《功效型牙膏》规范

1QB/T2966—XXXX功效型牙膏本文件规定了功效型牙膏的原料、微生物、理化指标、安全性、功效评价、包装外观、净含量等要求，描述了相应的试验方法，规定了检测规则和标志的内容。本文件适用于功效型牙膏的原料的生产、检验和销售。执行本文件的牙膏首先符合GB/T8372的要2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB6819—2004溶解乙炔GB/T8372牙膏GB/T15337原子吸收光谱分析法通则GB/T42763口腔清洁护理用品安全评估指南JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则《定量包装商品计量监督管理办法》国家市场监督管理总局令第70号《牙膏监督管理办法》国家市场监督管理总局令第71号《牙膏备案资料管理规定》国家药品监督管理局公告（2023年第148号）《化妆品安全技术规范》国家药品监督管理局公告（2015年第268号）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1功效型牙膏functionaltoothpastes添加功效成分，除具有牙膏基础清洁之外，兼具有去除外源性色斑（美白牙齿）、抗牙石、抗口臭、防龋、抑制牙菌斑、抗牙本质敏感、减轻牙龈问题，以及符合牙膏功效宣称范围其他功效的牙膏。注：基础清洁指清洁口腔、减轻牙渍、减少软垢、洁白牙齿、减少牙菌斑、清新口气、清爽口感等能够通过视觉、3.2人体功效评价试验clinicalefficacystudy按照规定的方法和程序，通过人体试验结果的主观评估、客观测量和统计分析等方式，对产品功效宣称作出客观评价结论的过程。2QB/T2966—XXXX3.3消费者使用测试consumertesting在客观和科学方法基础上，对消费者的产品使用情况和功效评价信息进行有效收集、整理和分析的过程。3.4实验室试验laboratorymethod在特定环境条件下，按照规定方法和程序进行的试验，包括但不限于动物试验、体外试验（包括离体器官、组织、细胞、微生物、理化试验）等。4要求4.1原料生产功效型牙膏所使用的原料应符合国家市场监督管理总局令第71号《牙膏监督管理办法》的规定。4.2微生物和理化指标按GB/T8372的规定执行。4.3安全性进行人体功效评价和消费者使用测试前，应当遵守伦理学原则要求，在质量安全责任单位完成产品安全评估的基础上进行，所有受试者（或消费者）应当签署知情同意书后方可开展试验。4.4功效评价4.4.1基本原则功效宣称应当有充分的科学依据，有功效作用评价资料做支撑。4.4.2功效成分功效成分应进行定性或定量测定。产品使用的功效成分尚未建立测定方法的，应采用其他质量控制措施保障产品的功效性。4.5包装外观按GB/T8372的规定执行。4.6净含量应符合国家市场监督管理总局令第70号《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。5试验方法5.1一般规定除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的一级水。本文件中滴定分析用标准溶液、试验方法中所用制剂及制品，除特殊外，均按GB/T601、GB/T603的规定制备。3QB/T2966—XXXX5.2微生物和理化指标按GB/T8372或《化妆品安全技术规范》的规定执行。5.3安全性产品安全评估应当自行或者委托专业机构按照《牙膏备案资料管理规定》、GB/T42763，或其他相关规定进行。5.4功效评价牙膏产品功效评价方法一般分为人体功效评价试验、消费者使用测试和实验室试验。a)人体功效评价试验应该根据相应的国家法律、法规和行业标准，在符合国家规定已备案药物临床试验机构（或医疗器械临床试验机构）的三级口腔医院或三级甲等医院口腔科进行。b)消费者使用测试应包括测试依据、测试目的及原理、测试产品信息、测试前准备、测试方法、试验结果及结论和不良反应等内容。c)实验室试验应包括实验体系、样本量、结果及结论、方法适用性及局限性等相关信息，需说明检测项目判定为有效的依据，并简述检测项目与功效宣称之间的关联性。d)对于通过添加氟化物达到防龋功效，且含氟量达到GB/T8372要求的，可免于对防龋功效进行评价。相同责任主体的牙膏产品，使用经验证可发挥功效作用的相同功效成分，且配方浓度不低于已备案产品，宣称具有防龋、抑牙菌斑、抗牙本质敏感、减轻牙龈问题等相同功效的，可免于功效评价。