《碳酸氢钠注射液的药学探究》12000字（论文）

IV1绪论1.1研究目的及意义碳酸氢钠注射液是一种治疗代谢性酸中毒的药物，它可以提高血液中的碳酸氢根，中和氢气，改善酸中毒的症状；碳酸氢钠注射液能增加尿液pH，能让尿液中的尿酸、血红蛋白等成分不容易沉淀，减少肾毒性；同时，还可治疗急性肿瘤溶解综合症(ATLS)，ATLS是指在肿瘤治疗过程中，由于肿瘤负荷过重或对化疗过于敏感，大量肿瘤细胞死亡后释放的细胞内物质所引起高血钾症、高尿酸血症、高磷血症以及低钙血症。该品种为临床必需品种。《国家药品安全“十二五”规划》中规定，一致性评价要求仿制药品应与原研药品质量和疗效一致。目前，国内碳酸氢钠注射液上市药品浓度主要为5%，美国和日本碳酸氢钠注射液上市药品浓度主要为8.4%、7.5%。国内尚无8.4%浓度碳酸氢钠注射液品种上市销售。8.4%碳酸氢钠注射液中碳酸氢根浓度为1mol/L，便于医护人员在治疗时计算补液体积。故本项目将采取以日本大冢为原研产品，对8.4%的碳酸氢钠注射液进行相关药学研究。1.2包装材料8.4%碳酸氢钠注射液质量与包材密切相关，故包材的选择非常重要。《中国药典》2020年版收录的碳酸氢钠注射液规格有100ml、250ml、500ml，浓度为5%。美国和日本均上市了8.4%浓度，规格分别为10ml、20ml、50ml、100ml和250ml。对于本品种注射液的包材：美国主要为用玻璃容器，日本大多选择双层包装，内层为非PVC共挤输液袋，外层为阻气外袋，中间充有二氧化碳气体，以维持药液酸碱平衡，使药液pH稳定。1.2.1玻璃包装材料注射用玻璃包材料主要有：中性硼硅玻璃、高硼硅玻璃、钠钙玻璃、低硼硅玻璃等。其中，耐水性的硼硅玻璃、耐化学腐蚀性和热稳定性较好。因此，在国外，大多数采用的是硼硅玻璃。由于碳酸氢钠会侵蚀玻璃瓶的内壁，使其外层的保护层受到侵蚀，长期侵蚀会使保护层受损，从而使药瓶中的硅酸盐、游离碱沉淀而形成玻屑状的脱落或雾状的白色斑点，从而影响到注射剂的质量。若输液瓶内壁发生脱片，较大的颗粒进入体循环后会引起微循环或局部循环障碍，进而引发血管堵塞，组织缺氧后导致血管炎症。碳酸氢钠注射液与普通卤化丁基胶塞的相容性较差，在储存过程中胶塞表面的低分子材料容易渗进药液中，造成可见异物如小白点、小白块等增加，因此生产过程中通常使用丁基覆膜胶塞。玻璃瓶针剂的制备要经过洗瓶、干燥、灌装、塞入橡胶塞子等工序，工序繁琐，易产生二次污染。在运输过程中，玻璃瓶可能因碰撞产生隐性裂缝，造成污染。使用玻璃瓶注射液时需要先插入空气针，建立空气通路，因此微生物和微粒可能进入输液系统中。尤其当患者存在免疫功能缺陷时，易引发致命性的感染疾病。此外，生产玻璃类容器时能源消耗大，环境污染重。因此从输液安全性和环保的角度考虑，本品不适宜使用玻璃输液瓶装。1.2.2聚丙烯(PP)或聚乙烯(PE)材料聚丙烯和聚乙烯具有轻便、不易破损和便于运输的特点，而被广泛用于注射液药品的包装材料，PP、PE等可从根本上解决玻璃瓶易破碎、易脱片、易形成玻片等问题。同时，PP和PE是一次性的，不会产生重复使用后的交叉污染问题。和玻璃瓶子一样，当使用PP或PE材质的注射器时，为了平衡瓶内和外界气压，外界空气会进入注射液管路中，因此也存在安全风险。此外，PP材质的耐受性较差，低温下的瓶身抗脆性较差，在低温环境中运输和使用中容易发生断裂；PE材质耐高温，耐高压蒸气消毒。PP和PE材料生产成本低，生产自动化程度高，易进行质量控制。针对不同需求可添加不同的添加剂提高注射液瓶的性能，如添加抗氧剂提高抗氧化性；加入成核剂或者增塑剂可调节材料的硬度；加入透明剂提高透明度等，这大大提高了注射液产品的质量稳定性。1.2.3聚氯乙烯(PVC)软袋PVC软袋因其高纯度、高质量的特点，曾经是大容量针剂包材的主力产品。1998年WHO建议，大容量针剂的包装必须采用软袋子包装。