医学教材 艾滋梅毒丙肝检测

梅毒、丙肝及艾滋病临床实验检测策略

梅毒、丙型病毒性肝炎、艾滋病菌为法定传染性疾病一、丙肝实验检测存在的问题Alberti,JHepatol1999;31:17-24Seef,Hepatology2002;36:S35-46Fanetal,WorldJGastroenterol2004;10:2867-2869感染后20年HCV感染患者比例100%慢性丙肝患者比例85%肝硬化患者比例10-50%肝癌患者比例1-23%丙肝相关死亡率患者比例4-15%在全球，丙肝是死亡率第十的传染性疾病在中国，丙肝是死亡率第五的传染性疾病丙肝：高危害丙肝：无预防性疫苗，但可治愈丙肝疾病将是中国的沉重经济负担:1170-2160亿元/年乙型肝炎疫苗的推广，新感染病例显著下降；由于丙型肝炎缺乏有效的预防性疫苗，有可能成为影响人民健康的主要肝脏疾病我国首部《丙肝防治指南》所指出的，通过聚乙二醇干扰素+利巴韦林，使用足够剂量治疗一年，丙肝的治愈率可以达到七、八成左右，这也是目前国际上丙肝治疗的最佳方案。GhanyM,etal.Hepatology2009;49:1335–74卫生部2009年度全国法定传染病疫情丙肝报告病例逐年上升2009年报告的发病人数是2003年的6倍多!中国丙肝临床早期筛查亟待加强中国疾病预防控制中心公共卫生监测与信息服务中心，施小明,等.疾病监测2006;21:493.185/358465/1826100/432数据源自国内30个省(自治区、直辖市)共250家医疗机构，采样15501例，有效样本13714例丙肝是中国漏报率最高的法定传染病HCV抗体的检测是评估HCV感染的初筛手段。绝大多数实验室只通过简单的筛查实验就报告阳性结果主要原因包括：不了解筛查和确认实验的性能及结果的意义；确认实验的高成本。二、HIV实验检测存在的问题1985年以来，HIV检测技术取得了长足的进展针对多种检测目标（HIV抗体、HIV-1P24抗原、HIV-RNA、HIV前病毒DNA）针对多种检测标本（血清/血浆，唾液、尿液、干血斑）使用多种检测模式（ELISA、WB、快速法、各种核酸扩增方法）多种检测用途（病原学诊断、检测病程和疗效、监测病毒变异）HIV检测面临的主要挑战病毒自身的特点：高度变异、窗口期防治工作需要：发病率监测、降低成本/简化样本采集和检测方法，提高方法的适用性针对新问题，建立新方法（自然感染与疫苗应答、新药物的应用）三、梅毒实验检测存在的问题（一期和二期梅毒更加真实反映梅毒疫情趋势）全国梅毒流行状况梅毒的诊断梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。四、HIV的临床检测策略起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心使用范围：全国所有的HIV检测实验室解释权：中国疾病预防控制中心实施：卫生部授权，中国疾病预防控制中心发布实施《全国艾滋病检测技术规范》共分九章样品的采集和处理HIV抗体检测HIV-1抗原检测HIV核酸检测HIV-1耐药检测CD4+和CD8+T淋巴细胞检测HIV-1的分离培养实验室生物安全艾滋病检测实验室的质量管理HIV抗体检测的目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的：为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的：为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。以监测为目的：为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。HIV抗体检测的要点根据目的选择检测方法及检测策略。严格遵守实验室SOP。筛查试验阳性，须作确证试验。筛查试验阴性，不应做确证试验。筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。以诊断为目的的检测策略常规HIV抗体检测的方法和程序分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。ELISA、化学发光或免疫荧光试验、快速检测（RT）及其它检测试验。样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性HIV抗体筛查检测流程筛查试验结果的报告HIV抗体筛查试验阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第2份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。五、梅毒的临床检测策略梅毒的诊断梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。梅毒的实验室检测方法病原学检测：

（1）暗视野显微镜检查（2）镀银染色检查血清学检测：

非梅毒螺旋体抗原血清试验

（1）VDRL(性病研究实验室试验)：需灭活（2）USR（不加热血清反应素试验）（3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验)（4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)

梅毒螺旋体抗原血清试验（1）FTA-ABS（2）TPPA/TPHA（3）TP-ELISA（4）发光法（5）胶体金法

病原学检测主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法，对皮损部位组织液或淋巴结穿刺液，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，快速、方便、易操作。是诊断早期现症梅毒的最佳方法。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，梅毒血清学检测分类两类方法(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒试验）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒试验）非梅毒螺旋体抗原血清学试验宿主对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。未经治疗反应素可长期存在。正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性方法包括：

VDRL→USR→RPR/TRUST

（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。抗原基本成分一样，敏感性和特异性相似RPR/TRUST非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义抗类脂抗原的抗体，可长期存在于未经治疗的梅毒患者体内，可作为区分既往感染和现症感染的诊断参考依据经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。可以在非梅毒患者（如自身免疫性疾病患者等）体内检测到，所以非梅毒螺旋体血清试验阳性者需经梅毒螺旋体血清试验进一步复检，排除其假阳性。