e)宣称原料的功效作用，可开展文献资料调研、研究数据分析、评价试验等，以证实原料具有所宣称的功效，且原料的功效宣称应当与产品的功效宣称具有充分的关联性，如在产品功效宣称依据的摘要中阐明该原料所发挥的具体作用。5.5功效成分企业可按照本文件附录A、附录B、附录C、附录D、附录E、附录F所述测定方法或经过方法学验证的其他方法对功效成分进行检测。完整的测试方法一般包括：a)试剂与标准物质。b)仪器。c)分析步骤。d)结果计算。e)检出限和定量限。f)回收率和精密度。g)允许差。5.6净含量按JJF1070的规定执行。6检验规则和标志微生物和理化指标、净含量检验和标志按GB/T8372的规定执行。4QB/T2966—XXXX游离氟或可溶氟含量的测定游离氟或可溶氟含量，按GB/T8372或《化妆品安全技术规范》规定的方法进行测定。5QB/T2966—XXXX丹皮酚含量的测定B.1原理试样经甲醇超声提取，离心过滤后，用高效液相色谱仪测定丹皮酚含量，通过峰面积外标法定量计B.2仪器高效液相色谱分析仪。B.3标准溶液配制B.3.1丹皮酚(CASNO:552-41-0)标准品：有证书的标准品，纯度均不小于95%。B.3.2甲醇：HPLC色谱纯。B.3.3标准品溶液的制备精密称取一定量的丹皮酚标准品，于容量瓶中，加甲醇溶解制成丹皮酚标准储备溶液。采取逐级用甲醇稀释方式，配制成2μg/mL～40μg/mL系列标准溶液。B.3.4样品溶液的制备称取样品0.2g（精确至0.0001g于具塞比色管中，准确加入甲醇10mL，用玻璃棒搅散牙膏样品，超声波提取30min，静置，倾取上清液于离心管中，以不小于2000r/min的转速离心5min，用0.45μm滤膜过滤，即得。B.4色谱条件色谱条件如下：a)色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。b)流动相：甲醇:水（73:27体积比）。c)流速：1mL/min。d)检测器：紫外检测器波长274nm。e)柱温：40℃B.5分析步骤B.5.1.1对照品溶液准确吸取上述丹皮酚标准溶液10μL注入色谱仪，根据每一标准溶液所测得的峰面积绘制校正曲线，以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程，曲线线性要求0.999以上。B.5.1.2样品溶液准确吸取上述样品溶液10μL注入色谱仪，以峰面积外标法定量计算。B.6精密度和准确度测定相对标准偏差应小于5%，回收率范围应在95%～105%。6QB/T2966—XXXX钾含量的测定C.1原理样品经处理，使钾以离子状态存在于溶液中，样品溶液中钾离子被原子化后，基态原子吸收来自钾空心阴极灯的共振线，其吸光度与样品中钾的含量成正比。在其他条件不变的情况下，根据测量被吸收后的谱线强度与标准系列溶液比较进行定量。方法1适用于钾含量的添加范围应不高于1.55%（以硝酸钾计，不高于4%）的牙膏产品；方法2适用于钾含量的添加范围应不低于0.50%（以硝酸钾计，不低于1.29%）的牙膏产品。C.2试剂C.2.1除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。C.2.2氢氟酸。C.2.3硝酸。C.2.4溶解乙炔：满足GB6819—2004要求。C.2.5钾标准溶液：1000μg/mL。C.2.6氯化铯。C.2.7氯化铯溶液：称取5g氯化铯（C.2.6用水溶解转移至500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，备用。此溶液在室温下有效期为1个月。C.2.8钾标准工作液（方法1准确吸取10.0mL钾标准溶液（C.2.5至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成100μg/mL的钾标准贮备液。分别取钾标准贮备液0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL的钾标准工作溶液。C.2.9钾标准工作液（方法2精确量取钾标准溶液（C.2.5）0mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL的钾离子标准溶液至100mL容量瓶中，分别移入10mL氯化铯溶液和5mL硝酸于每个容量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，配制浓度为0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL的标准工作溶液。