《N-芴甲氧羰基-异亮氨酸》

ICSXX.XXX.XX

CCSXXX

T/CIXX

中国国际科技促进会团体标准

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-异亮氨酸

Fmoc-Ile-OH

（草案）

2023-XX-XX发布2023-XX-XX实施

中国国际科技促进会发布

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-异亮氨酸

1范围

本文件规定了N-芴甲氧羰基-异亮氨酸（Fmoc-Ile-OH）的术语和定义、结构式、分子式和相对分子

量、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存和有效期。

本文件适用于N-芴甲氧羰基-异亮氨酸（Fmoc-Ile-OH）的质量检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T191包装储运图示标志

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的配制

GB/T603化学试剂实验方法中所用制剂及制品

GB/T20967无损检测目视检测总则

GB/T17521化学试剂N,N-二甲基甲酰胺

GB/T6040红外光谱分析方法通则

GB/T26497电子天平

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4结构式、分子式和相对分子量

4.1结构式

4.2分子式

C21H23NO4

1

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4.3相对分子量

353.41（按2019年国际相对原子质量）。

5要求

5.1感官要求

白色至类白色粉末（按国家药品标准工作手册）。

5.2技术指标

应符合表1的规定。

表1技术指标

项目要求

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后应澄清透明

鉴别（IR）供试品的红外光吸收图谱应与结构式一致

纯度（HPLC）≥99.0%

游离氨基酸（TLC）≤0.1%

Fmoc-L-Allo-Ile-OH（HPLC）≤0.2%

Fmoc-D-Allo-Ile-OH（HPLC）≤0.2%

Fmoc-D-Ile-OH（HPLC）≤0.1%

水分（KF)≤1.0%

比旋光度[20/D]-20.0°±2.0°（c=1，DMF）

含量（滴定）≥98.0%

5.3净含量

应符合国家质量监督检验检疫总局第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。

6实验方法

本试验所用试剂和水除特殊注明外，均为分析纯试剂和纯化水。

6.1感官要求

采用目视法测定。

6.2技术指标

6.2.1溶解性

6.2.1.1仪器

50ml具塞比色管。

6.2.1.2试剂

2

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DMF（AR级）。

6.2.1.3操作方法

6.2.1.3.1称取本品约3.5g，置于一个干燥洁净的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超声溶解后应澄

清透明。

6.2.2鉴别（IR）

6.2.2.1仪器

红外光谱仪、电子天平。

6.2.2.2测定方法

取供试品适量，按照红外光谱仪操作规程进行测定，本品的红外光吸收图谱应与结构式一致。

6.2.3纯度（HPLC）

6.2.3.1仪器

高效液相色谱仪，电子天平。

6.2.3.2试剂

乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、三氟醋酸（AR级）、高纯水。

6.2.3.3色谱条件

a)色谱柱参考条件如下：

1)型号：ZORBAXSB-C18（或等效的色谱柱）；

2)规格：4.6mm*25cm，5um。

b)流动相参考条件如下：

1)流动相A：0.1%三氟醋酸-水；

2)流动相B：0.1%三氟醋酸-乙腈；

3)洗脱方式：梯度。

c)梯度洗脱条件如下：

表2色谱梯度洗脱条件

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）

05050

30595

30.15050

355050

3

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d)其他色谱条件如下：

1)流速：1.0ml/min；

2)柱温：30℃；

3)进样体积：20μl；

4)检测波长：220nm；

5)运行时间：35min。

e)参考保留时间如下：

表3参考保留时间

名称保留时间（min）相对保留时间备注

Fmoc-β-Ala-OH6.2870.53杂质

Fmoc-β-Ala-Ile-OH7.6390.64杂质

芴甲醇7.6390.64杂质

Fmoc-Osu11.0990.93杂质

Fmoc-Ile-OH11.8791.00主峰

Fmoc-Ile-Ile-OH13.1171.10杂质

6.2.3.4试验步骤

6.2.3.4.1供试品溶液的配制

取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用甲醇溶解后定容至刻度，摇匀。

6.2.3.4.2测定

分别进甲醇空白和供试品溶液各1针，按照6.2.3.3的色谱条件进行测定。

6.2.3.5定量方法

以峰面积归一化法计算纯度。

6.2.4游离氨基酸(TLC)

6.2.4.1仪器

硅胶G薄层板、层析缸。

6.2.4.2试剂

a)正丁醇、冰醋酸、甲醇；

b)2%的茚三酮丙酮溶液。

6.2.4.3分析步骤

4

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6.2.4.3.1对照品溶液的配制

取L-异亮氨酸约0.02g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加适量水溶解后定容至刻度，摇匀，做为

对照品溶液。浓度：0.2mg/ml。

6.2.4.3.2供试品溶液的配制

取本品约2.0g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加适量甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，做为供试品

溶液。浓度：200mg/ml。

6.2.4.3.3点板

精密吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用正丁醇：冰醋酸：水(3:1:1）（v/v/v)