由于软袋的缩口性和弹性好，因此在输液过程中，药液流出的过程中软袋也同步收缩，不需要进入外界空气输液管路平衡气压，降低了药液污染的可能性。PVC材料中添加的部分化学成分危害人体健康，比如作为增塑剂使用的邻苯二甲酸二辛酯，以及作为粘合剂使用的环己酮和异丙基苯，对人体都具有致癌性。在药物相容性方面，普通医用PVC和非邻苯增塑PVC与强极性药物相容性差。PVC材质水气透过性高，从而影响大容量注射液的存储效期。综上所述，自2000年9月起国家食品药品监督管理局（CFDA）停止审批PVC软袋包装的注射液生产线。并于2010年出台规定，禁止注射液包材中含有PVC成分。至此，PVC软袋注射液包材退出历史舞台。1.2.4非PVC多层共挤膜软袋非PVC多层共挤膜软袋是最新的全密闭静脉注射液产品包材。由于软袋具有密封性强，输液过程中与外界隔绝的优势，非PVC材质注射液软袋逐渐成为大容量注射液包材的主流。在美国市场该包材市场占有率为99.5%、欧洲98%、韩国96.2%、日本60%，相比之下，在国内非PVC包材还未成为大容量注射液包材的主流。因此，非PVC多层共挤膜软袋在国内具有很大的市场潜力。非PVC多层共挤膜软袋是由三层或五层复合共挤膜软包装而成，三层共挤膜分别为提高共挤膜机械强度的聚酯(PET)外层，能够阻隔水气的聚丙烯(PP)或聚酰胺(PT)致密膜中层，和聚丙烯(PP)或聚乙烯(PE)内层。五层共挤出输液用袋子是由酯共聚物/乙烯-丙烯酸树脂（EMMA)/聚乙烯/PE/改性聚乙烯-丙烯-聚合物五层共挤输液用薄膜。非聚氯乙烯多层共挤膜的内层是一种完全无毒性的、不溶于水的。而中层和外层所用的高分子材料可以起到阻隔水气、提高柔韧性和增强机械强度的作用。此外，在共挤薄膜制造过程中，三种物料的熔点由内向外逐步提高。在热熔工艺中，从内部到外部的最里面的物料进行热熔。而PVC材料是从外部到内部进行焊接的，因此，与PVC薄膜相比，无PVC薄膜具有更紧密、更坚固、更好的热封性。药液渗漏率低。这改善了PVC膜水气透过率高的缺点，对保持药液的稳定性和药效期间的品质具有重要的意义。非聚氯乙烯多层共挤膜具有良好的耐热稳定性，因此可以进行高温杀菌。非聚氯乙烯多层共挤膜与大部分药液具有良好的相容性，且不会产生化学反应，对药物的吸附能力较弱，膜材成分向药液的迁移能力较差。另外，无聚氯乙烯多层共挤膜不含有任何增塑剂，使用后易处理且污染少。由于包装材料的创新，使非PVC共挤膜软袋成为大容量注射液包材的更佳选择。由于非PVC材料柔韧性好，若在各腔室之间虚焊，该连接处可在一定压力下开通，能够实现各腔室之间液液或固液的混合。粉-液双腔袋、液-液双腔袋、液-液三腔袋是继单腔软囊后又发展起来的。这一包装方式的革新，可以杜绝在配液过程中的交叉污染，减少用药成本和劳动强度。综上，8.4%碳酸氢钠注射液选择非PVC共挤输液袋作为内袋。由于非PVC共挤膜软袋对CO2的透过率高，在长期储存的过程中，碳酸氢钠分解后产生的CO2可透过共挤膜扩散到空气中，使药液pH值上升。因此，在共挤膜包装外还需一层阻气外袋，非PVC共挤膜软袋作为内袋，向内外袋中间充入二氧化碳气体为稳定注射液的pH值，提高产品稳定性。1.38.4%碳酸氢钠注射液工艺控制重点因为H2CO3、CO32-和HCO3-的在不同的pH条件下，不同浓度的碳酸钠溶液中HCO3-的浓度与pH值有很大的关系。H2CO3,CO32-,HCO3-在不同pH下的分布，如图1-1所示。图1-1不同pH条件下H2CO3、CO32-和HCO3-分布图由图1-1可知，当pH值为8.3时，HCO3-是溶液中的主要形式。CO32-含量在pH>8.3时增加，H2CO3的含量降低；pH低于8.3，CO32-含量减小，H2CO3含量增大。因此，为保证产品质量，应严格控制产品pH值。对于溶液中碳酸氢根含量的另一影响因素是温度。碳酸氢钠遇热不稳定，易分解为碳酸钠，水和二氧化碳，导致溶液pH上升。