Lp-PLA2(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2)定量检测试剂盒

人血浆脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)

定量(dìngliàng)测定试剂盒

中美合资(hézī)·天津康尔克生物科技有限公司共四十八页125,000+受试者在国际主流专业杂志和会议报告中，已有超过(chāoguò)100项临床研究和综述分析的结果支持Lp-PLA2

作为一个心血管疾病的标志物在传统危险标志物的基础上提供了新的信息国际研究一致(yīzhì)结果共四十八页国际权威指南(zhǐnán)一致推荐2010ACCF/AHA无症状成人心血管风险评估指南可考虑(kǎolǜ)对中等风险的无症状成人进行Lp-PLA2

检测以进一步评估风险。2011AHA/ASA卒中一级预防指南在未有心血管疾病的患者中检测炎症指标如hs-CRP或Lp-PLA2可以鉴别出有较高卒中风险的患者。2012AACE高脂血症管理与动脉粥样硬化预防指南一些研究证明，在有必要进一步对患者进行风险评级时，Lp-PLA2检测比hs-CRP具有更高的特异性。2012ESC欧洲心血管疾病预防临床实践指南对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测

Lp-PLA2

以进一步评估风险。共四十八页国内专家一致(yīzhì)认可——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)是血管内皮炎症的独立危险因子，也是目前检测血管内皮炎症的新指标。对心脑血管栓塞性疾病的预测(yùcè)、治疗和预后的判断具有重要意义。”中华医学会心血管病学分会主任委员，著名心血管专家胡大一教授中国工程院院士，美国心脏病学院院士，著名心血管专家张运教授——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)已成为AS抗炎治疗的新靶点，初步研究发现通过抑制磷脂酶A2，可以减少血管壁脂质的沉积和巨噬细胞的浸润。”摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告共四十八页临床(línchuánɡ)一线期待已久“心血管医生最关心的一点就是高危患者心血管事件发生风险。如果能够早期预防(yùfáng)，在发生重大事件之前把危险控制住，那就可以减少病死率。但目前临床常用的检测指标如肌苷激酶等出现时为时已晚，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为临床提供了一个预警及风险评估的有力工具。”——北京大学第三医院心内科主任高炜“现有的检验指标如胆固醇、LDL、HDL确实在心血管疾病风险评估方面发挥一定作用，但并不全面。甚至有些方法如血小板活化检测还不够稳定。因此实验室迫切需要一个方法稳定、特异性强又独立于胆固醇之外的风险评估方法，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测就提供了这样一个方法。”——

中国医师协会检验医师分会会长丛玉隆

“我国一年心外科手术量已达到18.5万例，但还远不能满足我国患者需要，原因就在于我国心血管疾病发病率太高，每年新增冠心病患者300万。因此预防的作用比治疗更重要，并且其社会效益要远高于手术。而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为心血管疾病预防提供了一个有力武器。”——中国医师协会心脏外科医师分会副会长

孙立忠共四十八页2011.7.16

北京(běijīnɡ)钓鱼台国宾馆共四十八页国家863高科技成果中国(zhōnɡɡuó)首家和唯一上市产品

中国首家和唯一上市产品

国家863科技攻关项目高科技成果快速监控和预测心脑血管栓塞性疾病

填补中国心脑血管疾病快速预警检测的空白

与会专家：

中国人民解放军总后卫生部原副部长(bùchánɡ)陈新年广东省卫生厅副厅长耿庆山中国医药生物技术协会副会长于修成

科技部火炬高技术产业开发中心处长雷庆西中国医师协会心脏外科医师分会副会长

孙立忠中国医师协会检验医师分会会长丛玉隆北京大学第三医院心内科主任高炜北京大学首钢医院心血管医学中心主任王宏宇卫生部北京医院心内科主任许峰共四十八页心脑血管疾病是造成人类死亡的主要(zhǔyào)病因男性女性恶性肿瘤心脏病脑血管病呼吸系统疾病恶性肿瘤(èxìngzhǒngliú)心脏病脑血管病呼吸系统疾病来源：《2012中国卫生统计年鉴》来源:美国国家健康中心2012年统计数据共四十八页心脏猝死：经常(jīngcháng)是首次心脏病爆发

MyerburgRJetal.Circulation.2012;125:1043-1052共四十八页研发(yánfā)背景

动脉粥样硬化（AS)是造成心脑血管疾病的主要原因

AS是一种炎症反应性疾病在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性介质的参与

寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能

够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度目前脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseA2，Lp-PLA2)已被国际(guójì)专家公认为一种新

