分子生物学3重点

密码子的简并性由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象叫简并(degeneracy)。对应于同一氨基酸的密码子叫同义密码子。密码子：MRNA上每3个相邻的核苷酸编码PRO多肽链中的一个AA,这三个核苷酸就称为一个密码子或三联体密码。操纵子：操纵子是原核生物基因表达的单元，它包括被协同调节的基因(结构基因)和被调节基因的产物所识别的调控元件。内含子：断裂基因中外显子的间插序列，可参与前体RNA的转录，但其转录的RNA序列于转录后的加工中被切除，不包括于成熟的RNA分子中．同尾酶：有些来源不同的限制酶，识别及切割序列各不相同，但却能产出相同的粘性末端，这类限制酶称为同尾酶。星号活性,在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列，这一现象称星号活性。开放阅读框(ORF)从mRNA5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列,各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链,称为开放阅读框架氨基酸的等电点：当氨基酸溶液在某一定pH值时，使某特定氨基酸分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该氨基酸的等电点亚克隆：是克隆实验中最简单的一种，即将已克隆的DNA片段从一载体向另一载体的转移，这一过程被称为亚克隆。生物大分子：是指生物体内由分子量较低的基本结构单位首尾相连形成的多聚化合物。包括核酸、蛋白质和多糖。基因:DNA分子中含有特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的功能单位；是合成有功能的蛋白质多肽链或RNA分子所必需的全部核酸序列。外显子：断裂基因中含有蛋白质编码信息的部分．每个外显子均编码一个完整蛋白质的特定部分重叠基因：指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。移动基因：是基因组中可移动的一段ＤＮＡ序列，可将其本身从基因组内的一个位置转移至另一位置．（能将自身插入到宿主基因组新位点的特异的DNA序列）。假基因：具有与功能基因相似的序列，但不能翻译为功能蛋白质的基因片段．通常是由先前的功能基因积累突变而形成的。基因突变：是指一个基因内部可以遗传的结构改变，是基因分子内部在某种条件作用下所发生的一个或几个核苷酸的改变，导致结构蛋白或酶的改变，从而影响有机体的大小、品质、颜色、结构和生长率等性状的改变。C值：通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。C值悖理：生物的复杂性与基因组的大小并不完全成比例增加。单核苷酸多态性(SNP)：在基因组水平由单个核苷酸差异所引起的DNA序列多态性。质粒：是位于细胞质中的一类独立于染色体的可自主复制的遗传成分，可赋予宿主细胞一定的生物性状。基因载体：能将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。细菌质粒：是独立于宿主基因组复制、编码抗生素抗性基因的小型环状DNA分子、运载克隆DNA的常用载体、。穿梭质粒：是指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可以在两种不同的宿主细胞中存活和复制的质粒载体．黏粒：一类由人工构建的含有λDNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。基因文库：是来自某生物的不同DNA序列的总集，这些DNA序列都被克隆进了载体，以便于纯化、贮存与分析。