反应方程式如图1-2。2NaHC图1-2碳酸氢钠受热分解的化学方程式配液溶解和灭菌过程中，外界环境温度波动较大，这会影响溶液中碳酸氢钠的含量。随着温度上升，溶液中HCO3-分解，反应得到的CO2气体易从溶液中挥出且反应产物CO32-碱性强于底物HCO3-，故溶液pH值上升。一般药品的配液过程中，溶媒温度以15-20℃为宜，而8.4%的NaHCO3注射液中的碳酸氢钠的含量已经接近20℃时碳酸氢钠的溶解度，NaHCO3溶解度见表1。因此为提高生产效率，通常会加热注射用水以加速原料溶解，表1-1NaHCO3溶解度表温度(℃)01020304050溶解度(g/100ml)6.98.159.611.112.714.45故在实际配液过程中，为加速溶解同时尽可能减少HCO3-受热分解，应控制配液温度。采用不同的过滤方式也会导致溶液pH值变化，采用减压过滤或加压过滤来加快过滤速度会使CO2损失过多。因此，使用高位静压过滤有利于药液pH值稳定。为了控制pH值的稳定性，还可以考虑在配液后向溶液中通入无菌CO2气体。同时，日本大冢制药有限公司生产的8.4%碳酸氢钠注射液在内外袋之间贴有指示剂试纸，若外袋发生破损使CO2泄露，则可通过指示剂贴纸的颜色变化判断产品的pH是否合格。1.4主要研究内容本课题目前已确定8.4%碳酸氢钠注射液的处方和工艺，还需对原料药进行检查，并将自研制剂与原研制剂进行质量对比研究，评价自研制剂的质量是否与原研制剂保持一致。本文选择日本大冢制药有限公司生产的メイロン静注8.4%作为原研制剂，参照《中国药典》2020版和原研制剂的质量标准，对自研制剂进行原料药的检查，建立碳酸氢根的含量检查方法，进行自研制剂与原研制剂的对比研究。对比研究包括：性状、鉴别、pH的测定、含量测定、重金属和砷盐限度的控制。此外，为考察自研制剂在低温下的稳定性，进行冻-融试验。2原料药检查2.1仪器与试药2.1.1仪器超纯水制造机（四川优普超纯科技有限公司）；万用电炉（北京市永光明医疗仪器有限公司）；万分之一天平（ACCULABALC-110.4）2.1.2试药药用碳酸氢钠（原产地：泰国）；注射用水（自制）；酚酞（上海化学试剂采购供应站试剂厂）；氢氧化钙（成都市科龙化工试剂厂）。2.2实验方法与结果2.2.1性状《中国药典》2020年版中规定，碳酸钠原料药是一种无味的白色晶体状粉末，溶于水，不溶于酒精。该批原料检测结果：为白色结晶、无臭；在水中溶解，在乙醇中不溶。2.2.2鉴别参考《中国药典》2020年版中规定，原料药应显钠盐和碳酸氢盐的鉴别反应。钠盐：将铂丝浸入盐酸，沾上原料药，于无色火焰中点燃，呈亮黄色。碳酸氢盐：碳酸氢盐：取原料药1.0g溶于20ml水后，加入稀盐酸，有大量气泡生成即暴沸，将二氧化碳气体导入氢氧化钙溶液中，有白色沉淀生成。该批原料进行了鉴别：钠盐和碳酸氢盐均呈正反应。2.2.3检查碳酸根：按日本药典2016年版(JP17)中方法，在不超过15℃的环境下，将1.0g碳酸氢钠原料药溶解于20ml新鲜煮沸并冷却的水中，轻轻搅拌溶解后。加入2.0ml0.1mol/L的盐酸和2滴酚酞指示剂。没有立即出现红色，即符合标准。经检验，该批原料没有立即出现红色。碱度：按《中国药典》2020年版中方法，取本品0.20g，加水20ml使溶解，按通则0631测定，pH值不得过超过8.6。经检验，该批原料pH值为过8.1，符合要求。2.3本章小结自研制剂所用原料药经过性状、鉴别、检查后，符合《中国药典》2020年版和JP17的规定，可以用于后续实验以及工业生产中。38.4%碳酸氢钠注射液的处方与制备3.1仪器与试药3.1.1仪器超纯水制造机(四川优普超纯科技有限公司);恒温水浴锅(W201D型，上海申顺生物科技有限公司);万分之一天平(ACCULABALC-110.4).3.1.2试药药用碳酸氢钠(原产地:泰国);注射用水(自制);盐酸(四川西陇科学有限公司)3.28.4%碳酸氢钠注射液的处方实验室已确定8.4%碳酸氢钠注射液的处方，如表3-1所示。