DB22T 2972-2019 羊泰勒虫病病原检测 PCR法　　

DB22DB22/T2972—2019羊泰勒虫病病原检测PCR法PCRassayfordetectionoftheileriaovis2019-05-27发布2019-06-17实施吉林省市场监督管理厅发布I1GB/T6682分析实验室用水规过人工合成的特异性寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链，再利用反应4.1.3dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP浓度2.5mmol/24.2.3Eppendorf管（14.4仪器设备4.4.3PCR扩增仪，温度范围为4℃~100℃。4.4.6微波炉或恒温水浴锅，室温～在PCR反应管（4.2.4）中依次加入反应试剂，PCR扩增体系为25µL，见表2。混匀后置PCR扩增仪3分别与5µL的待检绵羊血液基因组DNA样品、阴性对照（4.1.9）、阳性对照（4.1.10）和空白对照（4.1.11）的PCR产物混匀后，按编号加入到1%琼脂糖凝胶板的加样孔中，凝胶的边孔中加标准阳性对照出现671bp的DNA扩增条带，标准阴性对照和空白对照无此扩增条带，反应结果成在阴性对照、阳性对照和空白对照成立条件下，若待检样品出现671bp的DNA扩增条带，判为阳4A.1.2TAE缓冲液（50×)的配制见表A.2。表A.2TAE缓冲液（50×)配制5A.3.2将三角瓶（4.2.5）放在沸水浴或微波炉（4.4.5）中加热至琼脂糖充分溶解（注意用微波炉加），6MTGATGAGTTGATGTATTGTGGCTTATTTCGGATGATACTTGTATTATCCGGATGATTACTTTGAGAAAATTAGAGTGCTCAAAGCAGGCTTTTGCCTTGAATAGTTTAGCATGGAATAATAAAGTAGGACTTTGGTTCTATTTTGTTGGTTTTAGGTACCAAAGTAATGGTTAATAGGAACAGTTGGGGGCATTCGTATTTAACTGTCAGAGGTGAAATTCTTAGATTTGTTAAAGACGAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGGATCAGATACCGTCGTAGTCCTAACCATAAACTATGCCGACTAGAGATTGGAGGTCGTCAGTTTTTACGACTCCTTCAGCACCTTGAGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGCGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACAAAGGAAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGATTCTTTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGGATGCGGG