2025届高考生物考前冲刺过关回归教材重难点06微生物的选择培养与计数

回来教材重难点06微生物的选择、培育与计数【★01教材方位直击】本题主要考查微生物的筛选与培育及相关试验探究，要求考生识记培育基的成分、种类及作用；驾驭分别微生物常用的两种方法及操作过程；驾驭探究试验的原则，能结合图中信息学问答题，同时本章节会常常以流程图，来考查微生物的分别和培育，土壤中尿素分解菌的分别与计数与纤维素分解菌等微生物分别的原理及方法，是常考的内容，同时也会伴随着灭菌方法的考察，学生要精确记忆培育基的种类及作用，同时对于微生物计数的计数，学生要能驾驭干脆计数法和间接计数法的计数原理，精确驾驭并运用公式进行计算。【★02重难点背诵归纳】易错点01．培育基（1）概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分物质。（3）养分成分：水、无机盐、碳源、氮源，此外还要满意微生物生长对pH、特殊养分物质及氧气的要求。2．无菌技术（1）目的：获得纯净培育物。（2）关键：防止外来杂菌的入侵。（3）不同对象的无菌操作方法[连线]：养分物质定义作用主要来源碳源凡能供应所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能供应所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不行少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物供应除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调整物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物易错点02：微生物的纯化1.方法：（1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基的表面。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，进行培育。稀释操作时：每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。（3）涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较困难，且各个细微环节均需保证“无菌”，应特殊留意：①酒精灯与培育皿的距离要合适。②吸管头不要接触任何其他物体。③吸管要在酒精灯火焰四周运用。2.留意事项：（1）倒平板操作：①培育基灭菌后，需冷却至50℃左右时才能倒平板，缘由是琼脂在44℃以下凝固。②培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。③整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避开杂菌污染。④平板冷凝后要倒置的缘由：防止皿盖上的冷凝水珠落入培育基，造成污染。⑤若倒平板时，培育基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。（2）平板划线操作：①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最终一区域不要与第一区域相连。④划线用力要大小适当，防止用力过大将培育基划破。3．平板划线法和稀释涂布平板法的比较项目优点缺点适用范围平板划线分别法可以视察菌落特征，对混合菌进行分别不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以视察菌落特征汲取量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，简洁扩散适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4.两种菌种保存方法的比较项目临时保藏法甘油管藏法适用对象频繁运用的菌种长期保存的菌种培育基类型固体斜面培育基液体培育基温度4℃－20℃方法菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培育基转移到簇新培育基上将培育的菌液与等体积灭菌后的甘油混合匀称后于冷冻箱内保存缺点菌种易被污染或产生变异易错点03：微生物的选择分别与计数1.选择培育基是指通过培育混合的微生物，仅得到或筛选出所须要的微生物，其他不须要的种类在这种培育基上是不能生存的。2.分解纤维素的微生物的分别的试验原理：（1）土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。故在用纤维素作为唯一碳源的培育基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。（2）在培育基中加入刚果红，可与培育基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培育基中会出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈，从而可筛选纤维素分解菌。3.统计菌落数目的方法：（1）显微镜干脆计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算肯定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数；③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）：①原理：当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌。②操作：a.