表3-18.4%碳酸氢钠注射液的处方名称处方量作用碳酸氢钠（NaHCO3）84.00g主药注射用水加至1000ml溶剂3.3制备工艺按处方量将碳酸氢钠投入约处方量80%的加热至40±5℃注射用水中，搅拌使碳酸氢钠全部溶解后，再加入注射用水至处方量。药液经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装。121℃，12min热压灭菌。3.4本章小结日本大冢制药有限公司生产的メイロン静注8.4%含有碳酸氢钠、注射用水；pH值范围7.0~8.5。《中国药典》2020年版中规定，5%碳酸氢钠注射液pH值应为7.5-8.5（通则0631）。综合日本原研的制剂标准和《中国药典》标准，确定本品中控pH值范围为7.7-8.3。日本的主要包装形式为共挤输液袋+外侧阻隔袋，可以避免溶液中碳酸氢钠分解产生的二氧化碳气体释放，保持注射液碳酸氢钠pH的稳定。因此，本品中无需加入稳定剂，安全性有了一定的提高。部分国产碳酸氢钠注射液会加入乳酸以稳定pH值，但由于加入乳酸之后会影响碳酸氢钠注射液的澄明度，且经过测试，在内外袋之间充入二氧化碳后可以起到稳定pH值的作用，无需再加入pH稳定剂。48.4%碳酸氢钠注射液的分析方法研究4.1仪器与试药4.1.1仪器超纯水制造机(四川优普超纯科技有限公司);万用电炉(北京市永光明医疗仪器有限公司);恒温水浴锅(W201D型，上海申顺生物科技有限公司);万分之一天平(ACCULABALC-1104)4.1.2试药药用碳酸氢钠(原产地:泰国);无水碳酸钠AR(广东省化学试剂工程技术研究开发中心);盐酸AR(四川西陇科学有限公司);溴甲酚绿(成都科隆化学品有限公司);甲基红(天津市福晨化学试剂厂)4.2试液的配制甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：用0.1%的甲基红乙醇20ml，加0.2%的溴甲酚绿乙醇30毫升，并将其摇匀。溴甲酚绿-甲基红指示器的颜色变化是：pH5.2以上时，蓝绿色；pH5.0时，淡紫灰到淡蓝色；pH4.8时，带淡蓝色的淡粉红色；pH4.6时，淡粉红。盐酸滴定液（0.5摩尔/升）：取90毫升的盐酸，加入适量的水，搅拌均匀。将干燥的恒重碳酸钠约0.5克，精密称量，加入50ml水，加入10滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂，用本液滴定，直到溶液从绿色变成紫红色，再用此液体滴定2分钟，直到液体从绿色变成深紫色，然后再滴定，直到溶液从绿色变成深紫色为止。滴定结果见表4-1。由表4-1可知，盐酸滴定液的浓度为0.5592mol/L。表4-1盐酸滴定液的标定结果序号123无水碳酸钠用量(g)0.50050.50050.5001滴定液消耗体积(ml)16.9016.9016.85本液浓度(mol/L)0.55880.55880.5600平均值0.5592RSD(%)0.1%4.3专属性验证专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特征。根据本品处方，本品除了碳酸氢钠和注射用水外，不含其他辅料。精密量取空白纯化水6ml于锥形瓶中，加水至50毫升，加入10滴甲基红-溴甲酚绿，用0.5592摩尔/升的盐酸滴定液，沸腾2分钟，冷却到室温，然后再滴定，直至液体从绿色变成深紫色，连续三次，滴定的结果如表4所示。空白样品所需盐酸滴定液体积极少，证明该方法对碳酸氢根含量测定无干扰，说明此方法专属性良好。表4-2专属性验证结果序号滴定液消耗体积(ml)平均值(ml)10.070.0620.0530.054.4线性和范围将0.25克，0.34克，0.42克，0.50克，0.59克精密称量，溶解在50毫升的去离子水中。