基因组文库：将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上，再转化细菌而形成的集合。简称G-文库。cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录的mRNA全部经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合,又称c文库。插入失活效应：因DNA片段的插入而导致编码基因失活的现象。转化率：每毫克转化的质粒DNA所产生的具抗生素抗性的克隆数。转化：是细菌吸收外源DNA，通常是质粒DNA的过程，质粒通过转入具有特定遗传性状的大肠杆菌菌株而被克隆。酵母人工染色体(YAC)：酵母人工染色体是将酵母染色体复制与分离所需的序列与大片段目的DNA连接而构成的，可克隆外源片段的长度可大于1Mb。细菌人工染色体（BAC载体）（BAC)：在大肠杆菌F因子的基础上发展起来的，能容纳长达100-350KB的插入序列。单核苷酸多态性(SNP)：在基因组水平由单个核苷酸差异所引起的DNA序列多态性。限制酶：限制性内切核酶，又称限制酶，是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶。单位酶：在建议使用的缓冲液及温度下，在20ul反应液中反应1小时，使1ulDNA完全消化所需的酶量。同裂酶：来源不同的限制酶，能识别和切割相同的序列，这类限制酶称为同裂酶。黏末端：具有突出末端的限制性酶解反应的产物的末端称为黏末端。核酸分子杂交：互补的核苷酸序列通过碱基配对形成稳定的杂交双链dna分子的过程。反转录PCR（RT-PCR）：一细胞内总RNA或mRNA为模版，采用特异性引物、loig-dT或随机引物，在逆转录酶的作用下反转录成cDNA，在以cDNA作为模版，通过特异性引物，PCR扩增目的基因。逆转录：以细胞内总RNA或MRNA为模板，利用特异性引物olig-dT或随机引物，在逆转录酶的作用反转录成CDNA，再以CDNA作为模板，通过特异性引物，PCR扩增目的基因。微管：是细胞骨架真核生物纤毛和鞭毛以及许多细胞表面毛状结构的主要组分。a-互补：宿主和质粒编码的片段单独时没有酶活性，但他们同时存在时，可形成具有酶学活性的PRO,这样LACZ基因在宿主细胞与质粒之间实现了互补，成为A-互补。PRO生物合成：又称翻译，是指由RNA将基因DNA的遗传信息转变成AA序列的过程TM：溶解温度，通常把热变性过程中A260达到最大值一半时的温度称为该DNA的溶解温度。变性：在物理、化学因素影响下，DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开，这是一个跃变过程，伴有A260增加，DNA的功能丧失。复性：在一定条件下，变性DNA单链间碱基重新恢复双螺旋结构，伴有A260减少，DNA的功能恢复。感受态细胞：用CA2+处理大肠杆菌细胞，可使之成为易接受质粒DNA的感受态细胞。启动子：是一段特定的直接与RNA聚合酶及转录因子相结合、决定基因转录起始与否的DNA序列。结构域:在二级结构的基础上，多台进一步卷曲折叠成几个相对独立、近似球形的三维实体，再由两个或两个以上这样的三维实体缔合成三级结构，这种相对独立三维实体称为结构域。启动子：是一段特定的直接与RNA聚合酶及其转录因子相结合、决定基因转录起始与否的DNA序列。DNA连接：DNA连接酶可以修复双链DNA骨架的断裂，催化限制酶酶解反应的逆反应，使退火的互补粘性末端共价连接在一起，形成新的DNA分子。1、琼脂糖凝胶电泳原理在一定PH条件下，每一种分子都具有特定的电荷，大小和形状，在一定时间内他们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上二形成紧密的泳动带，当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶染色，在紫外光下至少可以检出1-10NG的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置，当电场加载于具导电性的缓冲液中的琼脂糖凝胶上后，DNA片段在凝胶中依据其大小和形状以一定的速率向正极方向移动(DNA具有很高的负电性)较小的线性片段比较大片段移动得快，因为较大片段会被构成凝胶的琼脂糖纤维网的障碍所阻滞。