丙型肝炎病毒实验室检测技术

丙型肝炎病毒实验室检测技术《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》《丙型病毒性肝炎诊断的行业标准》一、丙型肝炎病毒（HCV）概况

单股线性正链RNA病毒（一）、丙肝病毒的发现史

20世纪60年代后期，首次被发现曾被称为输血后非甲非乙型肝炎因子是第一个在没有看到病毒颗粒条件下确认的人类病毒1989年，电镜下观察到病毒颗粒1991年，归为黄病毒科2005年，Huh7细胞培养成功

（二）、丙肝病毒的主要特点HCV可分为6个主要基因型及>80个亚型，病毒基因组具有高度变异性。经体液或血液传播。目前尚无有效的疫苗，但可防可治。约3000氨基酸组成的多聚蛋白。

每日复制量：10兆(1012)病毒颗粒。促使HCV传播的危险因素仍然广泛存在！血液传播

（传播效率高，主要因素）医源性：不安全注射、侵入性医学检查（透析、胃镜、肠镜等）、牙科、输血/血制品等非医源性：穿耳孔、纹身、美容、理发、修脚等家庭：共用牙刷、剃须刀等吸毒：共用针具注射吸毒

性传播：STD/HIV促进传播

（传播效率较低）母婴传播：HCV+孕妇

（传播效率低）（三）、全球和中国丙肝现状

全球HCV感染率约为3%，每年新发丙型肝炎病例300-400万，约有1.5亿慢性丙肝患者约15-35%慢性丙肝患者在20-30年后发展为肝硬化，这些患者中每年约1%-3%发展为肝细胞癌估计每年有35万人死于丙肝相关的肝脏疾病全球HCV传播的最主要危险因素是静脉注射吸毒和医源性感染近年来丙肝病例报告呈逐年上升趋势排序省份报告数

排序省份报告数1河南省

17黑龙江省2广东省

18贵州省3湖南省

19山东省4新疆

20重庆市5云南省

21江西省6四川省

22海南省7河北省

23江苏省8广西

24福建省9辽宁省

25浙江省10湖北省

26青海省11山西省

27上海市12陕西省

28北京市13内蒙古

29宁夏14甘肃省

30天津市15吉林省

31西藏16安徽省

全国2015年全国丙肝病例报告情况（发病日期）2015年哨点监测

特定人群HCV感染率人群检测人数HCV抗体阳性率%肾透析医院侵入性诊疗单位体检无偿献血计划生育门诊就诊人群检测人数HCV抗体阳性率%吸毒者男性STD就诊者男男性行为者暗娼男性流动人口长卡司机孕产妇青年学生2015年监测哨点HCV抗体检测结果：共检测_____人，HCV抗体阳性检出率____%。2009-2015艾滋病哨点监测人群HCV阳性率2009-2015艾滋病哨点监测人群HCV阳性率（吸毒者人群除外）2010-2015丙肝哨点监测人群HCV阳性率2010-2015丙肝哨点监测人群HCV阳性率（肾透析人群除外）我国乙肝和丙肝现状~9000万~700万重点人群急需乙肝治疗慢性乙肝~2800万HBV携带者~760万HCV感染者~250万重点人群急需治疗我国的肝癌约80%由乙肝相关导致，约10-15%由丙肝相关导致。~456万慢性丙肝患者

（四）、丙肝的治疗现状和前景丙肝能够治愈，但大多数患者没有得到治疗丙肝治疗药物发展迅速：普通干扰素+利巴韦林（48周）长效干扰素(聚乙二醇干扰素)+利巴韦林（48周）长效干扰素+利巴韦林

+蛋白酶抑制剂（Boceprevir波西普韦/Telaprevir特拉普韦）（24周）2011年美国和欧洲上市HCVNS5A复制复合体抑制剂

Daclatasvir（12周）单独使用HCVRNA聚合酶抑制剂Sofosbuvi（12周）单独使用

丙肝治疗药物面临的挑战索非布韦（Sofosbuvir）是世界卫生组织推荐的四种治疗丙肝新药之一。目前，索非布韦在美国每个疗程的价格为8.4万美元；欧洲价格为5.7-6.6万美元。但该药在泰国价格为3600美元，给予埃及、巴基斯坦的价格为900美元/人/疗程。目前该药尚未在我国注册，也无价格。世界卫生组织推荐的治疗丙肝药物1.

Harvoni(Sofosbuvir+Ledupasvir),

吉利德公司（用于基因1型和3型）2.

