甲肝抗体样本检测的风险评估

甲肝抗体样本检测的风险评估一、一般生物学特性概述1、起源1973年Feinstone应用免疫电镜技术从急性肝炎患者粪便中发现。由于其理化性状与肠道病毒相似，1982年国际病毒命名委员会将其分为小RNA病毒科肠道病毒属72型。但由于有些特性并不与肠道病毒相同，如HAV在细胞内增殖迟缓，不引起CPE等，故近年又被单列为小RNA病毒科的肝病毒属。2、基因组及基编码产物单股正链RNA，约7.4kb,分5’非编码区、编码区和3’非编码区。5’非编码区起到识别和链接宿主核糖体的作用。5’末端的第735个碱基处开始有一个单一的开放读码框架，编码一种多聚蛋白，并被病毒蛋白酶水解成非结构蛋白和结构蛋白。结构蛋白是一个大分子蛋白质，断裂成VP1、VP2、VP3、VP4。VP1是衣壳蛋白，诱发中和抗体。人类HAV为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型，主要是Ⅰ、Ⅲ型，仅个别毒株为Ⅱ和Ⅶ型。HAV仅为一个血清型。与其他肝炎病毒无交叉反应。3、形态特征圆球状，直径约27nm，无包膜，呈20面对称体，有饱满和空心两种颗粒。病毒颗粒以五聚体前体进行装配。12个五聚体以一种浓度依赖形式装配成空的衣壳，不含RNA核心，具抗原性但无感染性。实心的HAV颗粒具传染性。4、培养特性在细胞培养中HAV不能使细胞产生病变，电镜检查也未能在细胞中找到典型的病毒颗粒。但HAV的CR326株（为狨猴適應株）可在FRhK6猴肾细胞株中连续传代，也可将病人粪便接种非洲绿猴肾细胞中连续传代，免疫荧光法可在细胞质中发现HAV抗原。我国近年发现HAV可在人胚肾细胞MERN株中增殖。5、流行特性主要经过粪-口途径传播，可造成暴发或散发流行，潜伏期短，发病较急，一般不转为慢性，亦无慢性携带者，预后良好。二、致病性和感染剂量关于甲型肝炎的发病机制研究较少，尚未完全阐明。经口感染HAV后，发病前有短暂病毒血症阶段，然后再定位于肝脏。既往认为HAV对肝细胞有直接损害作用。近年研究表明：实验感染HAV的动物肝细胞及HAV体外细胞培养时均不发生细胞病变；患者血清CD+8细胞亚群增高，致敏淋巴细胞对HAV感染的肝细胞显示细胞中毒性；肝内炎症反应明显等。根据研究结果，目前认为，其发病机制倾向于以宿主免疫反应为主。发病早期，可能由于HAV在肝细胞中大量增殖及CD+8细胞毒性T细胞杀伤作用共同造成肝细胞损害，病后期可能以免疫病理损害为主。甲型肝炎病毒在肝细胞内复制的过程中仅引起肝细胸轻微损害，在机体出现一系列免疫应答(包括细胞免疫及体液免疫）后，肝脏出现明显病变，表现为肝细胞坏死和炎症反应。HAV通过被机体的免疫反应所清除，因此，一般不发展为慢性肝炎，肝硬化或病毒性携带状态。其致病机制除病毒直接作用外，肝脏免疫病理损伤也起作用。病后产生抗HAV的IgG抗体，且可维持多年，对病毒再感染有免疫力。甲型肝炎的预后较好。三、感染途径及潜在暴露结果致病性与免疫性传染源为患者，主要通过粪—口途径传播。HAV随粪便排出体外，污染水源、食物和海产品等，造成散发流行或大流行，潜伏期15～50天。病毒侵入人体后，在局部繁殖，入血形成病毒血症，再进入肝内，引起甲型肝炎。四、环境中的稳定性HAV在体外抵抗力较强，乙醚pH3、56°C30min不能使它灭活。在-20℃条件下保存数年，其传染性不变，但在100°C5min可杀死HAV，甲醛或氯处理可使它灭活。五、被操作微生物的浓度和剂量的影响在进行HAV抗体检测时要防止血清污染。六、自然宿主和易感人群人类对各型肝炎普遍易感，各种年龄均可发病。甲型肝炎感染后机体可产生较稳固的免疫力，在本病的高发地区，成年人血中普遍存在甲型肝炎抗体，发病者以儿童居多。⑴职业易感人群：处理污物或污水的工人；食品行业从业人员，如果他们接触那些没有包装的食品，而这些食品是没有经过烹调的，他们就有可能受到感染。如果工作人员感染了HAV，他们就会污染食物，从而有可能造成在使用这些食品的人中发生爆发流行；与儿童接触的工作人员。如在托儿所、幼儿园、学校等工作的人员；医务工作者；实验室从事检验的人员；生活在低传染地区到中度或高度流行地区旅行、出差的商人、外交人员、军人等。