的炎性反应标志物共四十八页内容(nèiróng)心脑血管疾病现状及研发背景(bèijǐng)Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系临床研究临床意义康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒简介产品详解与注意事项

共四十八页

Lp-PLA2

脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。分子量为45KDa

。由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节。水解(shuǐjiě)ox-LDL-C上的磷脂，生成促炎物质lyso-PC和ox-FA，因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。共四十八页Lp-PLA2在粥样斑块形成(xíngchéng)中的作用粥样斑块形成血管(xuèguǎn)腔氧化型LDL内膜中膜Lp-PLA2溶血卵磷脂氧化脂肪酸泡沫细胞单核细胞粘附分子巨噬细胞细胞因子共四十八页稳定斑块vs易损斑块组织学特征(tèzhēng)对比薄纤维帽厚纤维帽小型(xiǎoxíng)坏死脂质池Lp-PLA2Lp-PLA2血管腔血管腔血栓大型坏死脂质池

稳定斑块Lp-PLA2

含量较低(深色染色)纤维帽厚，胶原含量高小型坏死脂质池炎症程度较轻

易损斑块Lp-PLA2

含量较高(深色染色)纤维帽薄，胶原含量低大型坏死脂质池炎症程度较重CorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)共四十八页斑块易损性与其(yǔqí)Lp-PLA2含量成正比疾病进展Lp-PLA2

染成棕红色早期(zǎoqī)斑块出现脂质池稳定斑块纤维帽变薄，出现小型坏死脂质核易损斑块薄纤维帽破裂斑块血管中出现血栓KolodgieF,etal.ArteriosclerThrombVascBiol2006血栓共四十八页>25已发表研究结果显示:Lp-PLA2升高导致(dǎozhì)心血管事件风险加倍Packard(WOSCOPS),NEnglJMed2000–CHDBlake(WHS),JAmCollCardiol2001–CHDBlankenberg(AtheroGENE),JLipidRes2003-CADBallantyne(ARIC),Circulation2004-CHDLDL<130Winkler,J

ClinEndocrinologyandMetabolism2004–CHDOei(Rotterdam),Circulation2005–CHD

Brilakis(MayoHeart),EurHeartJ2005–CHDBallantyne(ARIC),ArchInternMed2005–StrokeOei(Rotterdam),Circulation2005–StrokeWinkler(LURIC),Circulation2005–CHDKhuseyinova(HELICOR),Atherosclerosis2005–CHDKoenig(KAROLA),ArteriosclerThrombVascBiol2005–CVDMay(IntermountainHeart),AmHeartJ-CHDJenny(CHS),AHA-EPIAbstract2006–MIElkind(NOMAS),ArchInternMed2006–StrokeO’Donoghue(PROVEIT),Circulation2006–CVDCorsetti(THROMBO),ClinicalChemistry2006-CHDGerber(OlmstedCounty),ATVB2006-DeathS/PMIOldgren(GUSTO/FRISC),EurHeartJ2007-AcuteACSSabatine(PEACE),AHA-ScientificSessions2006-CVDPersson(Malmo),ArteriosclerThrombVascBiol2007-CVDMockel(NOBIS-II),ClinResCardiol2007–CVDHatoum(Nurse’sHealthStudy),CircSuppl2007–MIDaniels(RanchoBernardo),JACC2008–CHD0.51.52.52.01.03.03.54.04.5CorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)共四十八页Lp-PLA2前瞻性研究(yánjiū)汇总分析

Lancet（柳叶刀）2010

32项前瞻性研究

79,036

名受试者

每年新增474,976

名患者存在(cúnzài)心脑血管风险17,346次血管与非血管事件TheLp-PLA2StudiesCollaboration,Lancet2010;375:1536–44.共四十八页Lp-PLA2前瞻性研究汇总(huìzǒng)分析

Lancet(柳叶刀）2010

Lp-PLA2

水平与心血管疾病呈显著线性相关。相对基线，Lp-PLA2每提高一个标准差所导致冠心病风险比的增加值与传统风险因子血压和非HDL-C相当(xiāngdāng)。

Lp-PLA2是独立的心血管疾病风险预测指标，不受其他生物指标的影响，也为炎症、动脉粥样硬化与心血管疾病之间的联系提供了新的佐证。TheLp-PLA2StudiesCollaboration,Lancet2010;375:1536–44.共四十八页Lp-PLA2vshs-CRPLp-PLA2hs-CRP

