DB14∕T 2016-2020 党参组培苗生产技术规程

ICS65.020.20DB14山西省市场监督管理局发布IDB14/T2016—2020前言 II 12规范性引用文件 13术语和定义 14设施设备 15生产流程 16环境消毒 17组培苗生产 28炼苗及移栽 39生产档案 4附录A（资料性附录）培养基配制 5附录B（资料性附录）MS培养基配方 6DB14/T2016—2020本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。本标准由山西省农业标准化委员会归口。本标准起草单位：山西省医药与生命科学研究院、平顺县水果蚕桑开发服务中心。本标准主要起草人：李香串、吕鼎豪、王金金、张豆豆、康敏、李晓敏、曲继旭、张文静、董晓丽、刘辉见、陈素萍、秦金山、王金娥。1DB14/T2016—2020党参组培苗生产技术规程本标准规定了党参组培苗生产的术语和定义、设施设备、生产流程、环境消毒、组培苗生产、炼苗及移栽、生产档案。本标准适用于党参组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T29375马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程GB50073洁净厂房设计规范3术语和定义下列术语和定义适合于本文件。3.1党参组培苗以桔梗科党参属植物党参[Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.]的上胚轴为外植体，通过植物组织培养技术获得的种苗。4设施设备4.1生产环境设施和卫生应符合GB/T29375、GB50073的规定。4.2应有完善的组培、炼苗设施设备。5生产流程选种→消毒→育苗→愈伤组织培养→继代培养→分化培养→生根培养→炼苗→移栽6环境消毒6.1接种室、培养室应保持卫生，定期消毒，每周至少消毒1次。按照40%甲醛和高锰酸钾2:1的比例，将10ml40%的甲醛溶液倒入高锰酸钾含量为5g的容器内，进行密闭熏蒸，1d后通风。2DB14/T2016—20206.2每次使用超净工作台前，应提前20min打开紫外灯。接种时关闭紫外灯打开风机，超净工作台面及内壁用75%乙醇擦拭消毒。6.3操作使用的所有工具，应提前灭菌。镊子、剪刀、解剖刀等工具，每次使用前接触植物材料的部分应灼烧消毒或插入紫外消毒器，避免交叉污染。6.4发现污染及时清除。7组培苗生产7.1选种选择粒大饱满成熟的党参种子。7.2消毒用自来水流动冲洗种子表面尘埃，再用饱和漂白粉水溶液漂洗15min。在超净工作台中，将漂洗后的种子放入10%次氯酸钠溶液中浸泡消毒15min~20min，无菌水冲洗3次，再用无菌滤纸吸干种子表面水分。7.3育苗7.3.1接种在无菌条件下将消毒后的种子接种于MS+水解乳蛋白500g/L培养基上，培养基配制见附录A。7.3.2培养在25℃~30℃,光照强度2000lx，光照时间8h/d~10h/d的无菌条件下培养10d获得幼苗。7.4愈伤组织培养7.4.1接种在无菌条件下将种子出芽后的上胚轴切成0.1cm~0.3cm的小段，接种于MS+2,4-D1.5mg/L+玉米素1.0mg/L培养基上，培养基配制见附录A。7.4.2培养在25℃~30℃的无菌条件下暗培养10d~15d，可诱导出愈伤组织。7.5继代培养7.5.1接种在无菌条件下将分取后的愈伤组织接种于MS+2,4-D1.5mg/L+玉米素1.0mg/L培养基上，培养基配制见附录A。7.5.2培养在25℃~30℃的无菌条件下暗培养。继代周期为30d~35d，连续继代繁殖应控制在10代以内。7.6分化培养3DB14/T2016—20207.6.1接种在无菌条件下选择生长健康的愈伤组织，接种于MS+KT0.5mg/L+玉米素0.5mg/L+NAA0.1mg/L+IAA0.1mg/L培养基上，培养基配制见附录A。7.6.2培养在25℃~30℃,光照强度2000lx，光照时间8h/d~10h/d的无菌条件下培养15d~20d后获得不定芽。7.7生根培养7.7.1接种在无菌条件下，挑选生长健壮的单芽接种于1/2MS+IBA0.1mg/L培养基上，培养基配制见附录A。7.7.2培养在25℃~30℃,光照强度2000lx，光照时间8h/d~10h/d的无菌条件下培养15d，获得具根、茎、叶的组培苗。8炼苗及移栽8.1炼苗8.1.1封口炼苗每年4月~5月期间，当组培苗根系长度≥3.0cm时，将瓶苗移至炼苗棚，封口炼苗5d~10d。8.1.2开口炼苗拧开培养瓶瓶盖炼苗1d~2d，期间应注意防雨水。8.2基质选择微生物少、透气性好、保水能力较强的育苗土为基质，移栽前用多菌灵消毒，按照农药标签使8.3移栽取出组培苗，在清水中洗净根部培养基，晾干后移栽至浇透水的育苗基质中。8.4管理组培苗移栽后5d~10d，按照农药标签配制甲基托布津溶液，喷雾2次~3次。移栽15d后，根据小苗长势，降低棚内温度，减少喷水次数，使小苗适应外部环境。定期检查，及时剔除死苗、病株。8.5出圃根长≥15cm，根直径≥3mm，生长健壮，外观形态正常，未发生检疫病虫害的种苗可以出圃。9生产档案4DB14/T2016—2020组培苗生产过程要进行详细的记录，建立党参组培育苗生产档案。5DB14/T2016—2020（资料性附录）培养基配制A.1MS培养基母液配制MS培养基母液的标准成分配制见附录B。配制好的母液应于4℃条件下避光保存，保存期不超过60d，发现沉淀或浑浊时应立即停止使用。母液容器上应标注名称、浓度、配制日期和配制人。A.2植物生长调节剂母液配制一般将植物生长调节剂配制成浓度1mg/ml的母液，于4℃条件下避光保存，保存期不超过60d，发现沉淀或浑浊时应立即停止使用。母液容器上应标注名称、浓度、配制日期和配制人。A.3培养基制备根据培养基制备量，依次量取适量母液混匀，再加入植物生长调节剂和蔗糖，待糖溶解后加入琼脂，最后加水定容，加热使琼脂溶解，并用0.1mol/L的HCl或0.1mol/L的NaOH调节PH值至5.8。分装于试管或三角瓶等容器中，每瓶10ml~30ml，用封口膜或瓶盖封口，于121℃条件下高压蒸汽灭菌20min，灭菌后置于