为展开剂，展开，晾干。

6.2.4.3.4显色

喷以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃烘烤加热至斑点出现，立即检视。

6.2.4.3.5结果判定

对照品溶液应显一个清晰的斑点，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，

不得更深。

6.2.5异构体(HPLC)

6.2.5.1仪器

高效液相色谱仪、电子天平。

6.2.5.2试剂

乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、三氟醋酸（AR级）、高纯水。

6.2.5.3色谱条件

a)色谱柱条件如下：

1)型号：PhenomenexLux5umCellulos-2；

2)规格：4.6mm*25cm，5um。

b)流动相条件如下：

1)0.1%TFA-水：乙腈=58：42(v/v)

c)稀释剂条件如下：

1)甲醇。

d)其他色谱条件：

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1)流速：1.0ml/min；

2)柱温：30℃；

3)进样体积：5μl；

4)检测波长：254nm；

5)运行时间：40min。

e)参考保留时间如下：

表4参考保留时间

品名保留时间（min）相对保留时间备注

Fmoc-L-Allo-Ile-OH22.80.93异构体

Fmoc-L-Ile-OH24.51.00主峰

Fmoc-D-Ile-OH31.11.27异构体

Fmoc-D-Allo-Ile-OH32.41.32异构体

6.2.5.4试验步骤

6.2.5.4.1对照品溶液的配制

取消旋体（Fmoc-DL-Ile-OH+Fmoc-DL-Allo-Ile-OH）约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，

用稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。

6.2.5.4.2供试品溶液的配制

取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。

6.2.5.4.3测定

取稀释剂溶液、供试品溶液和对照品溶液各进1针，按照6.2.5.3的色谱条件进行测定。

6.2.5.5定量方法

以峰面积归一化法计算异构体（Fmoc-L-Allo-Ile-OH、Fmoc-D-Allo-Ile-OH和Fmoc-D-Ile-OH）的

含量。

6.2.6水分（KF)

6.2.6.1仪器

分析天平、自动水分测定仪。

6.2.6.2试剂

卡尔费休氏试剂、无水甲醇。

6.2.6.3操作方法

取本品约0.2~0.5g，按照水分测定仪操作规程进行测定。

6

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6.2.7比旋光度

6.2.7.1仪器

旋光仪、电子天平。

6.2.7.2试剂

DMF(AR级）。

6.2.7.3操作方法

称取本品约1.0g，精密称定，置于100ml的容量瓶中，加适量DMF溶解后定容至刻度，摇匀。按照旋

光测定仪操作规程进行测定。

6.2.7.4计算公式

按式（1）计算比旋光度值。

┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(1)

100�

[20/�]=𝐼

式中：

α—为测得的旋光度；单位为：（°）；

l—为测定管的长度，单位为：（dm）；

c—为100ml溶液中含有被测物质的重量，单位为：（g）。

6.2.8含量（滴定）

6.2.8.1试剂和溶液

6.2.8.1.1中性甲醇

取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显淡红色，保持30s

不褪。

6.2.8.1.2氢氧化钠标准溶液（0.1mol/L)

6.2.8.1.3酚酞指示剂

6.2.8.2操作方法

取本品约0.7g，精密称定，置于一个干燥洁净的150ml锥形瓶中，加入50ml中性甲醇，振摇使供试

品溶解后加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显淡红色为终点。记录消耗标

准溶液的体积。

6.2.8.3计算公式

按式（2）氢氧化钠标准溶液体积。

×100┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(2)

�×�×0.35341

��=�

7

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式中：

—氢氧化钠标准溶液的含量；单位为（%）；

mc—i为氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；

V—为供试品消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；

0.52658—为1.00ml氢氧化钠标准溶液（0.1000mol/L）相当于Fmoc-Ile-OH的质量；

m—为供试品的重量,单位为（g）。

6.2.8.4允许误差

取两次平行实验结果的平均值为测定结果，两次平行实验结果之间的RSD不得大于0.3%。

6.3净含量

按照JJF1070的规定进行检验。

7检验规则

7.1检验分类

产品的检验分为出厂检验和型式检验。

7.2组批

以同一班次、同一原料、同一品种包装加工生产成的产品为一批。

7.3抽样

7.3.1固体产品按《药品生产质量管理规范》执行。

7.3.2将采样品置于干燥清洁避光容器中，取固体样品1000g,分别装于2个洁净、干燥的容器瓶中，

密封并贴上标签，注明生产厂名称、产品名称、批量、取样日期等，一份检验，一份留样备查。

7.4出厂检验

7.4.1产品应经本公司质检部门按本标准要求进行检验，检验合格后方可出厂。

7.4.2出厂检验项目为感官要求、比旋光度、溶解性、水分、净含量。

7.5型式检验

7.5.1每年进行一次型式检验，有下列情况之一时，亦须进行型式检验：

a)更换主要设备或主要工艺；

b)