考点47动物细胞工程（讲义）

考点47动物细胞工程动物细胞培养概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。原理：细胞增殖地位：动物细胞工程的基础培养条件营养①已知成分：将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。②未知成分：使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。③物理性质：培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。无菌、无毒的环境①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；②在无菌环境下进行操作；③还需要定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。温度、pH和渗透压①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。③适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。气体环境①组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。②气体作用：a.O2：O2是细胞代谢所必需的；b.CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。过程①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。②传代培养：原代培养的细胞生长、增殖一定时间后，由于空间不足或密度过大导致营养枯竭，影响细胞的生长，因此需要重新用胰蛋白酶等处理，进行分瓶扩大培养，称为传代培养；③细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；④接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。干细胞培养及其应用分布：干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中。分类：干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞等①胚胎干细胞（简称ES细胞）a.分布：存在于早期胚胎中b.特点：具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。②成体干细胞a.分布：存在于成体组织或器官内中b.类别：包括骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞、睾丸中的精原干细胞等。c.特点：一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。干细胞的应用①原理：干细胞有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、器官的发育、再生和修复等密切相关。②应用：a.造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病。b.神经干细胞：治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）。c.诱导多能干细胞（iPS细胞）：可治疗小鼠的镰状细胞贫血症，在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域。动物细胞融合概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。结果：形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。原理：细胞膜的流动性。诱导融合的常用方法：电融合法、聚乙二醇PEG融合法和灭活病毒诱导法。融合实质及完成的标志：细胞核的融合。意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。应用①细胞融合技术已经成为研究培育生物新品种、细胞遗传、细胞免疫和肿瘤等的重要手段。②利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。单克隆抗体及其应用基本原理一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性。筛选杂交瘤细胞，体外培养大量增殖，以获得所需抗体。制备过程突出优点：特异性强、灵敏度高，可大量制备。实际应用：（1）作为诊断试剂；①多种疾病的诊断②病原体的鉴定③其他类型诊断。（2）用于治疗疾病和运载药物：与药物结合，制成抗体药物偶联物（ADC），杀伤癌细胞；ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成。动物体细胞核移植技术和克隆动物概念：将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。原理：动物细胞核的全能性。哺乳动物核移植分类（1）胚胎细胞核移植：动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易。（2）体细胞核移植：动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难。非人灵长类动物体细胞核移植的困难原因（1）供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态，这导致了胚胎发育率低。