2、蛋白质一级、二级、三级、四级结构1、一级结构：多肽链中氨基酸的排列顺序，包括二硫键的位置称为蛋白质的一级结构(primarystructure)。这是蛋白质最基本的结构，它内寓着决定蛋白质高级结构和生物功能的信息。2、二级结构：指肽链主链不同区段通过自身的相互作用，形成氢键，沿某一主轴盘旋折叠而形成的局部空间结构，是蛋白质结构的构象单元。主要有以下类型：（1）α－螺旋（2）β－折叠（3）β－转角（4）无规则卷曲。3、三级结构：多肽键在二级结构的基础上，通过侧链基团的相互作用进一步卷曲折叠，借助次级键维系使α－螺旋、β－折叠片、β－转角等二级结构相互配置而形成特定的构象。三级结构的形成使肽链中所有的原子都达到空间上的重新排布。4、四级结构：指由相同或不同的称作亚基（subunit）的亚单位按照一定排布方式聚合而成的蛋白质结构，维持四级结构稳定的作用力是疏水键、离子键、氢键、范得华力。亚基本身都具有球状三级结构，一般只包含一条多肽链，也有的由二条或二条以上由二硫键连接的肽链组成。3、转录的机制起始：全酶在σ亚基的帮助下寻找启动子，一旦与启动子结合，RNAP引起转录起始位点附近至少10个碱基对解链，形成二元开放性启动子复合物。然后，RNAP中的起始位点和延长位点被相应的三磷酸核苷酸占据，在β亚基的催化下形成RNA的第一个磷酸二酯键。此时的复合物称为三元复合物。然后σ亚基从全酶解离下来。核心酶与DNA的结合是非特异的，有利于RNA合成的延伸。延伸：RNA聚合酶沿着DNA链移动，顺次合成RNA链。DNA在移动的聚合酶抵达之前解旋，在其经过之后又恢复成双螺旋。在延伸过程中起始位点充当了RNA的3’端位点，延伸位点功能不变。RNA合成速度大约为30-50个nt/s。但是延伸速度是不恒定的，有时会降低速度或延宕。在通过富含G.C对的模板以后约8-10个碱基，则会出现一次延宕。终止：RNA聚合酶识别终止子，导致不再有新的核苷酸插入，该序列通常是发夹结构。4、引物设计的原则1引物的长度以15-30Bp为宜2引物中的碱基分布是随机的，应尽量避免相同碱基的连续排列3避免两引物间的互补，以免形成引物二聚体4引物一定要与模板配对5引物必须经GENBANK查询后，证实没有与其他非目的DNA有高度互补，才能使用5、人类基因组计划：是描述人类基因组和其他生物基因组特征，发展基因组学新技术，阐明与此相关的伦理、法学和社会影响的一个国际性研究项目。该计划所产生的所有数据都可公共自由地使用。其主要内容是开发基因组工具和资源，对人类和其他生物基因组进行图谱绘制和测序.1、阐明人类基因组序列，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置。2、破译人类全部遗传信息，使人类第一次在分子水平上全面地认识自我。3、解码生命、了解生命的起源和生命体生长发育规律。4、认识种属之间和个体之间存在差异的起因、认识疾病产生的机制以及长寿与衰老等生命现象，为疾病的诊治提供科学依据。6、P位点：肽酰－tRNA位点a、大部分在小亚基内，小部分在大亚基内16SrRNA的3‘末端、L2等蛋白b、能够与起始tRNA（fMet—tRNAf）相结合，且P位点会影响A位点的活性A位点：氨酰基tRNA位点a、主要在大亚基上b、A位点内mRNA表面只对特定的aa—tRNA分子,表现出特异性，且A位点结合aa—tRNA要求在P位点上必须有肽酰tRNA存在7、影响限制性内切酶酶活性的因素及酶切反应的注意事项1、DNA的浓度2、DNA的甲基化程度3、酶切化反应的温度4、核算内切限制酶的缓冲液1质粒的量一定要过量。