C.3仪器C.3.1原子吸收分光光度计：方法1的检测波长766.5nm；方法2的检测波长404.4nm。C.3.2钾空心阴极灯。C.3.3分析天平：感量为0.1mg。C.3.4加热板：输出温度范围0℃~500℃。C.3.5离心机：最高转速不小于6000r/min。C.4分析步骤C.4.1样品溶液的制备C.4.1.1方法17QB/T2966—XXXX任取试样牙膏1支，弃去头部约20mm膏体，称取试样0.2g～0.3g（精确到0.0001g置于聚四氟乙烯溶样杯中，同时做空白试验。加入硝酸（C.2.3）5mL，由低温（80℃)至高温（180℃)加热消解，移去热源。冷却至室温后定量转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，备用。（若试样溶液浑浊，离心沉淀后可取上清液进行测定）C.4.1.2方法2称取样品1g（先挤去大约20mm），精确到0.0001g，置于聚四氟乙烯溶样杯中，同时做空白试验。在通风橱中小心加入5mL硝酸（C.2.3）。于沸水浴（或相当温度条件下）消解20min，经常摇动，最后加热至棕黄色蒸汽挥发完全。冷却至室温，将溶液转移至100mL容量瓶中，用水洗涤，合并洗液。移入10mL氯化铯溶液（C.2.9），加水定容至刻度，混匀。取适量溶液于6000r/min下离心15min，取上清液过滤待测。C.4.2仪器条件仪器测定条件按照GB/T15337原子吸收光谱分析法通则进行仪器条件优化。C.4.3标准曲线的绘制待仪器稳定后，按浓度由低至高依次测定标准系列工作溶液，绘制标准工作曲线，线性相关系数应不小于0.99。C.4.4样品的测定按照优化的仪器条件测定空白溶液和试样溶液的吸光度。以两者吸光度之差在标准工作曲线上查出对应试样溶液中钾的浓度，进而计算出牙膏试样中钾的含量。如果待测试样溶液中钾的浓度超出标准曲线的线性范围，则根据钾的含量适当稀释待测试样溶液。C.5结果计算试样中钾的含量C（以硝酸钾计）按公式（C.1）计算：w=×100%············································(C.1)式中：ω——试样中钾的含量（以硝酸钾计），单位为质量百分数（%）；ρk——测得试样溶液中钾的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL）；V——试样的定容体积，单位为毫升（mLd——试样溶液的稀释倍数；m——试样的质量，单位为克（g101.1——硝酸钾的分子量；39.1——钾的原子量。C.6允许差在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。QB/T2966—XXXX（资料性）三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量的测定D.1原理试样经90%甲醇水提取后，过滤后经高效液相色谱质谱联用仪测定三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量，以保留时间和离子对比例定性，外标法定量。取样量为0.5g时，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的方法检出限为0.04μg/g，方法定量限为0.10μg/g；三七皂苷R1和人参皂苷Re的方法检出限为0.02μg/g，方法定量限为0.05μg/g。D.2试剂和材料D.2.1除另有规定外，本方法用水均为GB/T6682中规定的一级水。D.2.2标准品：有证书的标准品，纯度均不小于95%。三七皂苷R1（CASNO.：80418-24-2）、人参皂苷Rg1（CASNO.：22427-39-0）、人参皂苷Rb1（CASNO.：41753-43-9）、人参皂苷Re（CASNO.：52286-D.2.3甲醇：色谱纯。D.2.4乙腈：色谱纯。D.2.5甲酸：分析纯。D.2.6醋酸铵：分析纯。D.2.7甲醇水溶液（90%，v/v准确量取900mL甲醇（D.2.3）至1000mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀。D.2.8乙酸铵水溶液（10mmol/L，含0.1%甲酸准确称取0.7708g乙酸铵，于烧杯中用1L纯水溶解，准确量取1mL甲酸（D.2.5）至烧杯中，混匀。D.2.9标准储备溶液（1000mg/L分别称取适量各标准品（D.2.2）约10mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（D.2.3）定容至刻度，混匀。