（2）对非人灵长类动物胚胎进行操作的技术尚不完善。体细胞核移植的过程去核方法：显微操作法（普遍使用）。也可以使用梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使DNA变性。MⅡ中期的核是纺锤体染色体复合物。体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题应用前景畜牧生产加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。保护濒危动物有望增加濒危物种的存活数量。医药卫生转基因克隆动物可以作为生物反应器，生产珍贵的医用蛋白。治疗人类疾病①转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以作为异种移植的供体；②以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，将它们移植给患者时可以避免免疫排斥反应。科研①研究克隆动物可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程；②克隆一批遗传背景相同的动物，可以通过它们之间的对比来分析致病基因；③克隆特定疾病模型的动物，还能为研究该疾病机制和开发相应的药物提供帮助；存在的问题①成功率非常低；②各个技术环节有待进一步改进；③绝大多数克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷。考法1动物细胞培养与动物体细胞核移植动物细胞培养过程中有关操作的分析培养动物肝脏细胞时切成小薄片的原因：有利于肝脏细胞充分吸收氧气和营养物质、排出代谢废物。动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养的原因：幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低，增殖能力强，更易于培养。在动物细胞培养过程中两次用到胰蛋白酶的作用：第1次是将剪碎的组织分散成单个细胞；第2次是将贴壁细胞分散开来，进行传代培养。核移植时选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞比较大，易操作；卵（母）细胞的细胞质多，营养丰富，含有促进细胞核全能性表达的物质。正常动物细胞培养的特点：悬浮生长（少数）、贴壁生长和接触抑制。动物细胞培养与动物体细胞核移植的比较动物细胞培养动物体细胞核移植原理细胞增殖动物细胞核的全能性过程结果相同分化程度的细胞群细胞核基因控制的性状与供体相同，细胞质基因控制的性状与提供卵母细胞的母牛相同关键环节细胞增殖（分裂）、细胞癌变细胞分化应用①生产生物制品；②用于基因工程；③检测有毒物质①加速良种繁育；②保护濒危物种；③生产医用蛋白；④提供克隆器官、组织等（2023春•石家庄期末）实验人员对动物细胞培养过程中的动物细胞增殖情况进行统计，其变化曲线如图所示，图中B、D两点表示经筛选后继续培养。下列叙述错误的（）A．O点时可将动物胚胎组织用机械的方法处理，细胞分散制成悬液 B．细胞悬液进行原代培养，其增殖情况如OA段所示 C．出现AB和CD段的原因是所有细胞贴壁生长并发生接触抑制现象 D．D点时的细胞用蛋白酶处理、筛选、分瓶可继续传代培养【分析】1、据图分析，OA段的培养称为原代培养，BC段的培养为传代培养。2、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）、剪碎、用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞、制成细胞悬液、转入培养瓶中进行原代培养、贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。3、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。【解答】解：A、O点时可将动物胚胎组织用机械的方法处理，将组织分散成单个细胞，制成细胞悬液，A正确；B、OA段的增殖代数在10代以内，因此为原代培养，B正确；C、当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制，AB段和CD段细胞几乎生长停滞，可能发生了接触抑制现象，C正确；D、D点后的细胞能无限增殖，细胞核型已发生改变，具备了癌细胞的特性，不再传代培养，目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型，D错误。故选：D。【点评】本题主要考查动物细胞培养，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力，能够运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。（2023春•承德期末）科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞获得诱导多能干细胞（iPS细胞），iPS细胞可分化为各种组织细胞，目前运用iPS细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域的研究，取得了新的进展。下列叙述错误的是（）A．iPS细胞和神经干细胞的分化潜能是有差别的 B．iPS细胞需要培养在含有95%O2和5%CO2的培养箱中 C．成纤维细胞和用小分子化合物诱导形成的iPS细胞所携带的遗传信息相同 D．取自身细胞形成的iPS细胞来治疗心血管疾病可避免免疫排斥反应【分析】胚胎干细胞：（1）来源：哺乳动物的胚胎干细胞简称ES细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。