血管内皮炎症的标记物由巨噬细胞产生在血管炎症过程的早期阶段启动不受其他炎症性疾病影响是一个可用于冠心病药物干预治疗的特异靶点全身性炎症的标记物全身炎症急性期由肝脏产生在心血管疾病中的具体作用不清楚

在所有炎症性疾病患者中均升高在干预治疗中不是一个特异靶点共四十八页Lp-PLA2vsHCYLp-PLA2HCY

血管内皮炎症的标记物当血管内皮受损时，由巨噬细胞产生在血管炎症过程的早期阶段启动，具有促进炎症和动脉粥样硬化的作用血管内皮炎症的特异性指标，不受年龄、性别、饮食影响是一个可用于冠心病药物干预治疗的特异靶点人体蛋氨酸代谢的中间产物与体内一碳单位代谢有着密切关系在心血管疾病中的具体作用不清楚，会影响体内许多物质的甲基化过程，从而影响机体正常代谢受遗传、饮食、性别、年龄、肾功能等多种因素影响在干预治疗中不是一个特异靶点共四十八页Lp-PLA2生物(shēngwù)变异性低0%10%20%30%40%50%0%10%20%30%40%50%%

withElevatedBiomarker%

Intra-IndividualCVLp-PLA2

>250ng/mLhsCRP

>3mg/LLp-PLA2

CRP

LDLHDLTG4%46%10%7.4%4.7%42.6%22.8%90份未患心脏病健康(jiànkāng)人群的血样43份健康成人4周7次抽血血样LermanA,McConnellJP.AmJCardSupplement2008.共四十八页冠心病患者(huànzhě)LDL-C水平：72%的患者低于130mg/dL<130LDL-C(mg/dL)>130LDL-C(mg/dL)GetWiththeGuidelinesdatabase,levelsatadmissionSachdevaetal.AmHeartJ2009;157:111-7.e2共四十八页总胆固醇及LDL-C在冠心病预测(yùcè)中的局限性

Framingham心脏研究(yánjiū)——26年随访数据显示：35%冠心病患者的总胆固醇水平<200mg/dL180%发生MI患者与未发生MI患者含有相似的胆固醇水平冠心病患者LDL-C水平的中值为150mg/dL1仅有25%的早发性冠心病患者的发病与LDL-C水平升高有关2

1CastelliW,Atherosclerosis19962GenestJJr,etal.JAmCollCardiol1992共四十八页胆固醇并非卒中的可靠(kěkào)预测指标LDL胆固醇ARIC1PROCAM2BIPREGISTRY3P=0.20P=NSP>0.05

未患卒中

卒中患者(huànzhě)P=0.44P=NSP>0.05BallantyneCM,etal.AHA2004BergerK,etal.Stroke1998TanneD,etal.Circ.20014.BowmanTS,etal.Stroke1998OeiHH,etal.Circ.2005WannametheeSG,etal.Stroke2000共四十八页传统(chuántǒng)风险因子在冠心病患者中的流行程度0RiskFactors19.4%1RiskFactor43%2RiskFactors27.8%3RiskFactors8.9%%4RiskFactors0.9%N=87,869分析的四个传统风险因子:高血压，吸烟，高血脂症，糖尿病KhotUM,etal.JAMA2003.62.4%

冠心病患者仅含有0-1个传统(chuántǒng)风险因子共四十八页Mayo研究:利用(lìyòng)Lp-PLA2预测心梗后生存期0.03.04.05.06.01.02.05.4*2.21.0≤166

ng/mL167-218

ng/mL≥219

ng/mL*p<0.001aftermultivariateadjustmentforage,

sex,hypertension,BMI,diabetes,smoking,LDL-CGerberY,etal.ArteriosclerThrombVascBiol2006

HazardRatio发生(fāshēng)MI后，高水平Lp-PLA2患者1年内死亡风险是低水平患者的5倍共四十八页Mayo研究：利用Lp-PLA2

预测(yùcè)冠心病患者主要心血管事件发生率95%

的Lp-PLA2<200ng/ml患者(huànzhě)4年内未发生心血管事件BrilakisESetal.MayoHeartStudy.EuroHeartJ2005共四十八页北曼哈顿卒中研究(NOMAS)：