⑵个体易感者：生活在低传染地区到中度或高度流行地区旅行的个人；与易感HAV接触的人（集体、监狱、多人口家庭）；儿童-主要病毒宿主，是儿童-成人传播方式的传染源；患慢性肝病的人，他们对HAV十分敏感；多次输血的人；静脉吸毒者；男性同性恋者。七、实验动物研究，实验室感染和院内感染信息HAV的易感动物较多：猩猩、美洲绒猴、猕猴、恒河猴等众多灵长类动物对HAV敏感。我国学者毛江森以HAV感染浙江红面猴，余昌晏以HAV感染广西树猴均获成功。八、实验活动评估1.样品采集HAV抗体检测主要采集血液样品，样品采集的工作人员应掌握相关专业知识和操作技能，能有效地防止病原微生物扩散和感染。样品采集过程中，工作人员必须清楚意识到待检样品的潜在感染性，操作时须戴手套，避免刺伤手。针筒内的血要小心缓慢地沿管壁注入试管内，防止血液外溅。盛有血液的试管必须及时加盖，并放置于稳妥的试管架上，防止倾侧。试管在注入血液前应认真检查试管底、管壁有否裂纹和破损。使用后的真空采血器或普通注射器及止血棉球都含有待检样本的血液，必须立即放入内含消毒液的容器内，按有关要求消毒一定期限后，作为医疗废弃物处理，或放置于生物废弃袋中，在密封的情况下送去作高压灭菌处理。2、样品转移院内标本运送过程中，一般致病微生物可能通过经口、经粘膜或破损皮肤等途径导致传染：容器破裂可造成标本泄露污染环境和运送人员或其他人员；容器倾倒可造成标本泼洒而致环境和人员污染。容器表面污染：标本采集时或发生泄露、泼洒时可导致容器外表面污染而具有潜在危害。3、样品接收、开启实验室接收样本时检查盛装样品的试管有无破损或渗出的情况，如发现溢漏应立即将存留的样品移出，对被污染的试管、试管架和盛器均需作严格消毒。4、样品分离离心时可能喷射出气溶胶粒子，特别是在离心结束前的制动过程中以及在打开试管盖帽等时均可产生大量具有潜在感染性的气溶胶颗粒；玻璃离心管可因为破碎造成标本泄漏；离心管内标本盛装过满可造成泄漏。操作完毕后，所有的吸管、Tip吸头、含血球的试管等废弃物应置于规定的已含适当消毒液的容器内，进行焚烧。消毒应备有合适的消毒液，以随时清除溅出物及溢出物。5、样品检测HAV抗体筛查检测（1）手工操作：①加样、混匀用移液器将分离好的血清在生物安全柜内加样至酶联免疫吸附试验（ELISA）或其它试剂的反应孔中，小心混匀，尽可能避免气溶胶的产生，封盖后，用托盘平移至温箱孵育；②洗涤、溢出洗涤仪使用前应检查吸液针孔是否已阻塞，如发现阻塞应尽快疏通，在洗涤过程中要注意洗涤液不能溢出；每次洗涤完毕，用蒸馏水洗涤几次，以免洗液中的成分产生结晶而阻塞针孔，造成实验环境污染；吸入废液瓶中的液体，应按量加入适量的消毒剂，作用规定时间后处置；（2）自动化酶标仪检测:该仪器操作中存在有加样探针及洗涤的废液均应根据每次废液的量加入足够的消毒剂，作用规定的时间后处理。6.剩余样品处理如需保藏的血清或血浆样本，应设有专用冰箱、登记造册入档、专人保管。不需保藏的所有样本，按实验室废弃物处置。7.废弃物处置废弃物处置规范废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和《消毒技术规范》（2002年版）。废弃物处置从实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品（血球、血清等）、反应板、试剂阴阳性对照、ELISA标记物、试剂包装盒等，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器或生物废物袋中，经高压无害化处理后，密封容器或扎紧废物袋口，按环卫部门要求处置。记录废弃物的处理应做好记录。消毒效果监测可使用化学、生物指示带/剂法，每次高压灭菌需用化学指示带、每月用生物指示剂来监测灭菌效果。九、重组DNA操作和可能扩大的宿主范围目前，尚未见到对应的操作和文献资料。十、预防和治疗措施1.管理传染病：早期发现患者并予以隔离。隔离期自发病日算起共3周。患者隔离后对其住室及活动地方进行终末消毒。托幼机构发现甲型肝炎后，对密切接触者进行医学观察45日。