（2）特点：具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显，在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。【解答】解：A、iPS细胞的分化潜能大于神经干细胞，A正确；B、iPS细胞需要培养在含有95%空气和5%CO2的培养箱中，B错误；C、用小分子化合物诱导形成iPS细胞并没有改变遗传信息，分化的本质是基因的选择性表达，C正确；D、取自身细胞形成的iPS细胞表面抗原相同，用于治疗心血管疾病可避免免疫排斥反应，D正确。故选：B。【点评】本题考查动物细胞培养和胚胎干细胞、ips细胞的应用，要求学生识记动物细胞培养的具体过程，掌握动物细胞培养条件及该技术的相关应用，能结合所学知识准确判断各选项。（2023春•南阳月考）2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如图技术路线。据图分析，下列叙述不正确的是（）A．“三亲婴儿”的出生属于有性生殖 B．“三亲婴儿”同时拥有父亲、母亲及卵母细胞捐献者的部分基因 C．使用该技术母亲细胞质中的致病基因不会传递给后代 D．该技术可避免母亲的色盲基因传递给后代【分析】动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。原理是动物细胞核具有全能性，克隆动物的遗传物质来自双亲，其核遗传物质来自供核生物，而细胞质基因来自提供细胞质的生物。【解答】解：A、由图可知，“三亲婴儿”的培育需要采用体外受精技术，属于有性生殖，A正确；B、图中“三亲婴儿”是经过核移植和体外受精产生的，其细胞核基因一半来自父亲，一半来自母亲，细胞质基因来自卵母细胞捐献者，故“三亲婴儿”同时拥有父亲、母亲及卵母细胞捐献者的部分基因，B正确；C、母亲卵母细胞取核去质，故该技术可避免母亲细胞质中的致病基因传递给后代，C正确；D、色盲基因位于X染色体上，属于核基因，故该技术不可以避免母亲的色盲基因传递给后代，D错误。故选：D。【点评】本题结合模式图，考查细胞核移植技术和胚胎工程的相关知识，要求考生识记细胞核移植技术的概念及应用，掌握体外受精技术的应用，能结合图中信息准确判断各选项。（2023春•东莞市校级月考）我国中科院的研究团队利用细胞工程和基因编辑技术，成功培育出世界上首例只有双母亲来源的孤雌小鼠和双父亲来源的孤雄小鼠，实现了哺乳动物的同性繁殖。实验流程如图所示，请回答下列问题：（1）卵细胞转化成phFSC相当于植物组织培养中的过程，该过程（填“存在”或“不存在”）基因的选择性表达。（2）要培育孤雄小鼠需要将精子和具卵细胞细胞核特点的ahESC同时注入去核的卵母细胞形成重构胚，在对卵母细胞进行去核时，除了显微操作外还可以采用（至少答出两种）等方法处理，得到的重构胚通常需要发育到阶段才能进行胚胎移植。（3）不考虑致死情况，得到的孤雄小鼠性染色体组成为。利用胚胎分割的方法对乙进行处理得到了多只孤雄小鼠，利用这些孤雄小鼠作为实验材料进行用于医学研究的优点是。【分析】1、卵细胞激活转化成phFSC，通过基因编辑技术获得具精子细胞核特点的phESC，获得甲，从而得到孤雌小鼠。2、精子激活转化成ahFSC，通过基因编辑技术获得具卵细胞细胞核特点的ahESC，获得乙，从而得到孤雄小鼠。【解答】解：（1）卵细胞是高度分化的细胞，转化为孤雌胚胎干细胞相当于植物组织培养中的脱分化阶段，这个过程也存在某些基因的表达和某些基因的关闭，所以存在基因的选择性表达。（2）对卵母细胞进行去核时，可以采取显微操作、梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理等，通常重构胚需要在体外培养到桑葚胚或囊胚期才能进行移植。（3）不考虑致死，孤雄小鼠的染色体来源于两只雄鼠产生的精子，所以其性染色体可能是XX、XY或YY，通过胚胎分割得到的同一批小鼠遗传物质相同，所以作为实验材料可以排除由基因的差异造成的个体差异。故答案为：（1）脱分化存在（2）梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理桑葚胚或囊胚（3）XX，XY或YY遗传物质相同，可以基本排除由基因不同造成的个体差异【点评】本题考查胚胎工程的相关知识，要求考生识记受精作用的具体过程，识记胚胎移植的基本程序，能结合图中信息准确答题。（2023•湖北模拟）体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，培养方式可分为悬浮培养和贴壁培养。下列叙述正确的是（）A．悬浮培养一般使用液体培养基 B．贴壁培养一般使用固体培养基 C．悬浮培养会发生接触抑制现象 D．血液中淋巴细胞适合贴壁培养【分析】1、动物细胞培养的过程：取动物组织块剪碎组织用胰蛋白酶处理分散成单个细胞一制成细胞悬液一转入培养液中（原代培养）一放入二氧化碳培养箱培养一贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液一转入培养液（传代培养）一放入二氧化碳培养箱培养。2、动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素，定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）5%的CO2（维持培养液的pH）。【解答】解：A、动物细胞培养均采用液体培养基，A正确；B、动物细胞培养均采用液体培养基，B错误；C、贴壁培养会发生接触抑制现象，悬浮培养不会发生接触抑制现象，C错误；D、体外培养动物细胞时常需要提供一个类似该细胞在生物体内的环境条件，因此血液中淋巴细胞适合悬浮培养，D错误。