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DB22DB22/T243—2019霍乱弧菌检测气相色谱-质谱法MethodofVibriocholeraWithGaschromatography-massspectrometry吉林省市场监督管理厅发布I）；――修改了“试剂和材料”（见4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6，2000年版的3――增加了“Ⅱ级生物安全柜”（见5.10）；1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问种分析方法。不同菌属或同属不同血清型细菌全细胞脂肪酸组成成分不同，它们有各自不同的色谱-质谱指纹图，根据峰值不同进行判断。根据霍乱弧菌种共有特异性峰值判断可检出羟基十四烷酸甲酯弧菌埃尔托生物型稻叶血清型菌株细胞脂肪酸---十六烯酸甲酯（C17H32O2）进行霍乱弧菌埃尔托生物4.6石油醚：色谱纯（60℃~90℃)。24.16氮气5.9恒温培养箱（36℃±1℃)。将样本（5.10）及标准菌株（4.11a和4.11b）接种到碱性蛋白胨水（4.13）36℃±1℃增菌培养（5.9）6h～8h后，从菌膜下表层取1接种环接18h～24h；必要时进行2次增菌培养。从分离培养基上挑取疑似菌落接种于TCBS培养基（4.14）进行纯培养，36℃±1℃,18h～24h。用生理盐水(430min（5.6）灭活。从灭活菌悬液中吸取（5.11）100uL无菌菌液接种到大豆胰酶解酪蛋白肉基（4.15）中，37℃培养18h～24将灭活后菌悬液离心（5.3）12000r/min,5m3匀，熔封安瓶。在80℃水浴(5.6)水解酯化18h，冷却后加入2mL石油醚(4.过碳酸氢钠过滤器(4.17a)过滤，液，皂化瓶中连接冷凝管，并向瓶中通入氮气（4.16），在60℃水浴上反应20min冷却后，从冷凝管的上口加入4mL三氟化硼一甲醇溶液(4.8)反应2min，取下加入少量的饱和氯化钠(4.4)水溶液，混匀后，再加大量的饱和氯化钠水溶液液至瓶口，将上清水硫酸钠(4.5)脱水后，移入1.5mL离7.3.1.3进样口温度230℃,检测温度250℃,柱流量2mL/min；分流比5:1。7.3.1.4色谱质谱接口温度280℃,载气为氦气（4.4流量为1.0mL/min。）；8.1.2检出十六烯酸甲酯（C17H32O2）特异性峰，判定为霍4）；）；X24,34424,20324.0so1490590024,34424,20324.0s59003.9924,79图2小川细胞脂肪酸色谱图2.264V1224.34624.258-24325.06324.950-25.108

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