设置重复组，增加试验的劝服力与精确性。b.为了保证结果精确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。【★03真题好题演练】真题演练：1.（2024·河北省）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时探讨者也实行多种措施拓展其利用价值。回答下列问题：（1）皮渣中含有较多的自然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是__________，萃取效率主要取决于萃取剂的__________。萃取过程须要在相宜温度下进行，温度过高会导致花色苷__________。探讨发觉，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，缘由是____________________。（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1mL稀释液接种于培育基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为__________个。（3）皮渣积累会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，须要将培育基的pH调至__________性，灭菌后须在未凝固的培育基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是______________________________。培育筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培育基中可加入乙醇作为__________。（4）皮渣积累过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相像。请设计一个简洁试验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌_________。（简要写出试验步骤和预期结果）【答案】（1）利于萃取剂溶解花色苷、使原料与萃取剂充分接触（2）性质和运用量（3）分解（4）纤维素酶、果胶酶可破坏细胞壁，有利于提高花色苷的提取率（5）8.8×106（6）中性或偏碱（7）使培育基不透亮，从而使醋酸菌菌落四周出现透亮圈（8）碳源（9）试验步骤：将平板置于无氧环境下接着培育，视察菌落形态和透亮圈大小

预期结果：若菌落接着生长，且透亮圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能接着生长，透亮圈不再扩大，则为醋酸菌菌落【解析】（1）自然食用色素花色苷可用萃取法提取，萃取剂与水应不混溶，萃取前将原料干燥，有利于萃取剂溶解花色苷，提高溶解率；粉碎的目的是使原料与萃取剂充分接触；萃取效率主要取决于萃取剂的性质和运用量。萃取过程须要在相宜温度下进行，温度过高会导致花色苷分解。萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理，可破坏细胞壁，有利于提高花色苷的提取率。（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1mL稀释液接种于培育基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则三个平板中平均菌落数为（78+91+95）÷3=88，每克皮渣中微生物数量为88÷0.1×104=8.8×106个。（3）醋酸菌属于细菌，制备醋酸菌初筛平板时，须要将培育基的pH调至中性或弱碱性，灭菌后在未凝固的培育基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙可使培育基不透亮，醋酸菌产生的醋酸可分解碳酸钙，产生透亮圈，依据这一特点可筛选出醋酸菌，在缺少糖源的液体培育基中醋酸菌以乙醇为碳源，先把乙醇氧化为乙醛，再把乙醛氧化为乙酸。（4）醋酸菌为好氧菌，与兼性厌氧型的乳酸菌菌落形态相像，且二者产生的代谢产物均可使碳酸钙分解，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌，可将平板置于无氧环境下接着培育，视察菌落形态和透亮圈大小。若菌落接着生长，且透亮圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能接着生长，透亮圈不再扩大，则为醋酸菌菌落。2.（2024·湖南省）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。探讨人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即_________。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫簇新粪便样品稀释液接种至以_________为唯一碳源的固体培育基上进行培育，该培育基从功能上分类属于_________培育基。（2）配制的培育基必需进行灭菌处理，目的是_________。检测固体培育基灭菌效果的常用方法是_________。（3）简要写出测定大熊猫簇新粪便中纤维素分解菌活菌数的试验思路_________。（4）为高效降解农业秸秆废弃物，探讨人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解试验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。菌株秸秆总重（g）秸秆残重（g）秸秆失重（%）纤维素降解率（%）A2.001.5124.5016.14B2.001.53235014.92C2.001.4229.0023.32【答案】（1）C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶（2）纤维素（3）选择（4）为了杀死培育基中的全部微生物（微生物和芽孢、孢子）（5）不接种培育（或空白培育）（6）将大熊猫簇新粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布三个平板），对菌落数在30～300的平板进行计数，则可依据公式推想大熊猫簇新粪便中纤维素分解菌活菌数（7）C（8）接种C菌株后秸秆失重最多，纤维素降解率最大

