DB32T 3306-2017 蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程　

65.020.2065.020.20B61B61备案号：56880-2017备案号：56880-2017DB32ICSICSTechniqueTechniqueregulationfortheVirus-freeplantletproductionofBlueberry江苏省质量技术监督局IDB32/T3306—2017本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写》给出的规则编写。本标准由江苏农林职业技术学院提出并归口。本标准由江苏农林职业技术学院起草。本标准主要起草人：王永平、宗树斌、刘玉华、许建民、王珊、任焕焕。1DB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则3脱毒3.1母株选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。3.2热处理钝化病毒取母株的侧枝嫩梢，放入病毒钝化处理器，60℃热击10s。4外植体消毒将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯，纱布封口，自来水冲洗30min～60min，用75%乙醇浸润130s后，用无菌水洗净，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。5初代培养5.1初代培养基WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。5.2接种在超净工作台上，用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm～2.0cm的小段，每段含1芽～2芽，接种于初代培养基中，每瓶5株～10株。注明品种、编号和接种日期。5.3培养条件2DB32/T3306—2017温度25℃±2℃、光照强度2000lx～3000lx、光照时间16h/d，培养100d～120d。6病毒检测抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒(BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV)、蓝莓鞋带病毒(BSSV)、蓝莓红环斑病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。7继代培养7.1继代培养基WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。7.2培养条件温度为25℃±2℃,光照强度1000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d。60d～90d培养一代，培养不超过15代。8壮苗培养8.1壮苗培养基WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。8.2培养条件温度为25℃±2℃,光照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d～16h/d。培养90d～120d。9驯化生根9.1生根设施在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安装喷灌设备，苗床上面铺一层无纺布，拱棚上面覆盖塑料薄膜，上盖遮阳网。9.2基质选用苔藓作为专用基质，浸泡12h甩干，湿度控制在40%～60%，塞进5×10的穴盘内。9.3炼苗将培养瓶放入温室内，上盖一层遮阳网，封口炼苗7d,然后打开遮阳网，把瓶盖拧松，再炼苗7d。9.4扦插选择生长健壮、长度5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插，先用清水清洗掉培养基，剪去根部膨大部分，去掉下部三分之一的叶片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用镊子捏住插穗基部，插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株，插入的深度为2cm～3cm。3DB32/T3306—20179.5插后管理插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次～3次，相对湿度控制在80%～100%，15d后开始生根并长出新叶，每天喷水1次，湿度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜，湿度控制在60%左右。温度控制在20℃~30℃。10.1栽培容器选用13×12黑色软质营养钵为宜。10.2栽培基质壤土、草碳土、腐锯末按3:1:1的体积比例混合，加入硫磺粉均匀混拌。1m3基质使用硫磺粉0.75kg~1kg将基质pH值调至4.5～5.5。10.3上钵时间须根长至3cm，苗高超过10cm时进行上钵移植。10.4上钵移植先装填基质至营养钵的1/3处，然后把苗从穴盘内取出放到营养钵的中央扶正，再把四周填满基质，稍用力压紧，使基质低于营养钵上沿2CM～3cm。每钵一株，浇透水。11苗期管理11.1温湿度管理白天温度25℃~30℃,夜间不低于13℃,基质温度不低于15℃,基质含水量在50%～60%。11.2水肥管理缓苗期保持基质湿润；速生期应量多次少，见干见湿；生长后期要控制浇水。速生期以氮肥为主，磷、钾肥为辅；生长后期停止使用氮肥，适当增加磷、钾肥。追肥结合浇水进行，浓度控制在0.1%~0.2%。速生期每月施3次。11.3病虫害防治贯彻预防为主，综合防治的方针，选用生物农药、高效、低毒、低残留的化学农药，交替用药，改进施药技术，降低农药用量，化学农药按GB/T8321的规