故选：A。【点评】本题考查动物细胞培养的相关知识，要求考生识记动物细胞培养的过程及条件，能结合所学的知识准确答题。（2023春•宛城区校级月考）有研究表明“渐冻症”是由突变的基因导致运动神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。也有最新研究结果表明，利用诱导多功能干细胞（iPS细胞）制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述错误的是（）A．iPS细胞分化成的多种细胞中所有核酸相同，蛋白质却不完全相同 B．iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞种类增多 C．若控制运动神经元合成毒蛋白的基因替换，则可以起到良好的治疗作用 D．植入神经干细胞，恢复受损的运动功能，也许会在一定程度上使“渐冻症”病情改善【分析】1、细胞分化的结果是形成形态、结构和生理功能不同的细胞，使细胞的种类增多，其实质是基因的选择性表达。2、iPS细胞的功能类似于胚胎干细胞。【解答】解：A、细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此iPS细胞分化成的多种细胞中DNA相同，RNA和蛋白质不完全相同，A错误；B、细胞分化的实质是基因的选择性表弟，其结果是形成形态、结构和生理功能不同的细胞，使细胞的种类增多，B正确；C、若控制运动神经元合成毒蛋白的基因替换，则无法合成该毒蛋白，所以可以起到治疗该病的作用，C正确；D、植入神经干细胞，诱导分化成前驱细胞，恢复受损的运动功能，也许会在一定程度上使“渐冻症”病情改善，D正确。故选：A。【点评】本题考查细胞分化和干细胞的相关知识，要求考生识记细胞分化的概念，掌握细胞分化的实质；识记干细胞的相关应用，能结合题中信息准确判断各选项。（2023春•万州区期末）如图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述错误的是（）A．步骤②的细胞悬液中除必需的营养物质外，还需添加少量血清 B．步骤①的操作需要在无菌环境中进行 C．步骤③到④分瓶操作时所有细胞都需用胰蛋白酶处理 D．步骤③④需放入二氧化碳培养箱培养且④培养过程中可能会发生细胞转化【分析】动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。【解答】解：A、步骤②的细胞悬液中除必需的营养物质外，还需添加少量血清，A正确；B、动物细胞培养过程需要无菌操作，故步骤①的操作需要在无菌环境中进行，B正确；C、步骤③到④的分瓶操作时不是所有细胞都需用胰蛋白酶处理，如生活在溶液中的未贴壁细胞，C错误；D、步骤③为原代培养，④为传代培养，都需置于需放入二氧化碳培养箱培养，且④培养过程中部分细胞核型改变，可能会发生细胞转化，D正确。故选：C。【点评】本题主要考查动物细胞培养，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力，能够运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。24．（2022•河北二模）克隆的英文“clone”源于希腊语的“klon”（嫩枝）。生物的无性繁殖方式统称为克隆，这门生物技术叫克隆技术。克隆技术在增加动物数量以及优良家畜的繁殖过程中被广泛应用。回答下列问题：（1）用核移植的方法可以获取克隆动物，哺乳动物核移植可以分为和体细胞核移植；体细胞核移植的难度明显高于前者的原因是。（2）动物细胞核移植过程中，通常采用卵（母）细胞作为受体细胞，原因可能是。核移植前需将卵母细胞培养至MⅡ中期，并去核，去核的目的是。（3）克隆技术可用于动物器官移植，能解决等问题；胚胎分割（填“属于”或“不属于”）克隆，应选取阶段的胚胎进行分割，要保证将均等分割。【分析】动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植．体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。核移植得到的动物称克隆动物，克隆动物的核基因完全来自供体动物，而细胞质基因来自受体细胞；核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，因为体细胞的全能性低于胚胎细胞。【解答】解：（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植；体细胞核移植的难度明显高于前者的原因是动物胚胎，细胞分化程度低，恢复全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高、恢复其全能性比较困难。（2）动物细胞核移植过程中，通常采用卵（母）细胞作为受体细胞，原因可能是卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核发育的物质。核移植前需将卵母细胞培养至MⅡ中期，并去核，去核的目的是避免卵母细胞核中的遗传物质传递到子代。（3）克隆技术可用于动物器官移植，能解决供体器官不足和排斥反应等问题；胚胎分割属于克隆，应选取桑葚胚或囊胚阶段的胚胎进行分割，要保证将内细胞团均等分割。故答案为：（1）胚胎细胞核移植动物胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高、恢复其全能性比较困难（2）卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核恢复分裂能力的物质避免卵母细胞核中的遗传物质传递到子代（3）供体器官不足和排斥反应属于桑葚胚或囊胚内细胞团【点评】本题考查核移植的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断和得出正确的结论。