【解析】（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。在用纤维素作为唯一碳源的培育基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫簇新粪便样品稀释液接种至以纤维素为唯一碳源的固体培育基上进行培育；培育基从功能上分类可分为选择培育基和鉴别培育基，故该培育基从功能上分类属于选择培育基。（2）配制培育基的常用高压蒸汽灭菌，即将培育基置于压力100kPa、温度121℃条件下维持15～30分钟，目的是杀死培育基中的全部微生物（微生物和芽孢、孢子）。为检测灭菌效果可对培育基进行空白培育，即将未接种的培育基在相宜条件下培育一段时间，若在相宜条件下培育无菌落出现，说明培育基灭菌彻底，否则说明培育基灭菌不彻底。（3）为测定大熊猫簇新粪便中纤维素分解菌活菌数，常采纳稀释涂布平板法，在相宜的条件下对大熊猫簇新粪便中纤维素分解菌进行纯化并计数时，比照组应当涂布等量的无菌水。将大熊猫簇新粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布三个平板），对菌落数在30～300的平板进行计数，则可依据公式推想大熊猫簇新粪便中纤维素分解菌活菌数。（4）测定酶活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的削减量或产物的增加量来表示。由表格可知，在相宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸秆失重最多，纤维素降解率最大，说明该菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最大。3.（2024·浙江省）回答下列（一）小题：（一）某环保公司从淤泥中分别到一种高效降解富养分化污水污染物细菌菌株，制备了固定化菌株。（1）从淤泥中分别细菌时常用划线分别法或________法，两种方法均能在固体培育基上形成________。对分别的菌株进行诱变、________和鉴定，从而获得能高效降解富养分化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培育基上繁殖。（2）固定化菌株的制备流程如下；①将菌株与该公司研制的特定介质结合；②用蒸馏水去除________；③检验固定化菌株的________。菌株与特定介质的结合不宜干脆采纳交联法和共价偶联法，可以采纳的2种方法是________。（3）对外，只供应固定化菌株有利于爱护该公司的学问产权，推想其缘由是________。【答案】（1）涂布分别（2）单菌落（3）筛选（4）未固定的细菌（5）降解富养分化污水污染物的实力（6）包埋法和吸附法（7）特定介质能为菌株繁殖供应X【解析】1.分别纯化细菌最常用的方法是划线分别法（平板划线法）和涂布分别法（稀释涂布平板法）。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培育基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体——菌落。划线分别法，方法简洁；涂布分别法，单菌落更易分开，但操作困难些。2.固定化酶（insolubleenzyme）就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。3.植物组织培育的原理是植物细胞具有全能性，其详细过程：外植体→愈伤组织→胚状体→新植体，其中脱分化过程要避光，而再分化过程需光。4.在植物组织培育时，通过调整生长素和细胞分裂素的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。（一）分析题意可知，本试验目的是从淤泥中分别到一种高效降解富养分化污水污染物的细菌菌株，制备固定化菌株。（1）分别纯化细菌最常用的方法是划线分别法或涂布分别法，两种方法均能在固体培育基上形成单菌落。为了获得能高效降解富养分化污水污染物的菌株，还需对分别的菌株进行诱变处理，再经筛选和鉴定。（2）固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。由于菌株与特定介质的结合不宜干脆采纳交联法和共价偶联法，故可以采纳的2种方法是包埋法和吸附法。（3）由于该菌株只能在添加了特定成分X的培育基上繁殖，可推想特定介质能为菌株繁殖供应X，故该公司对外只供应固定化菌株，有利于爱护该公司的学问产权。4.（2024·全国甲卷）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过试验比较了几种洗衣粉的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），试验结果见下表。加酶洗衣粉A加酶洗衣粉B加酶洗衣粉C无酶洗衣粉（比照）血渍++++++++油渍++++++++依据试验结果回答下列问题：（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是__________；加酶洗衣粉B中添加的酶是__________；加酶洗衣粉C中添加的酶是__________。