2.切断传播途径：加强水源、饮食、粪便管理。尤其要管理好甲型肝炎患者粪便，可控制甲型肝炎流行。对共用餐具、饮水器具均应消毒，实行分餐制。养成餐前便后洗手的良好习惯。

3.保护易感人群：对有与甲型肝炎密切接触的易感者，可用人血丙种球蛋白或人胎盘丙种球蛋白进行预防注射，用量为0.02～0.05ml/kg，以注射为好，在接触后2周以内。预防甲型肝炎流行的根本措施是广泛开展疫苗接种。国内应用人胚肺二倍体细胞培养，低温连续传代，获得HAVH2和和LA-1减毒疫苗株，并研制成减毒活疫苗，初步应用证明安全能诱导特异性抗体产生，但产量有限，成本较高。

甲型肝炎病情常呈自限性，预后良好，大多数(80%以上)在3个月内临床症状消失，肝功能恢复正常。6个月内完全治愈。无转为慢性肝炎的倾向，无甲肝病毒慢性携带者。极少出现重型肝炎。如无症状HBsAg携带者重叠甲肝感染，其临床表现及病程与单纯甲肝相似。但基础病为慢性乙肝或肝硬化则可能加重病情。甲肝病情一般不因妊娠而严重，也无母婴传播之忧，对胎儿无慢性影响。以适当休息、合理营养为主，选择性使用药物为辅。应忌酒、防止过劳及避免应用损肝药物。用药宜简不宜繁。

1.早期严格卧床休息最为重要，症状明显好转可逐渐增加活动量，以不感到疲劳为原则，治疗至症状消失，隔离期满，肝功能正常可出院。经1～3个月休息，逐步恢复工作。

2.饮食以合乎患者口味，易消化的清淡食物为宜。应含多种维生素，有足够的热量及适量的蛋白质，脂肪不宜限制过严。

3.如进食少或有呕吐者，应用10%葡萄糖液1000～1500ml加入维生素C3g、肝太乐400mg、普通胰岛素8～16U，静脉滴注，每日1次。也可加入能量合剂及10%氯化钾。热重者可用菌陈胃苓汤加减；湿热并重者用菌陈蒿汤和胃苓合方加减；肝气郁结者用逍遥散；脾虚湿困者用平胃散。有主张黄疸深者重用赤芍有效。一般急性肝炎可治愈。十一、人员安全状况评估制定和完善传达室染病实验室生物安全技术操作规范；加强可桶暴露于该菌污染的或潜在感染性材料的相关业务人员生物安全知识培训；切实落实各项管理制度；预防和控制实验室等渠道造成该菌的感染和传播，建立实验室工作人员可颖症状报告制度，并保证他们能及时被定点专科医院科室收治，以防止实验室感染扩散到社会。禁忌人群：从事实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下才能进入实验室进行工作，出现下列情况之一是不宜进入：患发热性疾病；感冒，上呼吸道感染或其他到致抵抗力下降的情况；妊娠，已经在实验室控制区域内连续工作4小时以上左其他原因造成的疲劳状态。实验室工作人员必须持有上岗证进行工作。十二、评估结论病原微生物分类分级依据按卫生部《可感染人间的病原微生物名录》（2006年）（简称《名录》），甲型肝炎病毒（HAV）列为危害程度第3类病原微生物。实验活动、实验室级别以及人逐步形成防护要求实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。安全设备正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。3.人员健康和素质要求实验人员上岗前必须接受严格的生物安全培以及该类病毒实验操作技术的全面培训.4.预防和治疗实施要求对有与甲型肝炎密切接触的易感者，可用人血丙种球蛋白或人胎盘丙种球蛋白进行预防注射，用量为0.02～0.05ml/kg，以注射为好，在接触后2周以内。预防甲型肝炎流行的根本措施是广泛开展疫苗接种。国内应用人胚肺二倍体细胞培养，低温连续传代，获得HAVH2和和LA-1减毒疫苗株，并研制成减毒活疫苗，初步应用证明安全能诱导特异性抗体产生，但产量有限，成本较高。国外对HAV灭活疫苗已批准广应用。国内对灭活疫苗及重组疫苗均进行了研究，在基因工程甲肝疫苗方面研制是今后发展的方向。1、被动免疫：甲肝免疫球蛋白2、主动免疫：甲型肝炎疫苗；甲肝减毒活疫苗（此类