D.2.10混合标准工作溶液：用甲醇（D.2.3）将标准储备溶液（D.2.9）分别配成一系列浓度5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL的标准工作溶液。D.2.11石英砂：25~150目。D.2.12微孔滤膜：孔径0.22μm，材质为尼龙。D.3仪器D.3.1液相色谱色谱/串联质谱仪（LC-MS/MS配电喷雾离子源（ESI）。D.3.2分析天平：感量为0.1mg。D.3.3涡旋振荡器：振荡速度不小于1500r/min。D.3.4超声波清洗器：功率不低于250W。D.4测定步骤89QB/T2966—XXXXD.4.1试样制备将牙膏试样挤去20mm后，准确称取试样0.5g（精确到0.001g）于10mL具塞比色管中，加入约0.5g石英砂（D.2.11混匀，再准确加入90%甲醇水（D.2.7）10mL，涡旋混匀后超声提取20min，放置冷却后经0.22µm滤膜（D.2.12）过滤，待测。D.4.2色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱，100mm×3mm，2.6μm，或柱效相当者。b)流动相：A：10mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（D.2.7），B：乙腈，梯度洗脱，梯度洗脱程序见表D.1。c)柱温：35℃。d)进样体积：5μL。表D.1液相色谱梯度洗脱程序%%038D.4.3质谱条件质谱参考条件如下：a)电离方式：电喷雾电离，负离子模式。b）喷雾压力（IS）-4500.0V。c）干燥器压力：50Psi。d）气帘气压力:20Psi。e）碰撞气压力：9Psi。f）离子源温度：450℃。g）扫描模式：多反应监测（MRM）模式，四种化合物的质谱参数见表D.2。表D.2四种化合物的质谱参数号m/zm/zV压V1三七皂苷R1977.6931.633.6637.561.772人参皂苷Rg1845.4799.436.9637.544.2QB/T2966—XXXX号m/zm/zV压V3人参皂苷Rb11153.645.85945.473.044人参皂苷Re991.6945.533.96637.561.65D.4.4定性测定取试样溶液与混合标准工作溶液在相同试验条件下测定，试样溶液中待测组分的保留时间与标准溶液中对应组分的保留时间一致（偏差在±2.5%之内且定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应组分的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表D.3规定的范围，即可判定试样中存在该组分。表D.3定性确证时相对离子丰度的允许偏差%%D.4.5定量测定取试样溶液与混合标准工作溶液在相同试验条件下测定，以标准溶液浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。试样溶液中待测组分的响应值应在标准工作曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后测定。D.5结果计算试样中目标物的含量i按公式（D.1）计算：wi=………………(D.1)式中：wi——试样中目标物的质量分数，mg/kg；pi——试样溶液中目标物的质量浓度，mg/L；V——样液定容体积，mL；D——稀释倍数（不稀释则取1）;m——称取试样的质量，g。D.6谱图QB/T2966—XXXX四种目标物标准溶液的LC-MS/MS多反应监测质量色谱图见图D.1：图D.1四种目标物标准溶液LC-MS/MS多反应监测质量色谱图QB/T2966—XXXX异嗪皮啶（草珊瑚有效成分）含量的测定E.1原理试样经80%甲醇水提取后，过滤后经高效液相色谱质谱联用仪测量异嗪皮啶的含量，以保留时间和离子对比例定性，外标法定量。取样量为1.0g时，异嗪皮啶的方法检出限为0.02μg/g，方法定量限为0.05μg/g。E.2试剂和材料E.2.1除另有规定外，本实验用水均为GB/T6682中规定的一级水。E.2.2异嗪皮啶：纯度均不小于95%，CASNO.：486-21-5。E.2.3甲醇：色谱纯。E.2.4甲酸：分析纯。E.2.5甲醇水溶液（80%，v/v准确量取800mL甲醇（E.2.3）至1000mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀。E.2.6甲酸水溶液（0.1%，v/v准确量取1mL甲酸（E.2.4）至1000mL容量瓶，加水定容至刻度，混匀。