50ul洗脱液的小抽质粒要用16ul.

E:2ul.

Buffer:10*2ul.反应体积20ul.正常情况下37度反应2到3小时足够。否则，

质粒量少，你会看不到条带。8、碱变法制备质粒的原理原理：碱变性法抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA变性及复性的差异达到分离目的，在PH高达12.6的碱性条件，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋加共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，在用PH4.8的醋酸盐缓冲液调至中性PH，则变性质粒DNA恢复至原来的构型，保存于溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一齐沉淀而被除去。9、基因组文库定义及其主要构建步骤基因组文库：将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上，再转化细菌而形成的集合。简称G-文库。构建基因组DNA文库的主要步骤？1、DNA片段的制备2、DNA片段与载体的连接3、重组体转化与克隆4、筛选鉴定基因组10、蓝-白筛选的原理答：蓝白斑筛选：1、有些质粒载体带有一个大肠杆菌的DNA短区段，编码β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的N端部分（146aa)，其中插入了一个并不破坏读框的多克隆位点（MCS），适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。2、宿主和质粒编码的片段单独时没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样lacZ基因在宿主细胞与质粒之间实现了互补，称为α-互补。3、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。4、当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然。11、外显子：断裂基因中含有蛋白质编码信息的部分．每个外显子均编码一个完整蛋白质的特定部分．特点：1、外显子在DNA中的次序与其mRNA一致。2、不同物种的相关基因的外显子序列通常是保守的．利用这种保守性可以分离基因．3、外显子通常短小，典型的外显子编码不到100aa.只有外显子的突变才会影响蛋白质的序列．4、外显子是进化单位？12内含子：断裂基因中外显子的间插序列，可参与前体RNA的转录，但其转录的RNA序列于转录后的加工中被切除，不包括于成熟的RNA分子中．特点：1、不同断裂基因所含的内含子数目大不相同。2、不同来源的内含子的分子大小相差悬殊。3、内含子的位置通常是保守的。4、其长度变化可以很大，高等生物的基因大小主要取决于内含子的大小．13真核生物基因组的一般特点真核生物基因组的特点：1．基因组含有更大的DNA分子，以染色体形式储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基因组是双份的。注意C值悖理”。2.基因组结构复杂，有多个复制启始位点，但每个复制子的长度较小。3.基因是不连续的。4.转录单位一般是单顺反子的。5.存在重复序列：1）高度重复序列（>105次）；2）中度重复序列（<105次）；3）单一序列。6.存在多基因家族和超基因家族。7.基因类型多样14、基因突变的特征以及基因突变对蛋白质序列的影响类型基因突变的特征：1、突变的重演性和可逆性2、突变的多方向性与复等位基因3、突变的有害性和有利性4、突变的稀有性和随机性。基因突变的类型（2）：根据突变对蛋白质氨基酸序列的影响：（1）错义突变:由于单个碱基替换导致肽链中的氨基酸发生改变。在DNA中一对碱基的改变引起一个mRNA密码的改变，结果使得多肽链中原来的一个氨基酸，变为另一个氨基酸，导致表型的改变。（2）无义突变：由于某一碱基被替换后，原来编码某一氨基酸的密码子突变成为终止密码子（UAG、UAA或UGA），从而造成蛋白质尚未全部合成就终止了翻译，形成无功能的多肽链。（3）中性突变：基因中一个碱基对的变化改变mRNA的一个密码子，产生氨基酸的替换，但不影响蛋白质的功能，从mRNA信息翻译的蛋白质的功能上检测不到所发生的变化。（4）沉默突变:某基因的一个碱基对的变化改变了mRNA中的一个密码子，该密码子与原密码子一样编码相同的氨基酸，产生的蛋白质仍为野生型功能。（5）移码突变:由基因内增加或减少一个或多个碱基对所引起的密码子的改变。得到较短或异常长的无功能蛋白质。15、、质粒的生物学特性：1、质粒是细菌染色体外能自主复制的环形双链DNA分子。2、编码一种或数种抗菌素抗性基因的质粒叫R质粒。3、质粒DNA分子可以持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定地条件下又会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体地复制而复制。4、部分质粒可分为：接合型质粒（自我转移的质粒）和非接合型质粒（不能自我转移的质粒）。5、根据每个寄主细胞中质粒拷贝数的多少，可分为：严紧型复制质粒（拷贝数少，为1-3个）和松弛型复制质粒（拷贝数多，可达10-200个拷贝），其分型与寄主状况有关6、质粒的不亲和性：两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象。这样的两种质粒也称不亲和质粒。质粒载体的选择标准：应选在：1、具有复制起点：能自主复制。2、具有抗菌素抗性基因：两个或两个以上。3、若干个限制性内切酶单一识别位点（多克隆位点）4、较小的分子量和较高的拷贝数。5、作为载体的质粒必定包括复制基因、选择性标记和克隆位点三部分16病毒基因组的一般特点：1、每种病毒中只有一种核酸，DNA或RNA。2、病毒核酸大小差别很大。一般DNA病毒较大，RNA病毒较小。3、大部分病毒核酸是单倍体。4、噬菌体基因组中无内含子，但感染真核细胞的病毒基因中具有内含子。5、有基因重叠现象。6、大部分DNA用于编码蛋白质，只有一小部分是不翻译的。7、调控序列可以被宿主细胞所识别。17细菌基因组的一般特点：1、基因组相对较小（106bp），只有一个复制其实位点。2、具有操控子结构。3、基因是连续的。4、大部分DNA是用于编码蛋白质的，只有一小部分不翻译的。5、基因组中仅有少数基因存在重叠现象。6、结构基因是单拷贝，rRNA基因是多拷贝。18真核生物基因组的一般特点：1、基因组含有更大饿DNA分子，以染色体形式储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞的基因的基因组的双份的。2、基因组结构复杂，有多个复制启始位点，但每个复制子的长度较小。3、基因是不连续的。4、转录单位一般是单顺反子。5、存在重复序列：高度重复序列（>105次），中度重复序列（<105次），单一序列。6、存在多基因家族和超基因家族。7、基因类型多样。19RNA分离提纯原理：RNA是一种极易降解的核酸分子，存在胞质及胞核中，利用高浓度变性异硫磬氰胍使细胞结构迅速破碎，使RNA从细胞中释放出来，核糖体蛋白也从RNA降解下来，高浓度异硫氰胍和硫基乙醇还可使细胞内的各种RNA酶失活，使释放出的RNA不易被降解。细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，染色体DNA，蛋白质及细胞残片，通过酚和氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA与其他组分分离，得到纯化的RNA。20蛋白质的合成体系包括以下物质