用0.5592摩尔/升的盐酸滴定液，加入甲基红-溴甲酚绿的指示剂10滴，使其从绿色变成紫红色，再煮沸2分钟，冷却到室温，然后继续滴定直至溶液从绿色变成深紫色。滴定结果见表5。表4-3碳酸氢根含量测定线性考察结果NaHCO3取样量（g）00.25330.33690.42020.50410.5879HCO3-质量（g）00.18390.24460.30510.36600.4269滴定液消耗体积（ml）0.075.407.259.0510.7512.55回归方程y=89.2600x+0.0644r=0.9999图4-1碳酸氢根标准曲线用HCO3作为横坐标，用盐酸滴定液的消耗量作为纵坐标进行回归，得到了Y=89.2600×0.0644、r=0.9999的回归公式。从回归公式可以看出，在0.2533克至0.5879克的碳酸钠样品中，即碳酸氢根取样量在0.1839g~0.4269g的范围内，样品中碳酸氢根的量与所消耗盐酸滴定液的体积线性关系良好4.5精密度4.5.1重复性试验分别精密量取自研制剂6份各6ml，加入水让其达到50毫升，加入10滴甲基红-溴甲酚绿的指示剂，用0.5592摩尔/升的盐酸滴定液，加热2分钟，待冷却到室温后，再滴定，直到溶液从绿色变成深紫色。于一天内滴定，考察方法的重复性。滴定结果见表5。被测成分含量水平在100%时，重复性RSD限度为1%。从表6可以看出，在连续6次的连续分析中，所得到的相对标准偏差为0.3%，这表明本方法的重现性达到了要求。表4-4碳酸氢根重复性试验测定结果序号自研制剂体积（ml）消耗滴定液体积v（ml）HCO3-含量（mol/L）RSD(%)16ml10.851.0110.3%210.901.016310.851.011410.871.013510.801.007610.801.0074.5.2中间精密度精密量取原研制剂6ml，在不同日期由不同分析人员，以盐酸滴定液（0.5592mol/L）测定碳酸氢根的含量，考察方法的精密度，测定结果见表6。被测成分含量水平在100%时，中间精密度RSD限度为1%。由表4-5可知，中间精密度相对标准偏差为0.3%，说明该方法的中间精密度符合要求。表4-5碳酸氢根中间精密度测定结果序号试验人员样品体积（ml）消耗滴定液体积（ml）HCO3-含量（mol/L）RSD(%)1A6ml11.001.0250.3%2A11.051.0303A11.001.0254B11.001.0255B10.951.0216B11.001.0254.6准确度分别精密量取样品9份各3ml，置锥形瓶中，分别加入碳酸氢钠0.15g、0.26g、0.41g各3份，加水使成50ml，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用盐酸滴定液(0.5592mol/L)滴定至溶液由绿色转变为紫红色，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。滴定结果见表4-6。碳酸氢根准确度计算公式：加样回收率（%）表4-6碳酸氢根准确度试验结果组别消耗滴定液体积（ml）测得HCO3-量（g）样品中HCO3量（g）加入NaHCO3量（g）加入HCO3-量（g）回收率(%)均值(%)RSD(%)18.730.2990.1850.15330.1113100.8%100.1%0.6%28.750.2990.15290.1110101.3%38.700.2970.15350.1115100.2%410.850.37010.25560.185699.7%510.820.36910.25490.185199.5%610.850.37010.25570.185799.7%714.120.48170.40870.296899.9%814.110.48130.40770.2960100.1%914.100.48100.40800.296399.9%按《中国药典》2020年版，测定的组分含量为100%，回收率为98-101%，精确度试验的回收率为98%~101%（RSD≤2%）。