微生物学检验技术 课件 33-3综合技能训练：痰液标本微生物检验

综合技能实训三痰液标本微生物检验学习目标1．掌握痰液标本的正确采集、运送和微生物检验程序。2．熟悉下呼吸道感染的常见致病菌。3．了解痰液标本中常见致病菌的临床意义。4．具有正确采集痰液标本和进行痰培养操作的能力。5．能正确选择试验项目对痰培养标本进行微生物检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。综合技能训练三痰液标本微生物检验思维导图综合技能训练三痰液标本微生物检验一、痰液标本常见病原菌综合技能训练三痰液标本微生物检验1、球菌革兰阳性：金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、厌氧球菌革兰阴性：脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌

综合技能训练三痰液标本微生物检验2、杆菌革兰阳性：白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌革兰阴性：单胞菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、百日咳杆菌、军团菌

综合技能训练三痰液标本微生物检验3、其他白念珠菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌支原体、衣原体

综合技能训练三痰液标本微生物检验二、检验方法与程序综合技能训练三痰液标本微生物检验痰液标本的检验操作程序见下图痰液初步报告肉眼观察及涂片革兰染色镜检合格标本培养前处理不合格标本拒收及建议重新采集合格标本血平板（5%CO2环境）巧克力平板（5%CO2环境）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）CHROMagar（需氧环境）菌落观察涂片革兰染色镜检结合涂片结果和培养结果综合分析挑取可疑菌落纯培养细菌鉴定、药敏试验结果报告综合技能训练三痰液标本微生物检验1、痰液标本的采集1）自然咳痰法2）小儿取痰法3）特殊器械采集法

综合技能训练三痰液标本微生物检验2、痰液标本的运送痰液标本采集后应立即送检，室温保存不能超过2h，可选用运送培养基运送和保存标本，但也不应超过48h

综合技能训练三痰液标本微生物检验3、对不合格痰液标本的处理对下列不合格的痰液标本应拒收：痰液标本呈水样或唾液样；痰涂片白细胞<10个/LP，上皮细胞>25个/LP；标本放置时间超过2h；未用指定的无菌容器留取痰液。

综合技能训练三痰液标本微生物检验三、培养及鉴定综合技能训练三痰液标本微生物检验1、涂片检查痰涂片进行革兰染色后，在低倍镜下检测20～40个视野，观察白细胞和上皮细胞数量的多少来初步判定标本是否合格