1.原料:20种氨基酸

2.直接模板:mRNA

3.特异的运载工具:tRNA

4.合成场所:核蛋白体(rRNA和蛋白质组成的复合体)

5.蛋白质合成过程所需的酶:氨基酰-tRNA合成酶,转肽酶和转位酶

6.蛋白质因子:起始因子(IF),延长因子(EF)和释放因子(RF)

7.供能物质:ATP,GTP

8.无机离子:K+,Mg2+21、蛋白质合成过程中的模板是什么有何特点原核生物,真核生物的模板在功能上有何差异(二)1.mRNA是翻译的直接模板

2.mRNA特点:种类多,分子长短不一(因为由它编码的多肽链长度不同)且寿命短

3.原核,真核生物mRNA功能的不同点:

原核生物:一种mRNA往往为功能相关的几种蛋白质编码,是多顺反子.

真核生物:①真核生物mRNA比原核生物多

②一个mRNA一般只为一种蛋白质编码,是单顺反子

③经加工修饰成熟后,mRNA才起模板作用22、蛋白质翻译机制4.1起始

①30S亚基与mRNA的结合:在一定Mg2+的生理条件下,核糖体亚基很容易缔合,所以70S核糖体在IF3作用下解离,然后再形成30S-IF3复合物,接着与mRNA结合.

②30S-IF3-mRNA与起始tRNA结合:在IF1和IF2的作用下和GTP的参与下,30S-IF3-mRNA与起始fMet-tRNAf结合,形成30S起始复合物30S-mRNA-fMet-tRNAf-GTP-IF1-IF2,并释放出IF3.

③70S起始复合物的形成:50S的加入和GTP的水解,形成70S起始复合物70S-mRNA-fMet-tRNAf,释放出IF1和IF2.fMet-tRNAf位于核糖体的P位上.

4.2延伸

①aa-tRNA与核糖体结合:在氨酰tRNA合成酶催化下,氨基酸被专一的tRNA所携带,生成aa-tRNA在EF-Tu和GTP作用下强烈促进aa-tRNA与核糖体A位结合.

②肽键形成:aa-tRNA结合于核糖体A位后,在肽基转移酶催化下,将P位tRNA上的肽基通过其羧基与A位tRNA上氨基酸的α-氨基连接,形成肽键.

③移位:肽键形成后,核糖体处在前移位状态,这时占领P位的是去酰化tRNA,A位为肽基tRNA,然后进行移位,核糖体与mRNA相对移动一个密码子距离,肽基tRNA从A位移至P位,去酰化tRNA离开P位,移位被EF-G催化,随之GTP水解,并导致EF-G释放.