Sofosbuvir,

吉利德公司(Gilead)

（用于基因2型和3型）3.

Paritaprevir+Ombitasvir+Dasabuvir

（用于基因1型）4.

Sofosbuvir+Simeprevir

(强生公司)

（用于基因1型）5.

Sofosbuvir+Daclatasvir

(施贵宝公司)

（用于1型、2型和3型）

（五）、丙型肝炎的疾病进展正常的肝脏急性感染慢性感染(80%)慢性肝炎疾病自发缓解(20%)肝硬化(20%)肝细胞癌(1–4%每年)失代偿(~20%)缓慢进展(~75%)稳定的肝炎(80%)疾病进展率(Fast)(Slow)感染后20年饮酒,合并HIV或HBV感染，肥胖≥感染后30年女性,年轻LauerG&WalkerB.NEnglJMed2001;345:41HCC=hepatocellularcarcinoma6个月15－50天20－30年不等急性HCV感染后自愈急性HCV感染后慢性化（六）、传染病报告卡与丙肝诊断标准传染病报告卡（病例分类）：

分类一：1.疑似病例

2.临床诊断病例

3.实验室确诊病例

4.病原携带者

分类二：1.急性、2.慢性丙型病毒性肝炎诊断行业标准(WS213-2008)病例诊断：

1.疑似丙肝病例：流病史+症状/转氨酶升高

2.临床诊断丙肝病例：丙肝抗体阳性+流病史/症状/转氨酶升高3.确诊丙肝病例：疑似/临床病例+HCVRNA阳性

（1）急性丙肝诊断

（2）慢性丙肝诊断报病例卡的注意事项：临床诊断病例无需区分急性、慢性HCVRNA阳性但抗-HCV阴性者，提示为急性确诊丙肝病例HCV抗体检测已非常普遍，无需报告疑似病例对于抗-HCV检测结果阳性，但HCVRNA检测结果阴性者，无须进行病例报告；已按照抗-HCV检测阳性结果报告“临床诊断病例”的，应予以删除。抗-HCV+有

RNA检测结果无RNA检测结果RNA阴性RNA阳性肝功症状流病史临床诊断病例确诊病例上报不上报慢性急性未分类备注或删除订正报告

诊断、监测方法HCV血清学试验EIA检测抗HCV、ImmunoblotassayHCV-RNA定性试验PCR、TMAHCV-RNA定量试验PCR、bDNAALT肝纤维化非损伤试验肝活检基因分型

二、诊断丙肝感染者和现患病人的实验室方法NationalInstituteofHealthConsensusDevelopmentConferenceStatement:ManagementofHepatitisC:2002-June10-12,2002（一）、丙型肝炎病毒抗体检测HCV感染疫情报告的检测流程HCV血液筛查的检测流程HCV临床诊断筛查的检测流程HCV病毒的基因结构及免疫诊断资源core

E1

E2NS2

NS3

NS4

NS5

各种基因产物作为免疫诊断的特异性：

NS3>core>NS4>NS5

抗－HCV检测分为筛查实验（酶联免疫吸附试验、胶体金法快速试验、化学发光试验、免疫荧光试验）和补充试验（免疫印迹试验）。丙肝抗体假阴性问题HCV窗口期—TRANSFUSIONVolume40,February2000抗-HCV检查的特点：优点：经济，方便快捷，易于开展；第三代EIA检测免疫功能正常者敏感度和特异度可达99%，窗口期6-12周；检测阳性率高，慢性感染>95%，急性感染50~70%；适用于高危人群筛查，也可用于HCV感染者的初筛。缺点：出现较晚，不能作为HCV感染的早期诊断，也不能区分既往感染或现症感染；单项抗-HCV结果呈阳性须检测HCVRNA来确定是否为现症HCV感染；急性HCV感染早期抗-HCV可为阴性，需依据HCVRNA阳性或动态监测来进行诊断；透析、免疫功能缺陷以及自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阴性。HCV临床诊断补充试验检测流程（1）HCV临床诊断补充试验检测流程（2）HCV核酸定性检测用于临床诊断策略及结果报告3（二）、丙型肝炎病毒抗原检测丙型肝炎病毒抗原检测结果解释（三）、丙型肝炎病毒核酸检测HCV核酸定性检测用于血液筛查策略及结果报告