考法2动物细胞融合技术与单克隆抗体的制备血清抗体与单克隆抗体的比较产生特点血清抗体由浆细胞分泌一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高，能大量制备比较制备单克隆抗体过程中的两次筛选第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种核融合后形成的细胞（“BB”细胞、“瘤瘤”细胞）都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞（“B瘤”细胞）才能生长用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否则不能获得想要的单克隆抗体。诱导融合的两种细胞名称及作用：免疫过的B淋巴细胞（浆细胞）的作用是产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。单克隆抗体的获取：将杂交瘤细胞在体外或小鼠腹腔中培养，从细胞培养液或小鼠腹水中可获得大量的单克隆抗体。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交（以培育番茄马铃薯植株为例）动物细胞融合（以单克隆抗体的制备为例）原理（理论基础）细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖融合前处理酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）注射特定抗原，免疫处理正常小鼠促融方法①物理法：电融合法、离心法等；②化学法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+高pH融合法①物理、化学法：电融合法、PEG融合法；②生物法：灭活病毒诱导法过程意义和用途①打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种；②克服有性杂交的母系遗传现象，获得细胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传①制备单克隆抗体②诊断、治疗、预防疾病。如“单抗诊断试剂盒”、抗体药物偶联物治疗癌症相同点利用的原理都有细胞膜的流动性；都能克服远缘杂交不亲和的障碍；含有两个亲本的遗传物质动物细胞融合是制备单克隆抗体的基础，制备单克隆抗体是动物细胞融合的应用。（2023•江汉区校级模拟）如图可用来表示多种生物工程技术的流程，相关叙述错误的是（）A．若表示植物体细胞杂交，整个过程中培养基的渗透压都是重要影响因素 B．若表示试管牛的繁殖流程，则1、2得到3的过程可以体内也可以体外 C．若表示单克隆抗体的制备，需多次克隆化培养和抗体检测以达到筛选目的 D．若表示克隆牛的培育流程，获得1、2都需要用到细胞培养技术【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞，第二次筛选：利用多孔板法和抗原﹣抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。【解答】解：A、若上图表示植物体细胞杂交流程，形成3的过程表示原生质体的融合过程，去壁过程需要提高培养基的渗透压，避免原生质体吸水涨破，3过程已经长出细胞壁，可以降低渗透压，因此整个过程中培养基的渗透压都是重要的影响因素，A正确；B、若上图表示试管牛的繁殖流程，1、2得到3的过程表示精子与卵细胞结合形成受精卵，受精卵发育形成早期胚胎，早期胚胎植入到母体子宫内继续发育，1、2得到3的过程需要在体外进行，B错误；C、若上图表示单克隆抗体的制备过程，3表示杂交瘤细胞的形成过程，得到杂交瘤细胞后需要经过专一性抗体检测和多次克隆化培养，以达到筛选目的，C正确；D、若上图表示克隆牛的培育流程，1、2得到3的过程表示供体细胞提供细胞核，植入到去核的卵母细胞形成重构胚，获得供体细胞和去核的卵母细胞都需要用到细胞培养技术，即获得1、2都需要用到细胞培养技术，D正确。故选B。【点评】本题需要学生掌握单克隆抗体的制备过程及原理。（2023•威海二模）抗犬细小病毒的单克隆抗体是利用细胞融合技术，将经灭活犬细小病毒免疫过的小鼠的B淋巴细胞与瘤细胞融合，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，将其注射到无特定病原体感染的小鼠体内，从腹腔中提取的高效特异性抗体。下列说法错误的是（）A．对小鼠注射灭活的犬细小病毒后即可从小鼠脾脏中分离出分泌相应抗体的B淋巴细胞 B．灭活病毒可使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，诱导B淋巴细胞与瘤细胞融合 C．至少需要经过两次筛选才能获得所需的杂交瘤细胞 D．利用该单克隆抗体可以诊断是否感染犬细小病毒【分析】1、在单克隆抗体的制备过程中使用的细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养；抗原侵入机体后，发生体液免疫，体内产生抗犬细小病毒的抗体；在单克隆抗体的制备过程中，在选择培养基中有两次筛选，第一次筛选的目的是选择出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是选择出能分泌犬细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，采用抗原﹣﹣抗体杂交法。2、单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高，并可大量制备。