食品中沙门氏菌检验

第一节沙门氏菌检验食品中肠道致病杆菌的检验1医学ppt

沙门氏菌（Salmonella）是肠杆菌科中最复杂的菌属,1880年Eberth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取名Salmon氏之名为本菌属属名。已发现近2000个血清型，我国已发现近200个血清型。对人类有致病性肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌食物中毒——鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌败血症——猪霍乱沙门菌最常见2医学ppt生物学性状形态染色符合肠杆菌特点，革兰氏染色阴性短杆菌，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛(周生毛菌)，有动力（也有无动力的变种）。鼠伤寒沙门菌（samonellatyphimurium）

3医学ppt沙门氏菌革兰氏染色照片4医学ppt5医学ppt6医学ppt培养特性EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）7医学ppt鼠伤寒沙门鼠伤寒沙门在SS培养基上形成半透明较小菌落8医学ppt在酸性条件下菌落中心产生H2S(SS培养基）9医学ppt生化反应乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多数H2S+，动力+，尿素（-）抗原结构O抗原——特异性低、稳定、分群（组）H抗原——特异性高，不稳定，分型Vi抗原（毒力抗原）——不稳定，可阻止“O”凝集抵抗力不强10医学ppt致病性与免疫性致病物质侵袭力菌毛——吸附Ⅲ型分泌系统——穿入细胞，扩散Vi抗原——微荚膜（抗吞噬）内毒素外毒素——个别（鼠伤寒沙门菌）产生，与ETEC肠毒素相似11医学ppt12医学ppt肠热症临床过程潜伏期2W发病初期：第1W（第一次菌血症）、高热、肝脾肿大、皮疹、WBS↓等全身中毒症状，此期血液（80%）、骨髓（90%（+）有大量细菌发病极期：第2-4W，全身症状持续加重，此期血、骨髓中仍有菌，但粪便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到细菌，由于Ⅳ型变态反应——并发症发生，血液抗体达到阳性标准——肥达反应恢复期：第四周末，体温下降，症状消失，恢复期带菌1年（粪便仍阳性），血液抗体仍高13医学ppt胃肠炎（食物中毒）

潜伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻败血症经口感染，经肠道入血，败血症症状明显而肠道症状不明显带菌者健康带菌者，恢复期带菌者免疫性肠热症，病后免疫牢固，其它可重复感染14医学ppt微生物学检查与防治分离培养与鉴定标本采取:肠热症：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，粪便、食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物败血症：血带菌者：粪便分离鉴定：

增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反应→血清鉴定15医学ppt血清学诊断——肥达反应（Widal）原理用已知伤寒沙门氏菌O抗原及H抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌H抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（TO、TH、PA、PB）方法：试管凝集法（定量）TO≥1：80，TH≥1：160，PA、PB均≥1：80才有意义动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义16医学ppt临床意义O抗体（IgM），H抗体（IgG）O、H抗体均升高，患伤寒的可能性大O、H抗体不升高，患伤寒的可能性小只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应，只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。17医学ppt沙门氏菌主要寄生在人体、哺乳动物和家禽的肠道内，可随同粪便的排泄污染水源，食品与药品。沙门氏菌的种类繁多，有些对人有致病力，如伤寒沙门菌和副伤寒沙门氏菌；有些对动物有致病力，如鸭沙门氏菌和雏沙门氏菌；尚有一些对人和动物皆有致病力，如肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌等。它们能引起人类伤寒症、急性胃肠炎和败血症等。带有这些细菌的人与动物常可直接或间接地污染药品的生产环境、工具设备和原料辅料，以及半成品和成品等。特别是用动物脏器制成的药品,污染机率较高，影响患者用药安全，并有可能通过药品的流通而传播。故将沙门氏菌，应列为某些药品的必检项目。18医学ppt（一）增菌培养：

取１∶１０供试品稀释液１０毫升，接种于备妥的１００毫升胆盐乳糖增菌液内。置３７°培养１８—２４小时，进行增菌。19医学ppt（二）分离培养：取上述增菌培养物，划线接种于ＳＳ琼脂和ＥＭＢ琼脂平板各一个（划线时，适当增加ＳＳ琼脂平板的涂抹量２-３环，可提高阳检率），置３７℃培养１８-２４小时。凡沙门氏菌，在ＳＳ和ＥＭＢ琼脂平板上，菌落一般无色透明或半透明，圆形，周边整齐，表面光滑湿润，在ＳＳ琼脂平板上中心有时呈黑褐色。如有上述疑似菌落，应选取２-３个分别进行纯培养，按下列方法鉴别。20医学ppt伤寒沙门菌在SS琼脂平板上的菌落特征21医学ppt伤寒沙门菌在CHROMagar显色培养基上的菌落特征22医学ppt伤寒沙门菌在CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落23医学ppt沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）24医学ppt沙门氏菌在BS平板上的典型菌落（产H2S菌株25医学ppt沙门氏菌在BS平板上的菌落（Salmonellatyphimurium）26医学ppt（三）初步鉴别：将上述纯培养物分别穿刺并划线接种三糖铁（ＴＳＩ）琼脂，置３７℃培养１８—２４小时。凡在ＴＳＩ琼脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈碱性，不变色），下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色（有气泡或无气泡），有动力或无动力，以及产生或不产生黑褐色的硫化氢反应，并经涂

片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，都应继续做生化试验和血清学检查。27医学ppt沙门氏菌三糖铁28医学ppt沙门氏菌革兰氏染色照片29医学ppt（四）生化试验：

取上述疑似菌落的纯培养物、分别接种至葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等发酵管培养基，并接种蛋白胨水和尿素培养基，经３７℃培养２-５天，观察结果。沙门氏菌一般生化反应和动力检查，绝大数应为、葡萄糖＋，乳糖－，麦芽糖＋，甘露醇＋，蔗糖－，靛基质－，硫化氢＋，尿素酶－，动力＋。当一般生化试验符合时，应做赖氨酸脱羧酶及氰化钾试验。沙门氏菌赖氨酸脱羧酶试验＋，氰化钾－。30医学ppt沙门氏菌氨基酸脱羧酶31医学ppt沙门氏菌蛋白胨水32医学ppt尿素琼脂实验出现异常,原因可能是沙门氏菌变种33医学ppt(五）动力试验：

取上述纯培养物穿刺接种半固体培养基，于３７℃培养２４小时后，观察动力表现。无动力表现的培养物，应在室温（２５°左右）保留２-３天后，再观察。3