BA、A1、B++

+二、ABO血型系统A1、A2血清学区别：抗-Al检查有无Al抗原。抗-A1试剂：B型人的血清制成，或为双花扁豆提取并稀释的植物凝集素。凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型；不与抗-A1试剂凝集者为A2或A2B型。A1、A2亚型的鉴定方法三、Rh血型系统Fisher-Race：CED表述Rhesus85%Rh命名ISBT：RH1(D)、RH2(C)、RH3(E)、RH4(c)、RH5(e)Wierner假说：R1、R2、R0现代命名法：RHCE*CE、RhD三、Rh血型系统RH基因RHD和RHCE

1P34-36，分别编码D和C/c、E/e抗原RHD基因，无等位基因d三、Rh血型系统Rh血型抗原50多种

D抗原最重要Rh阳性：？Rh阴性：？85%99.6%Rh抗原红细胞上含有D抗原者称为Rh阳性，不含D抗原者称为Rh阴性。三、Rh血型系统Rh抗原强度：仅次于A及B抗原。常见抗原：D、C、c、E、e，只存在于人红细胞膜。Rh抗原具有剂量效应：纯合子比杂合子抗原强度强（cDe/cDe比cDe/cde反应性强）。Rh、Kidd、Duffy、MNS系统表现明显ABO表现不明显基因为纯合子时，抗原位点多，与抗体反应强基因为杂合子时，抗原位点少，与抗体反应弱三、Rh血型系统D抗原D抗原：正常D、-D-、Du等。

弱D（WeakD）

部分D（Partial

D）

放散（Del）Du三、Rh血型系统RHCE基因编码C和/或c、E和/或e抗原。RHCE有50多种等位基因，易发生突变，突变后可导致抗原表达改变或减弱。（1）复合抗原：包括ce、cE、Ce、CE，在同一蛋白质分子上表达。（2）变异体：RHCE基因突变，导致C、c、E、e抗原数量或质量改变，其中C和e抗原改变较常见。c/C和E/e抗原三、Rh血型系统偶见天然抗-E、抗-CW,基本上都是通过输血、妊娠等刺激产生的免疫性抗体。抗体：抗-D、-E、-C、-c、-e、-DE、-DC、-Ce、-Ec等，为IgG抗体。约30%左右Rh阴性个体接受Rh阳性血液后能产生抗体。受血者或孕妇血浆中含有Rh抗体时，当再次接受相应抗原阳性血液，可引起严重的HTR和HDN。抗-E产生的机率高于抗-D。Rh抗体四、红细胞其他血型系统1H血型系统2Lewis血型系统3MNS血型系统4P血型抗原5I/I血型系统7Kell血型系统红细胞其他血型系统8Kidd血型系统9Duffy血型系统6Lutheran血型系统10Diego血型系统四、红细胞其他血型系统H血型系统ISBT命名为H，数字序号为018，只有1个H抗原。红细胞或体液中的寡糖前体链→H抗原→A、B抗原。H抗原表达在红细胞膜糖蛋白或糖脂上，以及体液、分泌液黏蛋白上。H抗原：由19号染色体上紧密连锁的FUT1（H）和FUT2（Se）控制合成。FUT1和FUT2各自编码一种L-岩藻糖基转移酶（H酶），分别转移岩藻糖到Ⅱ型、Ⅰ型寡聚糖链上。