【解答】解：A、对小鼠注射灭活的犬细小病毒一段时间后，可从小鼠脾脏中分离出分泌相应抗体的B淋巴细胞，A错误；B、灭活病毒诱导细胞融合的原理是灭活病毒可使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，从而诱导B淋巴细胞与瘤细胞融合，B正确；C、单克隆抗体制备过程至少要经过两次筛选，第一次是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用抗原﹣抗体杂交筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，C正确；D、利用单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高的特点，可以诊断是否感染犬细小病毒，D正确。故选：A。【点评】本题主要考查单克隆抗体制备过程及动物细胞培养的有关知识，意在考查学生运用所学知识解决实际问题的能力。（2023春•北海期末）2023年3月份以来，季节性甲型H1N1亚型流感病毒感染率呈上升趋势，此外国内专家预测新冠病毒感染的第二波高峰期也在2023年6月底到达，这两种病毒引起的症状极为相似，为了对症下药，疑似病患可以用相应的两种抗原检测盒检测出自己是感染了甲流还是新冠病毒。如图1所示为抗原检测试剂盒的使用方法，可通过肉眼观察到显色结果。请回答下列问题：（1）抗原检测试剂盒是利用的原理进行检测，检测的实质是检测样本中是否含有新冠病毒的。（2）抗原检测试剂盒的生产依赖于单克隆抗体的制备。如图2为制取新冠病毒X蛋白的单克隆抗体的部分过程。①图中a操作是指向小鼠体内注入，之后一般从该小鼠的中提取淋巴细胞，并在体外让淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。与诱导植物原生质体融合相比，诱导这两种细胞融合的特有方法是诱导法。②诱导融合后至少要经过两次筛选，图中的筛选1是指利用将细胞筛选出来；筛选2筛选出来细胞具有的特点，可直接用于大量培养生产单克隆抗体。【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。【解答】解：（1）试剂盒上含有抗体，可以和抗原结合，所以原理是抗原一抗体杂交；试剂盒中含有新冠病毒的抗体，所以检测的实质是检测样本中是否含有新冠病毒的抗原蛋白。（2）①图中a操作是指往小鼠体内注射特定的抗原，这里应该是新冠病毒的X蛋白，之后一般从该小鼠的脾脏中提取淋巴细胞，因为脾脏作为免疫器官，其中有大量的免疫细胞，而后在体外让淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。与诱导植物原生质体融合相比，诱导这两种细胞融合的特有方法是灭活病毒诱导法。②诱导融合后至少要经过两次筛选，图中的筛选1是指利用选择培养基将杂交瘤细胞筛选出来，因为经过诱导融合后会产生多种类型的融合细胞，因而需要将杂交瘤细胞筛选出来；筛选2是利用抗原﹣抗体杂交，即抗原和抗体特异性结合的原理将能产生特定抗体的杂交瘤细胞筛选出来，这类细胞既能产生特定的抗体，而且还能大量增殖，因而可以在体外或体内进行大量培养，进而可用于生成单克隆抗体。故答案为：（1）抗原一抗体杂交（或答抗原和抗体特异性结合）抗原蛋白（2）新冠病毒的X蛋白脾脏灭活病毒选择培养基杂交瘤既能大量增殖，又能产生特定的抗体【点评】本题以新型冠状病毒的检测和单克隆抗体的制作为素材，考查特异性免疫和单克隆抗体的相关知识，意在考查学生提取信息和分析问题的能力。（2023春•茅箭区校级期末）人体心肌细胞中的肌钙蛋白由肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（cTnC）三种结构不同的亚基组成，其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。下列相关叙述正确的是（）A．骨髓瘤细胞的恒温培养箱中应加入95%O2和5%CO2的混合气体 B．为了减轻代谢物积累对细胞的伤害，可在培养液中加入一定量的抗生素 C．②过程需利用多孔培养板进行抗体检测，每个孔中要接种多个杂交瘤细胞 D．若要克服鼠源性单抗的异源性反应，可通过蛋白质工程将抗原结合区域外的其他部分替换为人抗体区段【分析】分析题图：①表示用选择培养基筛选处杂交瘤细胞；②表示筛选获得能产生抗cTnI抗体的杂交瘤细胞，因此丙细胞具有浆细胞和骨髓瘤细胞的特点，既能产生特定抗体，又能无限增殖。【解答】解：A、动物细胞培养的气体环境是在恒温培养箱中应加入95%空气和5%CO2的混合气体，A错误；B、为了防止动物细胞培养过程中被细菌污染，可在培养液中加入一定量的抗生素，B错误；C、②过程需利用多孔培养板进行抗体检测，每个孔中要接种1个杂交瘤细胞，C错误；D、若要克服图示鼠源性抗cTnI单克隆抗体的异源性反应，可通过蛋白质工程将抗原结合区域外的其他部分替换为人抗体区段，D正确。故选：D。【点评】本题结合模式图，考查单克隆抗体的制备过程，要求考生识记单克隆抗体制备的原理、过程，掌握单克隆抗体的优点及相关应用，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题。（2023春•石家庄期末）细胞融合技术有着广泛应用，据下图分析问题。（1）若a、b分别是小麦和长穗偃麦的花粉，这两个品种的花粉细胞杂交之前必须先用去除细胞壁，再用化学法诱导融合，可产生种融合细胞（仅考虑两两融合）。（2）若将d再生细胞壁后，利用技术，培育成杂种植株，该技术依据的生物学原理是。培育d植株的技术在生产实践中的意义是。（3）图1是新冠病毒抗原检测试剂盒中新型冠状病毒单克隆抗体的制备过程，a是经新冠病毒S蛋白处理过的小鼠中提取的B淋巴