结果表明：低、中、高三组的平均回收率分别为100.1%和0.6%；结果表明，该试验方法的精确性达到了设计要求。4.7本章小结本文用方法学检验了8.4%碳酸钠注射液的质量。它的专属性、线性、范围、精密度和精度都满足要求，可用该含量分析方法对自研制剂与原研制剂进行碳酸氢根的含量测定。5自研制剂与原研制剂的质量对比研究实验室前期初步建立了8.4%碳酸氢钠注射液的制备工艺和质量标准，还需将自研制剂和原研制剂进一步进行对比研究。对比自研制剂和原研制剂的pH值、重金属检查、砷盐检查和含量测定，研究自研制剂与原研制剂质量的异同。5.1仪器和试药5.1.1仪器四川优普超纯水制造技术股份有限公司；恒温水浴锅（上海申顺生物技术有限公司W201D)；上海精宏试验设备有限公司（DHG-9140A)；pH表（METLERTOLEDO仪器有限公司，FiveEasy)；北京市永光明医疗器械有限公司万用电炉。5.1.2试药8.4%碳酸氢钠注射液(日本大冢公司)；药用碳酸氢钠(原产地:泰国)；无8.4%碳酸氢钠注射液(日本大冢公司)；药用碳酸氢钠(原产地:泰国)；无学品有限公司);甲基红(天津市福晨化学试剂厂)；盐酸AR(四川西陇科学有限公司)；95%乙醇(成都市高新区石羊化学制剂厂)；酚酞(上海化学试剂采购供应站试剂厂)；醋酸铵(成都市科隆化学品有限公司)；氨水(成都金山化学试剂有限公司)；硫代乙酰胺(成都市科隆化学品有限公司)；丙三醇AR(广东光华科技股份有限公司)；氢氧化钠AR(成都市科龙化工试剂厂)。5.2pH值碳酸氢钠不稳定，在生产过程中容易受热分解产生二氧化碳气体，使溶液pH值升高。故对碳酸氢钠注射液的pH值进行控制是保证产品质量和临床用药安全的重要环节。《中国药典》2020年版规定5%碳酸氢钠注射液pH值为7.5-8.5，《日本药典》2016年版规定8.4%碳酸氢钠注射液pH值为7.0-8.5，目前还需对自研制剂和原研制剂分别进行pH测试，确认pH值的控制.用pH计或酸性计来测量该溶液的pH。pH仪包括作为指示电极的玻璃电极和作为参比电极的饱和甘汞或银-氯化银。在测试之前，使用两种标准缓冲液校正仪器，使仪器斜率为95~105%，然后，将pH值在0-30mV或±0.5pH范围内，然后将pH值在两种修正缓冲剂中，并尽可能靠近试验对象，其示数应该与检验缓冲剂的规定值相差不超过±0.05pH。5.2.1标准缓冲液的配制本次实验室使用的pH计采用了邻苯二甲酸盐标准缓冲剂（pH=4.01）和标准硼砂缓冲剂（pH=9.18）。邻苯二甲酸盐标准缓冲剂：10.21克邻苯二甲酸氢钾，经精密称量，于115~5℃下干燥2~3h，用水溶解，稀释到1000毫升。硼砂标准缓冲液：用精密称重3.81克，防止风化，加入水后，用水溶解，稀释到1000毫升。5.2.2pH值测定分别使用邻苯二甲酸盐标准缓冲液(pH=4.01)和硼砂标准缓冲液(pH=9.18对pH计进行校正后，分别测量自研制剂和原研制剂的pH值，样品重复三次。每次更换标准缓冲液或测量供试品液之前，需用纯化水充分洗涤电极，再用滤纸将电极表面的水分吸尽。结果见表5-1。表5-1自研制剂和原研制剂pH值的测定结果序号123平均值自研制剂pH8.248.168.288.23原研制剂pH8.408.368.428.39自研制剂pH值为8.23，原研制剂pH值为8.29。原研制剂的规定pH值范围为7.0-8.5，均符合规定。5.3重金属检查重金属检查法所规定的重金属指能与硫代乙酰胺或硫化钠能发生显色反应的金属杂质，一般是铅(Pd)与显色剂发生反应。