四、红细胞其他血型系统H基因→H酶，将红细胞上的Ⅱ型寡糖链转化为H抗原；Se基因→H酶，将分泌液中的Ⅰ型寡糖链转化为分泌型H抗原，即体液中的H物质。分泌型个体唾液腺细胞有Se和H基因，因此唾液中同时表达Ⅰ型、Ⅱ型H抗原，是分泌型个体形成A和/或B物质的基础；非分泌型个体为se隐性基因，唾液中不表达H抗原。四、红细胞其他血型系统H抗原强弱趋势：O>A2>B>A2B>A1>A1BH抗原四、红细胞其他血型系统缺失H基因，即缺乏H酶，则无H物质。孟买型个体携带的ABO基因可以遗传给后代，无法遗传给后代H基因和Se基因，所以后代也不能形成ABO抗原，故为隐性遗传。血清学特征：①红细胞上无ABH抗原，与抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H均不反应，易误判为O型。②唾液无ABH物质。③血清中有抗-A、抗-B、抗-H，在4～37℃有活性，能引起HTR。孟买型个体只能输注孟买型血液。H抗原缺失表型--孟买型四、红细胞其他血型系统缺乏H基因，有Se基因，红细胞表面弱表达H抗原，与抗-H不反应，与抗-A、抗-B凝集反应很弱，可通过吸收放散试验证实红细胞上有A和/或B抗原。分泌液及血浆中含有H物质，可以形成少量A和/或B物质，并吸附到红细胞上，微弱表达A和/或B抗原。血清中存在着抗-A、抗-B、抗-H、抗-HI等。H抗原缺失表型—类孟买型五、ABO血型血清学鉴定无相应ABO抗原、抗体有相应ABO抗原、抗体红细胞凝集悬浮于上层游离红细胞下沉阳性反应阴性反应微柱凝胶检测卡法五、ABO血型血清学鉴定五、ABO血型血清学鉴定五、ABO血型血清学鉴定【质量控制】1．标本2．离心机3．凝胶卡五、ABO血型血清学鉴定五、ABO血型血清学鉴定六、RhD血型血清学鉴定Rh血型鉴定临床较重要的血型系统，抗原性仅次于ABO血型。采用已知特异性抗体，如抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e，检查红细胞上有无相应的Rh血型抗原，尤其RhD抗原是临床常规检查项目。红细胞膜上有D抗原为Rh阳性，无D抗原者为Rh阴性。针对弱D、部分D或Del等D变异型需要应用不同厂家或批号的试剂予以证实抗原有无。六、RhD血型血清学鉴定六、RhD血型血清学鉴定【质量控制】1．标本待检者红细胞要用生理盐水充分洗涤，避免血清蛋白的干扰。2．对照每次试验应需做阳性、阴性对照。3．Rh阴性确认试验若待检红细胞与抗D试剂在盐水介质中不凝集，一般使用3种以上IgG抗D试剂进行间接抗球蛋白试验。若3种IgG抗D试剂抗球蛋白试验的结果均为阴性，即可判定为Rh阴性；如果抗球蛋白试验有一种或一种以上的IgG抗D试剂的结果为阳性，则判断结果为Rh阳性，该个体为弱D表型。任务二白细胞抗原系统检测技术一、人类白细胞血型抗原系统HLA复合体结构图白细胞血型抗原系统HLA复合体：指人类的主要组织相容性复合体，也称为HLA系统、人类白细胞抗原。HLA等位基因的命名图示一、人类白细胞血型抗原系统HLA分子结构：依据HLA基因分类情况，其编码的产物依次被称为HLA-Ⅰ类分子、HLA-Ⅱ类分子和HLA-Ⅲ类分子。HLA分子结构示意图一、人类白细胞血型抗原系统HLA分子的组织分布HLA-Ⅰ类分子广泛分布在有核细胞表面HLA-Ⅱ类分子主要表达在巨噬细胞等细胞表面HLA分子也分布在血、尿、唾液及精液中检出一、人类白细胞血型抗原系统白细胞血型抗原的种类1．与红细胞共有的血型抗原：ABO、P、LE、XG、Sc、Do等，但在白细胞上表达量少。2．与其他组织细胞共有的血型抗原：HLA除表达在白细胞上，也表达在表达在其他组织细胞上，如血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位点等HLA-Ⅰ类抗原。3．白细胞本身所特有的抗原：人类中性粒细胞抗原主要分布于中性粒细胞表面上。二、粒细胞抗原系统白细胞本身所特有的血型抗原主要有人类中性粒细胞抗原、中性粒前体细胞的特异性抗原和淋巴细胞上的Gr系统抗原等。HNA分子的命名原则：1．命名为HNA。2．数字编号表示抗原糖蛋白膜位点。3．小写英文字母表示同一位点上的不同抗原如HNA-1a、HNA-lb和HNA-1c等。4．新发现的粒细胞抗原暂时用字母缩写命名，直至正式命名。三、白细胞血型抗体1.HLA抗体：多为IgG类的群体反应性抗体（panelreactiveantibodies，PRA），具有结合补体的淋巴细胞毒性质。2.粒细胞抗体：粒细胞抗原免疫刺激机体后可以产生，与粒细胞抗原相对应，多数为IgG类，也可能出现IgM类或者IgM与IgA的混合抗体。四、白细胞抗原系统检测技术HLA系统检测（一）HLA的血清学分型试验（二）HLA的细胞学分型试验（三）HLA的基因学分型试验粒细胞系统检测（一）血清学技术（二）基因分型技术四、白细胞抗原系统检测技术HLA的血清学分型试验HLA抗原检测：微量淋巴细胞毒试验流式细胞仪方法ELISA方法HLA抗体检测方法：淋巴细胞毒交叉配合试验Luminex检测技术掌握不同方法的原理及其优缺点四、白细胞抗原系统检测技术HLA的基因学分型试验HLA分型技术：根据个体HLA遗传学差异，检测具有等位基因差异的HLA基因序列，本质在于编码相应抗原的基因，常用PCR-SSP法、PCR-SSOP法、PCR-RFLP法、SBT法五、白细胞抗原系统检测的临床应用HLA系统在医学上的应用HLA系统在移植医学的应用HLA系统在输血医学的应用HLA系统在法医学的应用HLA系统在一些疾病的诊断上的应用任务三