（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有__________，缘由是___________。（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好缘由是___________。（4）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指___________。固定化酶在生产实践中应用的优点是_________（答出1点即可）。【答案】（1）蛋白酶（2）脂肪酶（3）蛋白酶和脂肪酶（4）加酶洗衣粉A和加酶洗衣粉C（5）蚕丝织物的主要成分是蛋白质，会被蛋白酶催化水解（6）酶可以将大分子有机物分解为小分子有机物，小分子有机物易溶于水，从而将污渍与洗涤物分开（7）利用物理或化学方法将酶固定在肯定空间内的技术（8）固定在载体上的酶可以被反复利用，可降低生产成本（或产物简洁分别，可提高产品的产量和质量，或固定化酶稳定性好，可持续发挥作用）【解析】加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污迹简洁从衣物上脱落。（1）从表格中信息可知，加酶洗衣粉A对血渍的洗涤效果比比照组的无酶洗衣粉效果好，而血渍含有大分子蛋白质，因此，加酶洗衣粉A中添加的酶是蛋白酶，同理，加酶洗衣粉B中添加的酶是脂肪酶；加酶洗衣粉C对血渍和油渍的洗涤效果比无酶洗衣粉好，油渍中有脂肪，因此，加酶洗衣粉C中添加的酶是蛋白酶和脂肪酶。（2）蚕丝织物中有蛋白质，因此，表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有加酶洗衣粉A、加酶洗衣粉C，缘由是蚕丝织物主要成分是蛋白质，会被蛋白酶催化水解。（3）据分析可知，相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的缘由是：酶可以将大分子有机物分解为小分子有机物，小分子有机物易溶于水，从而将污渍与洗涤物分开。（4）固定化酶技术是指利用物理或化学方法将酶固定在肯定空间内的技术，酶既能与反应物接触，又能与产物分别，所以固定在载体上的酶还可以被反复利用。所以固定化酶在生产实践中应用的优点是：降低生产成本（或产物简洁分别，可提高产品的产量和质量，或固定化酶稳定性好，可持续发挥作用）。好题演练：1．（2024·陕西渭南·）进行垃圾分类收集可以削减垃圾处理时间，降低处理成本。科研小组欲分别及培育若干种微生物用于处理湿垃圾，如剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物。请分析回答：（1）科研小组从土壤中筛选产脂肪酶的菌株时，配制的培育基须要以__________为唯一碳源。制备固体培育基的步骤是；计算→称量→溶化→__________→__________。接种微生物最常用的方法是__________。（2）获得产脂肪酶的菌株后，在处理含油垃圾的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。现获得可产脂肪酶的A、B两种菌株，并进行了培育探讨，结果如图1所示。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关探讨，理由是______________________________。（3）科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培育基上出现了A、B和C三种菌落（如图2所示）。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择__________（填“A”“B”或“C”）菌落进一步纯化。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培育基上生长且没有形成透亮圈的缘由是____________________。（4）在微生物分解处理垃圾的过程中，纤维素分解菌能够分泌纤维素酶，该酶可将纤维素分解为葡萄糖。纤维素酶由三种复合酶组成，其中__________酶可将纤维二糖分解为葡萄糖。【答案】（1）脂肪灭菌倒平板稀释涂布平板法和平板划线法（2）B该菌株增殖速度快，且脂肪剩余比例小，降解脂肪实力强（3）C硝化细菌为自养细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透亮圈（4）葡萄糖苷【分析】分析图1可知，菌株A的细胞密度增殖速率低于菌株B，脂肪剩余量菌株A高于菌株B。从图2中可知，ABC三种菌株中，BC菌落四周出现透亮圈，而A菌落四周未出现透亮圈。（1）科研小组从土壤中筛选出产脂肪酶的菌株时，需设置只利于产脂肪酶的菌株生长，而其他杂菌生长受抑制的培育基，因此配制的培育基须要以脂肪为唯一碳源。制备固体培育基的步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其次还有穿刺接种和斜面接种。（2）据图1分析可知，菌株B增殖速度快，且脂肪剩余比例小，降解脂肪实力强，故应选择菌株B进行后续相关探讨。（3）科研小组从土壤中筛选淀粉分解菌时，加碘液染色后，选择培育基上出现了A、B和C三种菌落，淀粉遇碘液会变蓝，而淀粉酶能够分解淀粉，则不同产酶活力的菌株四周会形成不同直径的透亮圈，淀粉酶活力越强的菌株四周的透亮圈越大，因此若要得到淀粉酶活力最高的菌株，应选择C菌落进一步纯化，这是因为C菌株的透亮圈直径与菌落直径比值最大。经检测A菌落为硝化细菌，A菌落能在此培育基上生长且没有形成透亮圈的缘由是硝化细菌为自养细菌，能够利用空气中的二氧化碳合成有机物，但硝化细菌不能产生淀粉酶，所以无透亮圈。