4.3终止

肽链延伸过程中,当终止密码子UAA,UGA,UAG出现在核糖体的A位时,没有相应的aa-tRNA可以与之结合,而释放因子在GTP存在下,却能识别这些密码子并与之结合,激活肽基转移酶,把P位上的肽基转移至水分子,即水解P位上多肽与tRNA之间的键,接着新生的肽链和tRNA从核糖体上释放,完成多肽链的合成.释放因子RF具有GTPase的活力,它催化GTP水解,使肽链与核糖体脱离.23\原核生物与真核生物转录的相同点与不同点原核生物真核生物一个RNA聚合酶三个RNA聚合酶不同启动子之间有相当大的同源性各个启动子之间的差异很大聚合酶直接同启动子结合聚合酶通过转录因子的相互作用进行结合没有增强子有增强子转录作用的终止靠几个U前面形成茎环转录作用的终止靠在转录过程特殊的核酸内切酶切割的序列介导的启动子通常位于基因的上游核聚酶Ⅲ的启动子位于被转录的序列中转录单位常常含有多个基因转录单位只含一个基因真核生物载体举例：1、穿梭质粒载体。2、杆状病毒载体。3、哺乳动物病毒载体。4、狂犬病毒载体。纯化基因组DNA的方法：1、真核生物：制备细胞核，再用蛋白酶降解和分相提取（酚、氯仿）除去蛋白质、脂类及其他杂质大分子。2、真核生物：可以直接抽提DNA。用该法制备的基因组DNA由染色体断裂而形成的数百kb大小的长片段构成。常用的RNA酶抑制剂：焦炭酸二乙酯（DEPC）、异硫氰酸胍、氧钒核糖核苷复合物、RNA酶的蛋白抑制剂。影响限制酶活性的因素：1、DNA的浓度。2、DNA的甲基化程度。3、酶切消化反应的温度。4、核酸内切限制酶的缓冲液。重组DNA技术的基本原理：1、目的基因的获取。2、克隆载体的选择与构建。3、外源基因与载体的连接。4、重组DNA导入受体菌。5、重组体的筛选。6、克隆基因的表达。DNA克隆的基本过程：1、分：分离目的基因。2、切：对目的基因和载体适当切割。3、接：目的基因与载体结合。4、转：重组DNA转入受体菌。5、筛：筛选出含有重组体的受菌体。重组体筛选的方法：1、直接筛选法：抗药性选择、分子杂交法。2、间接筛选法：核酸水平（酶切图谱、核酸探针、PCR、序列测定），蛋白质水平（免疫学的技术、SDS、Westernblot、ELISA、放免、免疫沉淀、荧光抗体等）。克隆DNA的鉴定方法：1、琼脂糖凝胶电泳。2、限制性酶切图谱。3、PCR鉴定。4、分子杂交。5、序列测定。分离细胞器的离心方法（3种）。差速离心法速率区带离心法等密度离心法点突变分为：①同义突变；②错义突变；③无义突变；④终止密码突变。3种完成基因组测序的动物：鸡狗人DNA探针分类非放射性放射性质粒DNA的制备：小量法：碱裂解法大量法：CSCL密度梯度离心法。蛋白质分析法:凝胶过滤层析，超速离心，离子交换层析原核生物多肽链的合成过程：1、肽链合成的起始2、肽链的延长3、肽链合成的终止和释放。15、影响转化效率的因素1细菌的生长状态2试剂的质量3、外源DNA的质量与数量4、器皿的洁净度5、污染—尽量所有打开器皿盖的操作都在超净台中进行16、T4dna连接酶的功能T4DNA连接酶可以修复双链DNA骨架的断裂，催化限制酶酶解反应的逆反应，使退火的互补黏性末端共价连接在一起，形成新的DNA分子。主要是催化双链DNA一端的3’-OH与另一双链DNA5’端的磷酸根形成3’,5’-磷酸二酯键，使具有相同粘末端或平端的DNA末端连接起来。15、重组DNA技术的基本原理1、目的基因的获取2、克隆载体的选择与构建3、外源基因与载体的连接4、重组DNA导入受体菌5、重组体的筛选6、克隆基因的表达16、DNA克隆的基本过程分：分离目的基因。切：对目的基因和载体适当切割接：目的基因与载体结合转：重组DNA转入受体菌筛：筛选出含有重组体的受菌体一病毒DNA的提取1.CTAB法提取。2.采用UNIQ-10柱式病毒DNA抽提试剂盒：具体方法按照试剂盒上所