碳酸氢钠易溶于水，故可选用《中国药典》2020版四部0821第一法硫代乙酰胺法进行测定。5.3.1实验方法将0.1599克的硝酸铅精确称出，加入5ml硝酸和50ml的水，使其稳定到1000毫升。在使用之前，将10ml的储备液精确地倒入1000毫升的容量瓶子中，用水稀释到刻度，然后摇晃，得到标准的铅液。现在就可以使用标准的铅水，不可超过当日。取五支25ml的纳氏比色管，编号为甲、乙、丙、丁、戊。纳氏比色管应该表面光滑、无划痕、无瑕疵，三支比色管的色泽、内径和刻度线应一致。向甲管中加入标准铅溶液0.6ml、醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml，加入适量蒸馏水使成25ml。向乙管中加入自研产品20ml，并缓缓加入稀盐酸8ml，边加边搅拌，待不再产生明显气泡后将溶液煮沸，溶液体积浓缩至约20ml后，停止加热，冷却后，加1滴酚酞指示剂，用氨试液调整pH，直到溶液呈粉色，冷却后，加入2毫升乙酸钠缓冲液（pH=3.5)，然后加入适当的蒸馏水，直到25毫升。向丙管中加入自研产品20ml，同乙管操作，加入稀盐酸8ml并将溶液体积浓缩至约20ml，放冷后加1滴酚酞指示液，使用氨试液调节pH值，直至溶液显粉红色，冷却至室温后，添加2毫升pH为3.5的乙酸盐缓冲液，0.6毫升标准铅溶液，加入适当的蒸馏水到25毫升。向丁管中加入原研产品20ml，并缓缓加入稀盐酸8ml，边加边搅拌，待不再产生明显气泡后将溶液煮沸，溶液体积浓缩至约20ml后，不再加热，放冷，加1滴酚酞指示液，并滴加氨试液调节溶液pH值，直至溶液显粉红色，放冷后，加入2ml醋酸盐缓冲液（pH=3.5），再加入适量蒸馏水使成25ml。向戊管中加入原研产品20ml，同乙管操作，加入稀盐酸8ml并将溶液体积浓缩至约20ml，放冷后加1滴酚酞指示液，使用氨试液调节pH值，直至溶液显粉红色，冷却至室温后，加入醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml、0.6毫升标准铅溶液，加入适当的蒸馏水到25毫升。同时将2ml的硫化乙酰胺试液倒入甲、乙、丙、丁、戊管中，并摇匀，放置2分钟。将三支纳氏比色管直立于白纸上，目光自上而下观察，将五管分为甲、乙、丙和甲、丁、戊两组，比较两组内三管的颜色深浅。5.3.2实验结果将甲、乙、丙和甲、丁、戊分为两组分别进行比较。颜色深浅程度为丙管＞甲管＞乙管；戊管＞甲管＞丁管。本实验标准铅溶液加入量为0.6ml，对应重金属限度为千万分之三。结果表明，自研制剂和原研制剂的重金属含量均在千万分之三限度以内。5.4砷盐的检查砷常在药物生产过程中由无机试剂引入。常用的检查方法有古蔡氏法、二乙基二硫化氨基甲酸银工艺。本品采用《中国药典》第2020版08221号蔡氏方法测定砷的含量。古蔡法检取砷盐的方法是：氢气与药品中的砷盐发生化学反应，使其与溴化汞试纸片发生黄褐色的砷斑。5.4.1实验方法精密称量0.132g三氧化二砷，用5毫升20%的氢氧化钠溶液溶解，加少量的稀硫酸，再加入10ml稀释的硫酸，最后用蒸馏水定容到1000毫升。在使用之前，将10ml的砷储液精密量，放入1000毫升的容量瓶子中，加10ml稀释的硫酸，使其体积均匀，摇动，得到标准砷的溶液。标准砷点的制作：取大约60mg醋酸铅棉花，用细玻璃棒装入导气管C中，高度约60-80mm。将可以完全盖住孔径，将溴化汞试纸片放置在螺杆D的末端，拧紧螺帽E。将2ml标准砷液精密计量，放入A瓶，加入盐酸5毫升，蒸馏水23毫升，加入碘化钾5毫升，加入5毫升碘化钾，5毫升酸性氯化亚锡溶液5滴，混合后，在室温下放置10分钟。将2g锌粉加到A瓶中，然后用导管C封住A瓶，然后将A瓶放入40℃的水浴中，45分钟后，从设备中取出溴化汞试片。