E.2.7标准储备溶液（1000mg/L分别称取适量各对照物质（E.2.2）约10mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（E.2.3）定容至刻度，混匀。E.2.8混合标准工作溶液：用甲醇（E.2.3）将标准储备溶液（E.2.7）分别配成一系列浓度5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL的标准工作溶液。E.2.9石英砂：25目～150目。E.2.10微孔滤膜：孔径0.22μm，材质为尼龙。E.3仪器E.3.1液相色谱色谱/串联质谱仪（LC-MS/MS配电喷雾离子源（ESI）。E.3.2分析天平：感量为0.1mg。E.3.3涡旋振荡器：振荡速度不小于1500r/min。E.3.4超声波清洗器：功率不低于250W。E.4分析步骤E.4.1试样制备弃去前20mm牙膏，准确称取1.0g（精确至0.001g）样品，置于10mL具塞比色管中，加入约1g石英砂（E.2.9），混匀，再准确加入80%甲醇水溶液（E.2.5）10mL，涡旋混匀后超声15min。放置冷却后经0.22μm滤膜（E.2.10）过滤，待测。E.4.2色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱，100mm×3mm，2.6μm，或柱效相当者。QB/T2966—XXXXb)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（E.2.6），B：甲醇（E.2.3），梯度洗脱，梯度洗脱程序见表E.1。c)柱温：30℃。d)进样体积：5μL。表E.1液相色谱梯度洗脱程序间in动相A动相B090740607.190909090E.4.3质谱条件质谱参考条件如下：a)电离方式：电喷雾电离，正离子模式。b）喷雾压力（IS）4500.0KV。c）干燥器压力：50Psi。d）气帘气压力:20Psi。e）碰撞气压力：9Psi。f）离子源温度：550℃。g）扫描模式：多反应监测（MRM）模式，异嗪皮啶的质谱参数见表E.2。表E.2异嗪皮啶的质谱参数化合物名称母离子m/z子离子m/z碰撞电压V去簇电压V异嗪皮啶223.0208.0243243E.4.4定性测定取试样溶液与标准工作溶液在相同试验条件下测定，试样溶液中待测组分的保留时间与标准溶液中对应组分的保留时间一致（偏差在±2.5%之内且定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应组分的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表E.3规定的范围，即可判定试样中存在该组分。表E.3定性确证时相对离子丰度的允许偏差k＞50k≤10QB/T2966—XXXXE.4.5定量测定取试样溶液与标准工作溶液在相同试验条件下测定，以标准溶液浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。试样溶液中待测组分的响应值应在标准工作曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后测定。E.5结果计算试样中目标物的含量w按公式（E.1）计算：式中：—w——P—V——D—m—E.6谱图试样中目标物的质量分数，单位为毫克每千克（mg/kg）；试样溶液中目标物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL样液定容体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数（不稀释则取1）；称取试样的质量，单位为克（g）。异嗪皮啶标准溶液及阳性样品的LC-MS/MS多反应监测质量色谱图E.1：图E.1标准溶液LC-MS/MS多反应监测质量色谱图QB/T2966—XXXX其他常见功效成分的检测方法其他常见功效成分的检测方法见表F.1。表F.1其他常见功效成分的检测方法标准名称标准编号口腔护理产品中过氧化物的测定方法高效液相色谱法GB/T32112-2015口腔护理产品中植酸钠的测定方法GB/T32114-2015牙膏中4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）的测定高效液相色谱串联质谱法GB/T32121-2015牙膏中维生素B2、维生素B3和维生素B6的测定高效液相色谱