（4）纤维素酶由三种复合酶组成，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。2．（2024·河南·）培育基是人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质。基本培育基能满意野生型菌株的最低养分要求，一些突变型菌株因合成实力出现缺陷，须要在补充培育基（基本培育基中添加所缺陷的养分物质）上才能正常生长，可以满意各种养分缺陷型的该微生物生长的培育基称为完全培育基。回答下列问题：（1）培育基一般都含有__________四类成分；制备固体培育基的步骤包括计算、称量、溶化、__________、倒平板；其中“计算”的依据是____________________。（2）借助完全培育基和基本培育基，采纳影印法培育可以筛选出合成实力有缺陷的突变型菌株，过程如图所示。用__________（填工具）将菌液接种到完全培育基上；由基本培育基上得到的结果推想，菌落__________最可能是合成实力有缺陷的突变型菌株。（3）为鉴定某突变型菌株的详细缺陷类型，将其涂布接种于以下5组添加了不同类型氨基酸的基本培育基中，视察其生长状况。结果该菌株只能在A、C两组培育基中生长，则该菌株为__________（填氨基酸名称）养分缺陷型菌株。简述如何临时保存所鉴别出的菌株：______________________________。组别氨基酸组合A组氨酸苏氨酸谷氨酸天冬氨酸亮氨酸B精氨酸苏氨酸赖氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸C酪氨酸谷氨酸赖氨酸色氨酸丙氨酸D甘氨酸天冬氨酸甲硫氨酸色氨酸丝氨酸E半胱氨酸亮氨酸苯丙氨酸丙氨酸丝氨酸【答案】（1）碳源、氨源、水和无机盐灭菌培育基的配方比例和用量（2）涂布器2、7（3）谷氨酸将鉴别出的菌株接种到试管的固体斜面培育基上，待菌落长成后放在4℃的冰箱中保藏（以后每3～6月转移一次，将菌种转移到簇新的培育基上）【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培育基倒入培育皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培育．在线的起先部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延长，菌数渐渐削减，最终可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分别的菌液经过大量稀释后，匀称涂布在培育皿表面，经培育后可形成单个菌落。（1）培育基一般都含有碳源、氨源、水和无机盐四类成分；制备固体培育基的步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板；其中“计算”的依据是培育基的配方比例和用量。（2）筛选菌株用稀释涂布平板法，用涂布器将菌液接种到基本培育基上；养分缺陷型不能生长，故2、7最可能是合成实力有缺陷的突变型菌株。（3）该菌株只能在A、C两组培育基中生长，说明两组培育基都含有该菌须要的氨基酸，即谷氨酸。临时保存所鉴别出的菌株方法为：将鉴别出的菌株接种到试管的固体斜面培育基上，待菌落长成后放在4℃的冰箱中保藏（以后每3～6月转移一次，将菌种转移到簇新的培育基上）。3．（2024·四川·树德中学）生物爱好小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下试验，并胜利筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培育基成分如表所示，试验步骤如图所示。请分析回答问题：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g琼脂15g溶解后自来水定容到1000mL（1）分解尿素的细菌能分泌____________酶，能将尿素分解成_______________。以尿素为唯一氮源的培育基因为________________________________具有选择作用。（2）用来筛选分解尿素细菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________（答出两点即可）。（3）试验是否须要振荡培育来提高溶氧量：______（“是”或“否”），缘由是______________。转为固体培育时，常采纳___________法接种，获得单菌落后接着筛选。（4）分别分解尿素的细菌试验时，甲同学从培育基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学试验结果差异的缘由可能有__________（填序号）。①取样不同②培育基污染③操作失误④没有设置比照（5）要想增加该试验的劝服力，还应当怎么做？_____________________。（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培育皿放置在37℃恒温培育箱中培育24〜48h，视察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中___________倍的稀释比较合适。稀释倍数103104105106107菌落数>5003672483618【答案】脲NH3和CO2能利用尿素的细菌能在该培育基上生长，不能利用尿素的细菌不能生长为细菌生长供应无机盐，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定否瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡平板划线法或稀释涂布平板①②③一是设置比照试验，用该培育基不接种样品视察；再配制一组完全培育基，接种该样品培育视察。