利用Lp-PLA2

预测(yùcè)卒中复发风险0.00.51.01.52.02.5HighLp-PLA2Highhs-CRPRiskRatio(Highestvs.LowestQuartile)0.71.02.1(95%CI1.04-4.18)1.9(95%CI1.01-3.42)复发性卒中事件(shìjiàn)

N=80,其他心血管事件N=122Adjustedfordemographics,traditionalriskfactors,strokeseverity,andbothmarkers复发性卒中首发卒中后任何心血管事件ElkindMS,etal.ArchIntMed2006.Lp-PLA2

升高，卒中复发风险加倍共四十八页一级预防——对急性(jíxìng)冠脉综合征的预测评价

经冠脉造影证实无冠脉狭窄者(对照)28例、急性冠脉综合征(ACS)27例、稳定型心绞痛(SAP)28例。检测血浆Lp-PLA2

水平(shuǐpíng)。组别 例数 Lp-PLA2(ng/ml)急性冠脉综合征(ACS) 27 706.00±149.91*

稳定型心绞痛(SAP) 2

427.75±44.58*

无冠脉狭窄者(对照组)

28

267.69±92.67

注:与对照组比较*P＜0.001陈锦峰,等.广东医学2011;32(10):1263共四十八页二级预防——对进展(jìnzhǎn)性脑梗死的预测评价

168

例急性脑梗死(ACI)患者每天进行NIH卒中量表(NIHSS)评分，其中进展性脑梗死40例，稳定性脑梗死128例。检测血浆(xuèjiāng)Lp-PLA2

水平。

组别 例数 Lp-PLA2(μg/L)ACI组 168 12.058±7.104*进展性脑梗死组 40 17.304±10.630*Δ稳定性脑梗死组 128 10.419±4.576正常对照组 72 7.268±3.112

注:与正常对照组比较*P＜0.01;与稳定性脑梗死组比较△P＜0.01王磊,等.临床神经病学杂志2011;24(4):309.共四十八页病情评估——对神经功能损伤(sǔnshāng)程度的评价

选择动脉硬化性脑梗死(ACI)患者128例和未卒中对照者88例为研究对象，检测血浆Lp-PLA2的水平。按NIH中风(zhòngfēng)量表(NIHSS

评分)进行神经功能缺损程度评估。分析神经功能缺损程度与血浆Lp-PLA2水平相关性。结果r=0.829，P=0.001。组别 例数 Lp-PLA2(μg/L)轻型梗死组 32 53.45±5.47*中型梗死组

66 65.68±6.07*重型梗死组

30 77.11±5.12

注:与重型梗死组比较*P<0.05

梁江红,等.实用医学杂志2009;25(14):2264.共四十八页

疗效评价(píngjià)不同剂量阿托伐他汀治疗急性脑梗死

选择急性脑梗死患者86例，随机分为2组：阿托伐他汀常规剂量组43例：20mg/天，大剂量组43例：40mg/天，分别于治疗前及治疗14天后测量(cèliáng)患者血浆Lp-PLA2

水平。另选择43例健康体检者为对照组，不予阿托伐他汀治疗。阿托伐他汀治疗前后血浆Lp-PLA2(μg/L)变化的比较常规治疗组 大剂量组对照组急性脑梗死组治疗前治疗后治疗前治疗

30.52±2.9143.95±5.70#44.22±6.2537.63±4.53*43.69±5.1635.63±4.16*

注:治疗前和治疗后比较*P<0.05；与对照组比较#P<0.05陈军,等.临床医学工程2011;18(7):982共四十八页康尔克Lp-PLA2定量检测(jiǎncè)试剂盒特点

准确、可靠、重复性好灵敏度高简易、快捷，静脉取血2-5ml送检，1.5小时出结果

无需空腹，任何时间均可取血性能达到美国同类产品水平性价比高：美国同类产品临床检测收费(shōufèi)250美元左右，约合

人民币1500元，本产品仅为

350元人民币，医保、新农合、公费医疗均能报销。共四十八页临床检测(jiǎncè)人群

传统风险评级已经确定为中危的人群患者——增强危险级别

接受他汀类抗炎治疗(zhìliáo)的患者——评估—调整—效果

高血压患者

——评估—调整—效果

发生过中风、ACS、AMI等急性不良事件的患者——预测二次事件-强化治疗方案共四十八页临床实践举例(jǔlì)评估通过传统危险(wēixiǎn)因素检测的患者>175ng/ml≤175ng/ml≤175ng/ml>175ng/ml<4.0mmol/L<3.3mmol/L<2.5mmol/L<1.8mmol/L测试测量中高危患者的Lp-PLA2