分级白细胞（个）/LP上皮细胞（个）/LPA>25<10B>2510～25C>25>25C10～25>25E<10>25痰标本镜下分类注：A、B标本适合培养，C、D、E为不合格标本，应重新留取标本综合技能训练三痰液标本微生物检验1、涂片检查一般细菌涂片检查：取痰液的脓性或带血部分制成均匀薄片，进行革兰染色镜检，根据染色性、形态及排列初步报告。结核杆菌检查：取干酪样或脓性部分的痰液制成厚涂片，抗酸染色后镜检，根据所见结果报告找到抗酸杆菌或未找到抗酸杆菌。综合技能训练三痰液标本微生物检验1、涂片检查放线菌及诺卡菌检查：将痰液用生理盐水反复洗涤数次，如含血液则加蒸馏水溶解红细胞，挑取黄色颗粒（硫磺样颗粒）或不透明的着色斑点，覆以盖玻片并轻轻压之，高倍镜下观察其结构，若查见革兰阳性的分枝菌丝、中间部分的菌丝为革兰阳性、四周放射的末端为革兰阴性，可报告疑似放线菌；如若见形态与放线菌相似，但菌丝末端不膨大，加做抗酸染色，呈弱阳性，可报告疑似诺卡菌。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、分离培养与鉴定痰培养的前处理痰液的洗净：将痰加入15～20ml无菌生理盐水的试管中，振荡5～10s后静置，用接种环将沉淀于管底的脓痰片沾出，放入另一试管内，以同样的方法反复洗涤3次，将洗涤后痰片接种在培养基上，主要是洗去痰中的正常菌群痰液的均质化：向痰液内加入等量pH7.6的1％胰酶溶液，置37℃水浴90min，即可使痰液均质化而对细菌培养无影响，此外还可以选用玻璃研磨。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、分离培养与鉴定普通细菌培养：将处理后的痰接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板、中国蓝/麦康凯琼脂平板上，分别放入普通和CO2环境，35℃培养18～24h后观察菌落特征。若平板上有细菌生长，辨别是病原菌还是条件致病菌，是一种菌还是多种菌。若平板上仅有正常菌群生长，则继续培养24h再观察，必要时培养至72h。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、分离培养与鉴定嗜肺军团菌培养：将均质化的标本接种于血琼脂、巧克力琼脂和BCYE琼脂平板上，置35℃，5％～10％CO2环境中培养。若在上述培养基中24h内有细菌生长，则此菌不是军团菌。如在BCYE平板上48h后生长，而血琼脂平板和巧克力平板上不生长，此菌可能是军团菌，应进一步鉴定。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、分离培养与鉴定白喉棒状杆菌培养：将处理好的痰液或假膜接种于吕氏血清斜面、血琼脂平板和亚碲酸钾琼脂平板上，经35℃培养16～48h后，分别观察各种培养基上的菌落特征，如见到典型菌落，经形态学检查和生化试验、毒力试验证实后报告。综合技能训练三痰液标本微生物检验四、结果报告综合技能训练三痰液标本微生物检验1、涂片镜检报告革兰染色：如见到排列成葡萄状的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性球菌，形似葡萄球菌”；如见到瓜子仁或矛头状、尖端相背成双排列、有明显荚膜的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性双球菌，形似肺炎链球菌”；如见到许多双球状、单个排列的革兰阴性球菌，可报告为“找到革兰阴性球菌，形似卡他莫拉菌”；如见到革兰阴性杆菌短肥形且有明显荚膜，可报告“找到革兰阴性杆菌，形似肺炎克雷伯菌”；如见到不易识别的细菌，则报告“找到革兰×性球（杆）菌”。抗酸染色：见到抗酸阳性杆菌，报告“找到抗酸杆菌”，而不能报告“找到结核分枝杆菌”。

综合技能训练三痰液标本微生物检验1、涂片镜检报告如见到中央部分菌丝为革兰阳性，而四周放射的末梢菌丝为革兰阴性，抗酸染色为阴性，可报告“找到革兰阳性杆菌、疑似放线菌”；如革兰染色反应与放线菌相同，抗酸染色为弱阳性，可报告“找到革兰阳性杆菌、疑似诺卡菌”。对临床有特殊要求的标本，根据要求做相应染色，根据镜下所见报告结果。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、鉴定与药敏分离培养得到致病菌后，挑取可疑菌落，选择合适的鉴定卡片，制成适合的麦氏菌液浓度，立即进行细菌鉴定及药物敏感性试验。查见病原菌或条件致病菌报告菌名和药敏结果，并记录细菌数量，半定量计数见下表。区别定植菌或病原菌，应结合患者临床状况及诊断进行分析。综合技能训练三痰液标本微生物检验2、鉴定与药敏

分级划线区菌落数量第1区第2区第3区少见（+）<10少量（++）>10<5中等（+++）>10>5<5多量（++++）>10>5>5痰标本在平板上的菌落量化指标综合技能训练三痰液标本微生物检验五、临床意义综合技能训练三痰液标本微生物检验上呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，金黄色葡萄球菌、A群链球菌、肺炎链球菌、肠球菌以及某些革兰阴性杆菌等是最常见的病原体。急性细菌性鼻炎、鼻前庭炎、鼻腔脓肿、鼻中隔脓肿等多由金黄色葡萄球菌、A群链球菌和铜绿假单胞菌常引起；慢性鼻窦炎多为需氧菌和厌氧菌混合感染；猩红热、风湿热及急性咽炎患者咽拭子常可检出A群链球菌。综合技能训练三痰液标本微生物检验下呼吸道感染最常见的疾病是细菌性肺炎。肺炎链球菌是主要病原菌，由流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌及军团菌所致肺炎也应引起人们的重视。医院获得性肺炎的病原体50%以上是革兰阴性杆菌，一些条件致病菌和