二是最终要对该微生物进行鉴定，用酚红指示剂鉴定该微生物的菌落，看指示剂是否变红106或105【分析】1.培育基选择分解尿素的微生物的原理：培育基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培育基就能够选择出分解尿素的微生物。2.培育基的基本成分包括水、无机盐、碳源和氮源，此外还须要满意微生物生长对pH、特殊养分物质以及氧气的要求。3.微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培育基倒入培育皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培育。在线的起先部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延长，菌数渐渐削减，最终可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分别的菌液经过大量稀释后，匀称涂布在培育皿表面，经培育后可形成单个菌落。4.选择培育基是在培育基中加入相应的特殊养分物质或化学物质，抑制不须要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。【详解】（1）土壤中的部分细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶；尿素在脲酶的催化下可以分解成NH3和CO2；以尿素为唯一氮源的培育基具有选择作用是因为只有能合成脲酶的细菌才能利用尿素，能在该培育基上生长，不能利用尿素的细菌不能生长。（2）用来筛选分解尿素细菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，可以为细菌生长供应钾、钠、磷等无机养分，同时，二者构成缓冲对，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定。（3）依据题意，目的菌为来自于牛和山羊的瘤胃中的微生物，因此，试验中不须要振荡培育来提高溶氧量，因为瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。转为固体培育时，为了获得单菌落，常采纳平板划线法或稀释涂布平板法进行接种，获得单菌落后再接着筛选。（4）依据生物试验应遵循比照原则、等量原则、单一变量原则和限制无关变量原则，A同学的试验结果比其他同学多，可能是培育基污染造成的，还可能是A同学试验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的：土样不同可能导致计数偏差，①正确；培育基污染会导致菌落数增加，②正确；操作失误可能增加微生物的数量和种类，菌落会增多，③正确；没有设置比照不会增加菌落数目，④错误。因此，A同学的试验结果产生的缘由可能是①②③。（5）微生物培育过程中，为了试验结果具有劝服力，常需设置比照试验，用该培育基不接种样品视察；再配制一组完全培育基，接种该样品培育视察；另外，为了对分别的菌种进行进一步鉴定，还要用酚红指示剂鉴定该微生物的菌落，看指示剂是否变红。（6）在实际操作中，通常选用肯定稀释范围的样品进行培育，以保证获得菌落数在30～300之间、适于技术的平板。由表可知，106或105倍的稀释比较合适。4．（2024·四川遂宁·）幽门螺杆菌（Hp菌）因为其导致胃痛、胃癌，成为最臭名昭著的细菌之一。它是一种异养微厌氧菌，胃里面还有胃酸（pH为1.5左右），绝大部分的细菌都适应不了。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分别培育。试验基本步骤如下：请回答下列问题：（1）上述培育过程中，能够“浓缩”幽门螺杆菌的步骤是____。梯度稀释操作时如何防止杂菌污染____。（2）有的化工厂会产生尿素废水，探讨者提出用幽门螺杆菌来处理废水，假如该方法可行，依据题干信息可知，该处理过程对温度和氧气的要求是____。（3）实践证明有一种尿素分解菌比幽门螺杆菌处理尿素废水的实力强许多，最可能的缘由是前者比后者产生的____多，科学家用安排色谱法分别该物质主要是利用了该物质与其他物质的____不同。在凝胶色谱柱的装填过程中，装柱前须要依据色谱柱的内体积计算须要的凝胶量的缘由是___。（4）为了证明不分餐能导致胃幽门螺杆菌交叉传播，探讨者提取了某胃炎患者家庭的100g剩菜，加入无菌水稀释。取上述稀释液分别接种到3个相宜的培育基中置于相宜的条件下进行培育，三个平板上胃幽门螺杆菌菌落数均介于30～300之间且相差不大，求平均值得到菌落数为B个。依据上述情景不能计算出每克剩菜中的幽门螺杆菌的数量，缘由是______。【答案】选择培育试管口和移液管应当在离火焰1-2cm处（或者火焰旁边）37℃左右、低氧（或无氧）脲酶相对分子质量干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体积差别很大因为不知道稀释倍数和接种体积【分析】1.分解尿素细菌的分别原理：（1）能合成脲酶的细菌才能分解尿素。（2）配制以尿素为唯一氮源的培育基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。2.梯度稀释操作时，无菌操作很关键。【详解】（1）据图分析可知，“选择培育”为“浓缩”幽门螺杆菌的过程。梯度稀释操作时，无菌操作很关键，要留意试管口和移液管应当在离火焰1-2cm处（或者火焰旁边）进行试验操作。（2）胃幽门螺杆菌是一种异养微厌氧菌，生活环境具有胃酸（pH为1.5左右），故用幽门螺杆菌来处理废水应当在37℃左右、低氧（或无氧）环境中进行。