血小板血型系统检测技术一、血小板血型系统抗原与抗体血小板相关抗原：与其他细胞表面或组织共有的抗原，红细胞血型系统（ABO、Lewis、I、P)以及人类白细胞抗原(HLA)。血小板特异性抗原：由血小板膜结构的一部分，特有的膜糖蛋白上的抗原决定簇，表现出血小板独特的遗传多态性，但在其他细胞和组织上也能发现。红细胞相关抗原(红细胞抗原)：A、B、H、Lea、Leb、I、i、P、Tja

组织相容性抗原：HLA-A、B位点，血小板上未发现有HLA-DR、DP、DQ等位点的抗原。一、血小板血型系统抗原与抗体血小板特异性抗原命名①人类血小板抗原系统用英文缩写HPA表示。②按发现时间的先后顺序进行数字编号。③“a”表示高频等位基因对应的抗原，“b”表示低频等位基因对应的抗原，而“w”则表示没有对应等位基因的抗原。一、血小板血型系统抗原与抗体依据人类血小板抗原免疫多态性数据库（ImmunolPolymorphismDatabaseofhumanplateletantigen，IPD-HPA），截至2017年，通过免疫血清学已经确定了35个血小板同种特异性抗原（HPA-1~29bw），其中12个对偶抗原已纳入了6个系统，即HPA-1～HPA-5和HPA-15系统。血小板特异抗原的种类一、血小板血型系统抗原与抗体1.HLA抗体若患者输注的血液制剂中含有足量的白细胞，由于白细胞表面上有HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ类抗原，可能导致患者出现初次同种免疫，当患者再次接受含有少量HLA抗原的血小板，机体就会迅速产生大量的HLA抗体，导致输入的血小板被破坏。2.血小板特异性抗体受血者因输注与之不配合的血小板、多次妊娠或骨髓移植等免疫刺激，导致机体产生抗血小板抗体，多为IgG型。3.血小板自身抗体由于体内自身免疫系统失调，机体产生针对自身血小板抗原的抗体，多为IgG或IgA型抗体。血小板血型系统抗体二、血小板血型检测技术血清学检测：1.简易致敏红细胞血小板血清学技术－SEPSA2.微柱凝胶血小板定型试验3.血小板免疫荧光试验4.单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验5.改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验6.流式细胞仪检测技术二、血小板血型检测技术简易致敏红细