HCV核酸定性检测用于临床诊断策略及结果报告HCV核酸定量检测用于临床治疗策略及结果报告丙型肝炎病毒指标检测的临床意义抗-HCVHCVRNA意义阴性阴性无HCV感染阴性阳性急性HCV感染早期；或假阳性假阴性，需复查阳性阴性既往感染，病毒已被清除；或假阳性假阴性，需复查阳性阳性现症感染，可诊断为丙型肝炎（四）、丙型肝炎病毒基因型检测（中国区HCV流行主要基因亚型)HCV基因分型的临床意义基因型的测定有助于决定抗病毒疗程和药物剂量。1和4型为难治性丙肝，疗程为48周，利巴韦林的用量达到1000～1200mg/d。2和3型，疗程为24周，利巴韦林的用量达到800mg/d。HCV诊治框架中的试验

GhanyM,etal.Hepatology2009;49:1335试验类别监测确诊治疗疗程评估治疗应答预测持续应答HCV抗体(EIA)HCVRNAHCV基因型XXXX†随着定量分析（10-50IU/mL）的敏感性增加，定性分析的重要性下降

EIA=酶联免疫分析X其它章节第六章：丙型肝炎病毒细胞培养第七章：实验样品的采集、保存、运输第八章：丙型肝炎病毒检测实验室的室内质量控制及能力验证第九章：实验室生物安全。第七章实验样品的采集、保存和运输采集：多为静脉血，HCV抗体检测血清或血浆均可，HCV-RNA检测最好用血浆，肝素抗凝剂除外。保存：一定要分离血清或血浆保存，短期冷藏，长期冷冻，特别是用于HCV-RNA检测的样品，最好尽快分离，冷冻保存，低温运输。HIV和HCV的异同点1、病毒种类2、传播途径3、感染后转归4、病毒体外存活时间5、治疗6、疫苗什么是丙肝？

丙肝是由于感染丙型肝炎病毒引起的肝脏炎症。急性丙型肝炎是指感染丙型肝炎病毒后的最初几个月。急性丙肝的严重程度因人而异，从轻微甚至没有症状的温和状态，到严重到需要入院治疗。由于一些还不太清楚的原因，大约有20%的感染者在感染的最初6个月内，未经治疗却可自发清除掉体内的丙肝病毒而达到自愈。不幸的是大多数感染者并不能够自行清除掉体内的丙肝病毒，而发展成为慢性丙型肝炎。随着时间的推移，慢性丙肝可以引起一些严重的健康问题，比如肝病、肝衰竭甚至是肝癌。丙肝怎样传播？

丙肝主要通过丙肝病毒感染者的血液进入未感染者的体内传播的。今天，大多数的丙肝感染都是通过共用针头、针管或者其他注射毒品的器具引起的。1992年开始的广泛血源筛查之前，丙肝也可以通过输血和器官移植传播。在一些非正常情况下，由于医疗机构的感染控制措施缺乏而引起的丙肝暴发。个别情况下，性行为也可以造成丙肝的传播。在患有性病或艾滋病、多性伴或不洁性行为等都会增加丙肝感染的风险。在一些无执照场所或使用未严格消毒的工具纹身或身体穿刺也会造成丙肝的传播。感染丙肝的母亲所生产的新生儿中，大约6%会感染丙肝。然而，还有一部分人并不清楚自己怎样感染以及何时感染了丙肝。丙肝的症状?

很多丙肝感染者并没有症状，也不知道自己被感染。一些人会出现以下症状：发热、乏力、食欲不振、恶心、呕吐、小便赤黄、陶土样便、关节疼痛和皮肤、眼部的黄疸等。

急性丙肝的症状出现在感染后的2周至6个月之间的任何时间。而慢性丙肝一般需要数十年才能表现出症状。一旦出现症状，往往是肝病晚期的征兆。怎样知道自己是否感染丙肝？知道自己是否感染丙肝的唯一方法就是丙肝检测。临床医生通过检测血液，即丙肝抗体实验，检测人体血液中是否存在丙肝病毒抗体。抗体是在人体被感染时释放到血液中的化学物质，即使体内的丙肝病毒已经被清除，抗体也会一直存在于血液中。

丙肝抗体检测阳性或者反应性，表明一个人过去某个时间感染过丙肝病毒，但丙肝抗体阳性不能确定现在是否患有丙肝。需要通过进一步的核酸检测来确认当前是否患有丙肝。丙肝聚集性疫情概念

短期内局部地区出现丙肝病例异常增多的情况。风险大量HCV感染者“隐匿”存在

（既往感染者可以“集中发现”）促使HCV传播的危险因素存在

（新近感染者可以“集中爆发”）丙