（3）能合成脲酶的细菌才能分解尿素，若一种尿素分解菌比幽门螺杆菌处理尿素废水的实力强许多，最可能的缘由是前者比后者产生的脲酶多。科学家用安排色谱法分别该物质主要是利用了该物质与其他物质的相对分子质量不同。依据色谱柱的内体积计算须要的凝胶量的缘由干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体积差别很大。（4）不知道稀释倍数和接种体积，无法计算出每克剩菜中的幽门螺杆菌的数量。5．（2024·江西吉安·）工业企业每年都会产生大量高浓度工业废水，工业废水进入水体，其中的酚类会被酚降解菌分解。从活性污泥中分别高效降解酚类的菌株并计数的过程如图所示。回答下列问题：（1）酚类降解菌的富集培育基含有蛋白胨、K，HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中蛋白胨可为微生物生长供应的养分物质有________；试验中对所用的培育皿、培育瓶等玻璃制品应采纳____法进行灭菌；对配制好的培育基应采纳_______法灭菌。（2）用______吸取1mL培育的菌液注入含______的试管中获得101稀释液，以此类推获得105的稀释液。（3）取稀释倍数为105的菌液0.1mL采纳________法接种到三个平板上，获得的菌落数分别是105、125、115，则1mL菌液中含有酚类降解菌__________个。若菌落长满整个平板，难以计数，最可能的缘由是____________________________。【答案】碳源、氮源、维生素干热灭菌高压蒸汽灭菌无菌移液管9mL无菌水（稀释）涂布平板1．15×108菌液稀释度不够【分析】1.微生物培育基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满意微生物生长对pH、特殊养分物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为养分要素成分时并不是起单一方面的作用。2.微生物常见的接种的方法有：平板划线法和稀释涂布平板法。【详解】（1）蛋白胨养分丰富，可为微生物生长供应的养分物质有碳源、氮源、维生素等。试验中对所用的培育皿、培育瓶等玻璃制品应采纳干热灭菌法进行灭菌；对配制好的培育基应采高压蒸汽灭菌法灭菌；（2）一般用无菌移液管吸取菌液和培育液，所以用无菌移液管吸取1mL培育的菌液注入含9mL无菌水的试管中获得101稀释液，以此类推获得105的稀释液；（3）若要进行微生物的计数，须要用（稀释）涂布平板法培育微生物，所以取稀释倍数为10的菌液0.1mL采纳（稀释）涂布平板法接种到三个平板上，获得的菌落数分别是105、125、115，则1mL菌液中含有酚类降解菌=C/V×稀释倍数=（105+125+115）÷3÷0.1×105=1.15×108个。若菌液稀释度不够则菌落长满整个平板，难以计数，因此若菌落长满整个平板，难以计数，最可能的缘由是菌液稀释度不够。6．（2024·广东·）测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培育基（EMB培育基）上培育→统计菌落数目。据图回答问题：（1）过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先须要进行___________________处理，保证明验不受其他微生物干扰。与过滤有关的操作都要在___________________旁进行。（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培育基上，这属于微生物培育中的_______________操作。从物理状态角度分析，EMB培育基属于_______________培育基，制备培育基时须要采纳_______________法灭菌。（3）某生物爱好小组的某同学尝试依据上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的100mL菌液通过滤膜法测得EMB培育基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推想1升待测水样中的大肠杆菌数目为___________________个。（4）该同学进一步思索，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区分是___________________。另一份来自某公园的欣赏湖，若要通过测量蓝藻的数目来探讨水华，培育基配方中则必需添加___________________（水、无机盐、碳源、氮源）。【答案】（1）消毒灭菌酒精灯火焰（2）接种固体高压蒸汽灭菌（3）3100（4）有无核膜为界限的（成形的）细胞核水、无机盐、氮源【分析】滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法，将肯定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培育基上，经培育后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落即可推想计算出水样中的大肠杆菌数；伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料，大肠杆菌在伊红-美蓝培育基的菌落呈深紫色，并有金属光泽。（1）过滤待测水样须要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中须要对滤杯、滤膜和滤瓶进行消毒灭菌处理，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染。（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培育基上，这属于微生物培