RPR、TRUST和VDRL的原理及敏感性、特异性基本相同，临床上可以选用其中任何一种方法，但对患者进行疗效观察时应采用同一种检测方法做定量检测。非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清反应假阳性。①技术性假阳性反应由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。经过重复试验即可除外。②生物学假阳性反应是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性，但一般滴度不大于1:8。应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。风疹、水痘、传染性单核细胞增多症、传染性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、病毒性肺炎、牛痘疹、系统性红斑狼疮、自家免疫性溶血性贫血、盘状红斑狼疮、结节性多动脉炎、类风湿性关节炎、桥本氏甲状腺炎、风湿性心脏病、干燥综合征、毒品瘾者、慢性肾炎、肝硬化、老年、妊娠

梅毒螺旋体抗原血清学试验方法检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）………梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验，它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。试验特异性强。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。如系统性红斑狼疮、传染性单核细胞增多症、麻风。阳性反应不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果和临床表现进行诊断。TPPA试验可作为梅毒螺旋体血清试验的的参照“金标准”。梅毒血清学试验结果的临床意义总汇

RPRTPPATRUSTTP-ELISA临床意义VDRLTP-RT

_

_排除梅毒

（一期梅毒的早期）

+

+现症梅毒

(梅毒孕妇所生的婴儿除外)

+ -生物学假阳性-+早期梅毒经治疗后

（早早期梅毒）

梅毒实验室检测策略思考方法选择依据敏感性、特异性（试剂评估）操作流程（可及性）试剂的价格、结果时间（可接收性）37？初筛目的和方法选择近年来我国严峻的梅毒流行形势卫生部出台梅毒10年控制规划梅毒实验室检测技术规范梅毒实验室检测不规范现状梅毒血清学检测新方法、新技术的应用性评估《梅毒实验室检测技术规范》起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心使用范围：全国所有的梅毒检测实验室解释权：中国疾病预防控制中心实施：卫生部授权，中国疾病预防控制中心发布实施全国梅毒检测技术规范40第一章样品的采集和处理第二章梅毒血清学检测 第三章梅毒病原体显微镜检测 第四章梅毒病原体核酸检测 第五章梅毒检测实验室生物安全 第六章梅毒实验室检测质量管理梅毒抗体检测目的:以临床诊断为目的：为梅毒诊断和疗效判断提供依据。以血液筛查为目的：防止输血传播梅毒,保证血液安全。以流行病学监测为目的：了解人群的梅毒血清流行率重点人群筛查：发现梅毒感染者，并通过进一步有效的转诊与治疗，控制传染源、减少和阻止梅毒传播

42非梅毒螺旋体抗原血清试验

快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)

甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）

性病研究实验室试验(VDRL)梅毒螺旋体抗原血清试验

梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)

梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)

梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）

梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)

荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）

化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）梅毒实验室检测策略选择策略一采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛策略二采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛1.根据目的选择检测方法及检测策略。2.可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验3.需具备非梅毒螺旋体血清试验和梅毒螺旋体血清试验两类血清学检测方法才能为临床梅毒诊断提供有参考意义的实验室依据临床诊断检测策略一非梅毒螺旋体抗原血清学试验（以RPR为例）阴性报告RPR阴性阳性梅毒螺旋体抗原血清学试验（以TPPA为例）阴性报告RPR阳性TPPA阴性阳性报告RPR阳性及滴度TPPA阳性RPR定量试验临床诊断检测策略二梅毒螺旋体血清试验（以ELISA为例）阴性报告：ELISA阴性阳性RPR定性/定量试验阴性推荐TPPA复检阳性报告：ELISA阳性RPR阳性及滴度阴性报告：ELISA阳性TPPA阳性RPR阴性报告：ELISA阳性TPPA阴性RPR阴性报告：ELISA阳性RPR阴性阳性

策略一和策略二比较45策略一：非梅毒螺旋体抗原血清试验策略二：梅毒螺旋体抗原血清试验简便、经济简便、快速、大样本、经济早期发现六、丙肝的检测策略《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心使用范围：全国所有的丙型肝炎病毒检测实验室解释权：中国疾病预防控制中心实施：卫生部授权，中国疾病预防控制中心发布实施共分九章：丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒抗体检测丙型肝炎病毒抗原检测丙型肝炎病毒核酸检测丙型肝炎病毒基因型检测实验样品的采集、保存、运输丙型肝炎病毒检测实验室的室内质量控制及能力验证实验室生物安全HCV抗体检测的目的：临床诊断：确定个体HCV感染状况血液筛查：放置输血传播HCV，版块献血员筛查和原料血浆筛查流行病监测：了解不同人群HCV感染率及变化趋势在临床诊断中规定了HCV抗体筛查阳性反应后必须进行补充实验（免疫印迹或NAT）在临床诊断中引入S/CO比值的使用明确了丙肝检测实验室质量控制HCV抗体的检测方法筛查试验：

酶联免疫吸附试验，胶体金快速试验、化学发光试验、免疫荧光试验补充实验：

免疫印迹试验临床诊断相关的监测策略和结果报告1.筛查试验呈阳性反应，不能出具阳性报告，必须进入复检程序，用原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂进行复检

筛查试剂样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂报告阴性丙肝病毒临床诊断筛查检测流程复检阳性样品阳性反应