水平治疗达到合适LDL-C水平共四十八页名

称规格主要组成成份96人份48人份24人份1．Lp-PLA2酶联反应板1块（96孔）1块（48孔）1块（24孔）Lp-PLA2包被抗体2．标准品11瓶，70ul，浓度：1000ng/ml1瓶，50ul，浓度：1000ng/ml1瓶，50ul，浓度：1000ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液3．标准品21瓶，70ul,浓度：500ng/ml1瓶，50ul,浓度：500ng/ml1瓶，50ul,浓度：500ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液4．标准品31瓶，70ul,浓度：250ng/ml1瓶，50ul，浓度：250ng/ml1瓶，50ul，浓度：250ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液5．标准品41瓶，70ul,浓度：100ng/ml1瓶，50ul,浓度：100ng/ml1瓶，50ul,浓度：100ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液6．标准品51瓶，70ul,浓度：50ng/ml1瓶，50ul，浓度：50ng/ml1瓶，50ul，浓度：50ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液7．标准品（空白）1瓶，70ul,浓度：0ng/ml1瓶，50ul,浓度：0ng/ml1瓶，50ul,浓度：0ng/ml牛血清白蛋白,磷酸缓冲液8．稀释液（10倍）1瓶,1.5ml

1瓶,1.0ml

1瓶,0.5ml牛血清白蛋白,磷酸缓冲液9．酶标记物1瓶，15ml

1瓶，7.5ml

1瓶，4ml辣根过氧化酶标记抗体，牛血清白蛋白,磷酸缓冲液10．洗涤液（20倍）1瓶，30ml

1瓶，15ml1瓶，8ml

磷酸缓冲液，吐温11．显色液1瓶，10ml

1瓶，5ml

1瓶，2.5ml四甲基联苯胺12．终止液1瓶,6ml

1瓶，3ml

1瓶，2ml硫酸13．说明书一份一份一份

产品(chǎnpǐn)组成及安全性

本试剂盒中采用的试剂都不具有(jùyǒu)毒性、致畸致突变性，也不含有人血液制品，因此不具有(jùyǒu)生物学危害，但仍需作为一般生物试剂加以防护。共四十八页检验(jiǎnyàn)原理——ELISA共四十八页样品(yàngpǐn)处理样品收集、处理和保存：血浆：用EDTA抗凝管取血2ml，1500r/min离心10分钟，收集上清液。血清：用普通(pǔtōng)管或促凝管取血2ml，4℃下放置30分钟后，1500r/min离心10分钟，收集上清液。保存:血浆（清）如不即时检测，则须于-20℃保存，并避免反复冻融。共四十八页操作方法1）

从冰箱中取出试剂盒，室温(shìwēn)平衡20min，将标准品离心，1000r/min，1min2）分别加入80ul稀释液（1倍)和20ul待测样品或标准品于反应孔内,混匀,37℃温育20min3）弃去孔内液体，每孔加300ul洗液(1倍），振荡20-30sec后弃去洗液，重复4次，拍干残液4）加入100ul酶标记物，混匀，37℃温育30min

5）重复步骤3）

6）每孔加入显色液100ul，混匀，37℃温育20min，避光7）加入50ul终止液8）立即用酶标仪在450nm条件下测定各孔OD值9）以OD值为纵坐标（Y），相应Lp-PLA2标准品浓度为横坐标（X），制作标准曲线10）根据样品的OD值计算得出样品的Lp-PLA2含量共四十八页检验结果(jiēguǒ)的解释对临床的检测结果进行统计分析之后，175ng/ml以下正常,

175ng/ml以上为危险。如样本的Lp-PLA2的含量低于临界值，则视为正常；如高于临界值则提示(tíshì)为其动脉可能有粥样硬化炎症，且炎症与Lp-PLA2的含量成正比。共四十八页产品(chǎnpǐn)性能指标

剂量-反应曲线(qūxiàn)的线性

用logistic数学模型或其他数学模型拟合，剂量-反应曲线相关系数（r）应不低于0.9900。r2=0.99998r2=0.97917共四十八页