T-YNZYC 0122-2024 绿色药材 仙茅组培苗生产技术规程

ICS66.020.20CCSB00/09YNZYC云南省中药材种植养殖行业协会团体标准GreenMedicinalMaterialsTechnicalregulationsfortheproductionoftissuecultureseedlingofCurculigoorchioidesIT/YNZYC0122—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省中药材种植养殖行业协会提出并归口。本文件起草单位：云南省农业科学院药用植物研究所、云南昊晨农业有限公司、云南植虫药生物科技有限公司。本文件主要起草人：起明菊、杨美权、张金渝、曾祥飞、杨维泽、杨天梅、左应梅、赵露琴、许宗亮、王丽、李纪潮、朱新焰。1T/YNZYC0122—2024绿色药材仙茅组培苗生产技术规程本文件规定了仙茅组培苗培养准备、外植体采集和处理、组织培养、驯化、包装、标识和运输。本文件适用于云南省仙茅组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T496肥料合理使用准则通则NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1组织培养利用植物细胞的全能性，采集仙茅幼嫩叶，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整仙茅植株。3.2外植体从健壮鲜活植物体上获取的用于植物组织培养的组织或器官。3.3驯化组培苗从人工控制的培养条件到自然适应的过渡过程。4培养准备4.1生产场地与设备应符合“NY/T2306”的规定要求。4.2接种室消毒按照每15m2配置1根30w紫外灯的标准，每天用紫外灯照射杀菌1h,每周用臭氧发生器消毒2次~3次，臭氧浓度≥20mg/m3,时间≥30min。4.3培养基配制以MS培养基为基本培养基，添加琼脂4.0g/L～4.5g/L，蔗糖30g/L，调节pH值为5.8，激素和添加物配方见附录A。4.4培养基消毒分装并密封好的培养基放入121℃下高压灭菌20min，自然冷却至压力表指针降至0时，开锅取出备用。5外植体的采集和处理2T/YNZYC0122—20245.1外植体选择取生长旺盛，无病虫害的植株。5.2采集时间4月～6月，用75%多菌灵粉剂500倍液喷施植株，每隔3d喷施一次，连续喷施5次。5.3采集方法取幼嫩叶，采集后加标签，标明母株编号、采集地点、采集时间等。若叶片30min内不能处理，则需装入自封袋中，排除空气后密封保存；若需长途运输2d～3d,需冷藏保存。5.4表面清洁用肥皂液清洗10min～15min，滴加3滴～4滴吐温-80振摇10min～15min，置于自来水下冲洗50min～70min。5.5消毒外植体消毒按以下步骤进行：a在超净工作台上，用75%酒精消毒10s～15s，无菌水冲洗2次～3次。b用饱和漂白粉溶液消毒20min～30min，无菌水冲洗4次～5次。c用0.05%升汞溶液消毒10min～15min，无菌水冲洗8次～9次。5.6消毒废液的处理使用过的氯化汞溶液按照国家有关剧毒化学品使用的法规进行回收处理。6组织培养6.1初代培养将消毒好的仙茅叶片，剪去接触消毒液的伤口，剪成长约0.5cm～1.0cm的小段，将剪好材料平铺于培养基中，接种材料与培养基充分接触，分布均匀，接种完毕立即盖好瓶盖并作好标记，注明材料名称、接种日期等事项，先暗培养20d～30d再转光培养30d～40d，形成增殖苗。6.2增殖培养取诱导或继代获得丛生芽，将丛生芽剪成单芽，将单芽从基部剪成叶片和茎段。茎段基部接种于继代培养基中，叶片剪成长约0.5cm～1cm的小段，平铺于继代培养基中，转接周期为50d～60d。6.3生根培养将增殖的丛芽切割成单个完整的幼芽，按极性接种于生根培养基中，培养50d～60d可炼苗。6.4培养条件培养温度为25℃±2℃,光照强度为2000lux～3000lux，每日光照12h。6.5生根苗质量要求植株生长健壮，苗高5cm以上，根系多于3条。7驯化7.1驯化棚搭建与栽培环境相近的设施大棚或小拱棚，遮光率40%～60%，架设喷灌或滴灌。移植前拧松瓶盖放置在驯化棚内培养5d～7d。3T/YNZYC0122—20247.3移植取出组培苗，用清水洗净培养基，按5cm×10cm的密度栽植于泥炭土：壤土：珍珠岩（1:1;1）的混合基质中。7.4驯化管理7.4.1温度要求苗床温度应控制在15℃~30℃,当温度高于30℃时，两侧通风或揭膜降温。7.4.2空气湿度1个月内，保持空气湿度在80%以上。2月后，保持空气湿度在60%～80%。7.4.3施肥管理移植2个月后，每隔10d喷施0.2%氮磷钾为15:15:15的水溶肥1次；定植3个月后，每隔15d喷施0.3%氮磷钾为15:15:15的水溶肥1次。肥料的使用应符合NY/T496的要求。7.5病虫害防控采用75%的百菌清600倍液或65%的代森锰锌500倍液交替使用，每月喷药1次～2次。7.6出圃培育90d以上，株高12cm以上可出苗。8包装、标识和运输8.1包装以100株为单位捆绑，用塑料袋或无纺布袋包裹根部，放入箱内包装。8.2标识外包装箱上需贴上标识，注明品种（含品系）、规格、等级、数量、生产