样品中的砷点的制备：取自研制剂和原研制剂的8.4%碳酸氢钠注射液25ml于A瓶中，加入5ml的盐酸，然后按照标准的方法，从“5ml碘化钾溶液中加入5ml”开始操作。将自研制剂、原研制剂砷斑色与标准砷斑的对比分析。5.4.2实验结果自研制剂砷斑和标准砷斑颜色相比较，标准砷斑颜色更深。原研制剂砷斑与标准砷斑颜色相比较，标准砷斑颜色更深。经计算，自研制剂和原研制剂的砷盐含量均在亿分之八以内。5.5含量测定分别精密量取自研制剂和原研制剂6ml（大约等于0.5克碳酸氢钠），加入水，共计50毫升，加入10滴甲基红-溴甲酚绿，用盐酸滴定液（0.5592摩尔/升），直到溶液从绿色变为紫红色，再加热2分钟，冷却后，继续滴定，直至溶液从绿色变为深紫色，自研制剂和原研制剂含量测定滴定结果分别见表5-1、5-2。表5-2自研制剂含量测定结果序号123滴定液消耗体积体积(ml)10.8510.910.85碳酸氢钠（g）0.50970.51210.5097含量（%）101.1%101.6%101.1%平均含量%101.27%表5-3原研制剂含量测定结果序号123滴定液消耗体积体积(ml)11.1511.1011.05碳酸氢钠（g）0.52380.52150.5191含量%103.9%103.5%103.0%平均含量%103.47%由表5-2、5-3可知自研制剂的含量为101.27%，原研制剂的含量为103.47%；符合《中国药典》2020年版规定的95-105%范围内，符合《日本药典》2016年版规定的95.0-105.0%范围内。5.6本章小结参照相关指南，结合药典标准进行自研制剂和原研制剂的pH值、重金属、砷盐检查和含量测定进行比较，发现均符合《中国药典》2020年版或《日本药典》2016年版标准要求。比较两者的结果，表明自研制剂和原研制剂质量一致。6稳定性考察稳定性实验主要研究药品在外界条件如温度、湿度、光照等条件下，药物的品质发生的变化和变化规律。通过对药物的稳定性的研究，可以为药物的生产工艺、包装方法、贮存条件和运输途径提供参考，为药物的有效期提供科学的依据。《中国药典》2020版将稳定性实验划分为三大类：影响因素实验、加速实验和长期实验。由于实验时间有限，没有进行长时间的加速和长时间的实验，而采用了低温条件下的冻融法。冻-融试验（热循环实验）主要针对难溶性药物注射剂、凝胶等外用制剂、脂质体和纳米粒等新剂型进行研究。对于溶解度随温度变化的药物，将其冰冻后的重新置于常温下，再溶解性能可能会随之变化。20℃环境下，本品中的碳酸氢钠完全溶解，而10℃及其更低温度时，本品中所含碳酸氢钠已经超出了溶解度，溶液中可能有不溶性晶体析出。本实验以pH值、析出作为测量标准，考察药液中溶解的碳酸氢钠在4℃和-20℃从溶液中析出后于在室温环境下的再溶解性。6.1实验方法将自研制剂分为两组，分别标记为A组和B组，A组放于4℃条件下两天后，在室温下放置2天，循环3次，于第2、第4、8、12天取样，并进行pH测定。B组于-20℃下置2天，于2天后于室温下循环3次，于第2、4、8、12天取样、观测pH。第2天，分别从A组和B组取一个放置在4℃和-20℃的样品，放于室温中观察是否结晶或析出固体，若结晶或析出固体，记录融化时间或固体完全溶于药液的时间。6.2实验结果将A组和B组分别在4℃和-20℃条件下放置后，取出样品观察。4℃的样品液体澄清透明，无不溶性沉淀；-20℃的样品呈白色结晶，在室温放置35min后完全溶解，无不溶性沉淀，同时测定恢复溶解后样品的pH值，结果见表6-1。表6-1冻-融实验结果D1D2D4D8D12A组pH值8.238.268.078.288.27B组pH值8.238.238.088.278.18在4℃和-20℃条件下，对自研制剂进行考察，将制剂放回室温后析出晶体均能完全溶解，且在考察时间内，pH值保持稳定，且均符合规定。结果表明，该制剂的pH值不受低温和冷冻影响